薄層色譜三種展開方式

總的來講平面色譜的展開有三種幾何形式即線性、環(huán)形及向心，見圖 總的來講平面色譜的展開有三種幾何形式即線性、環(huán)形及向心，見圖 7-3-12。(b) (e) 口t￡7-3-12平面色譜的基本展開形武4a)Ab>att：(r 向心此外，為提高分離效率及檢測(cè)靈敏度進(jìn)行的展開方式的改進(jìn)，設(shè)計(jì)了多種相應(yīng)的展開室，現(xiàn)分別介紹如下。(一)線性展開上行展開將點(diǎn)樣后的紙或薄層的底邊置于盛有展開劑的直立型的多種規(guī)格的平底或雙槽展開室中，展開劑由紙或薄層下端借毛細(xì)管作用上升至前沿。 這種展開方式適合于含粘合劑的硬板展開，是薄層色譜中最常用的展開方式。 平底及雙槽展開室均有三種規(guī)格， 即帶不銹鋼或玻璃蓋的20cmiX20cm,20cmiX10cm及10cmiX10cm三種。見圖7-3-13。佃 (b) (e}IS7-3-13上訐展開室（45g議色誥匕打展開室薄軌色誥職梏噩開室］（G）flC色謹(jǐn)平履婆茅室1—啟鉤:M—濾祗事訂…匪鐵五:A—濾紙槪:3—.貶幵擁在使用平底展開室時(shí)，可將展開室一端墊高，使展開劑集中在薄層板點(diǎn)有樣品的一端，這樣可以節(jié)省展開劑；如果薄層板需用展開劑飽和， 可以將薄層板放在墊高的一端，飽和后展開時(shí)可將另一端墊高，薄層板就可以接觸展開劑進(jìn)行展開，見圖 7-3-14。如果需要用與展開劑不同的溶劑蒸氣 （如揮發(fā)性酸或堿等）飽和薄層板時(shí)，可在平底展開室中放置盛有某種揮發(fā)性溶劑的小杯，效果也非常理想。(.11圖7-3-15夬心展開室gp (.11圖7-3-15夬心展開室gp ft^CCl(MCI001-嶺圖--3-口用半底懶奔室進(jìn)肓薄懇悔的預(yù)飽和泡和展開I-曹口用門一展開刑雙底展開室的優(yōu)點(diǎn)是節(jié)省展開劑，便于預(yù)飽和以及放置展開劑于一側(cè)槽中，另一側(cè)槽可放置另一種飽和蒸氣用的溶劑， 特別是代替在展開劑中互溶程度低， 容易分層的混合展開劑。另一種上行展開方式是夾心式展開，由于展開室的體積大小及飽和程度影響薄層分離而設(shè)計(jì)的，見圖7-3-15。3(RJ3(RJ?7-3-16半合成高三尖杉龍礦差向異構(gòu)曲層色謂丄一朶質(zhì)芒一酩欣S空；3鵡誠H里:4一股點(diǎn)洛-?。?！將點(diǎn)樣后的薄層板的兩邊墊以玻璃窄條，上面覆蓋一塊同樣大小的玻璃蓋板，并使其稍短于薄層板2cm以便使展開劑浸到薄層的邊緣，兩片玻璃板用不銹鋼夾子固定，放入展開劑中展開，這種方式不需飽和。小孔線形薄層技術(shù)，即將部分硅膠從薄層上除去，形成線性小孔以控制展開速度,從而增加塔板數(shù)，改善分離狀況，提高呈色靈敏度。具體作法是在距離薄層底邊 1cm處，用一頭接水泵的玻璃吸管將硅膠一點(diǎn)一點(diǎn)地吸去， 使呈一排圓形小孔或長圓形小孔（徑約2mm孔間距離約1mm，見圖7-3-16。用此法成功地分離了高三尖杉酯堿差向異構(gòu)體。上行展開是薄層色譜法中使用最廣泛的一種展開方式，但在紙色譜法中因?yàn)樾鑼V紙吊起固定，或?qū)V紙卷成筒狀才能進(jìn)行， 操作比較復(fù)雜，故在紙色譜法中上行法較少使用。下行展開平面色譜法中的下行展開， 多用于紙色譜法，圖7-3-17為紙色譜法下行展開裝置的示意圖，將點(diǎn)樣后的濾紙懸放在展開劑槽中， 用粗玻棒壓紙以固定，展開室底部可放飽和濾紙用的溶劑，展開劑從上而下流動(dòng)，下行法中展開劑除毛細(xì)管作用外還有重力作用， 因此展雙向展開在正方形紙或薄層上，將樣品點(diǎn)在一角，如圖 7-3-18的a處，先將紙或薄層板的AB一邊浸入展開劑，使它沿方向I展開一次，取出紙或薄層板，揮去展開劑，轉(zhuǎn) 90°后再將紙或薄層的bc—邊浸入另一種展開劑，沿方向n作第二次展開，第一次及第二次展開時(shí)的對(duì)照品分別點(diǎn)在b及b'處。這種方法常用于成分較多、性質(zhì)比較接近的難分離物質(zhì)的分離，如氨基酸的紙色譜常用雙向展開，實(shí)際上此法是為了增加展距，調(diào)節(jié)展開劑的極性，從而提高分離能力的展開方式。此法僅適用于定性。將適量展開劑傾入長方形的玻璃展開室中，見圖7-3-19，將點(diǎn)樣后的薄層板下端浸入展開劑0.5cm,薄層上端墊高使薄層與水平成5°-10°的角度，這樣展開劑就由下而上進(jìn)行展開。這種展開方法適用于不含粘合劑的軟板的展開。5.水平展開屬于水平展開的設(shè)備有下列幾種（1）CAMA水平展開室樣品點(diǎn)在高效薄層板的兩邊，展開劑從兩邊向中心展開，因而分離的樣品數(shù)可以增加一倍。展開室見圖7-3-20,，此設(shè)備有20cmX10cm及10cmX10cm兩種規(guī)格。

aBCAMAGHPTLCVAR系統(tǒng)將10cmaBCAMAGHPTLCVAR系統(tǒng)將10cmK10cm的高效薄層板用刮板設(shè)備分割成6條，在設(shè)備的一端有6個(gè)溶劑槽，可以分別放置6種不同的展開劑；在設(shè)備的另一端有一個(gè)展開劑槽，但有6條相應(yīng)于薄層的凹槽，可以設(shè)計(jì)6種不同的預(yù)平衡條件，包括不同的溶劑蒸氣和相對(duì)濕度，這樣可以同時(shí)選擇最佳的展開劑和預(yù)平衡條件。GAMAGVARIOKSChamber為20cmx20cm的普通薄層設(shè)計(jì)的水平展開室，見圖7-3-21，這種展開室節(jié)約展開劑，對(duì)同一塊板上的幾條樣品帶可用幾種流動(dòng)相同時(shí)展開，便于選擇最佳展開劑；可在展開時(shí)用適當(dāng)?shù)娜軇┱魵饣蛩魵鈱?duì)薄層進(jìn)行飽和，也可進(jìn)行夾心展開。1B7-3-30HPI1.C水半農(nóng)幵室欣幵笏外予Sh幵宣型閉尺I—閉盞薄層帳二一盂極：m—落割番,4■—琨m基汀一￡毘廷柢吒一^■一 二圖7-3-21LAMMVARK）KS展幵室1-簿E板門-權(quán)體心一帑別，惟護(hù)薄E用h4一固逹熹山一陽極弘一無幵利曬；7—護(hù)芯（二）環(huán)形展開展開劑自圓心向四周展開，U型展開室是為高效薄層環(huán)形展開專用的設(shè)備，見圖7-3-22。圖7-3-22環(huán)形展ff?1CAW；I堂）裁面示意31lTIPTLi：!fi”薄二角茍下；？一的戡舍金毛熱1&；3-4分舸為卿眾氣凱據(jù)喘逍汕歴謙用處這種展開方式展距短、展速快、節(jié)約展開劑、分離效率高，圓心式展開時(shí)斑點(diǎn)的比移值（Rfe）與線性展開的比移值（Rf）間的關(guān)系為：（Rfc）2=Rf,因此適用于Rf值較小的組分的分離。（三）反圓心式展開反圓心式展開是樣品點(diǎn)在薄層的周圍，展開劑自四周向圓心展開，展速快，可提高Rf值較大組分的檢測(cè)靈敏度和定量準(zhǔn)確性；反圓心式展開的專用反）型展開室見圖7-3-23。（￡7-3-23fil心廉開S<CAMAG^【「宣［剖碩示意圖財(cái)一展開劑;P—高藐薄肚極；L-薄広用于高效薄層的展開方式的比較見表7-3-3。表7-3-3HPTLC不同展開方式的比較（./books/C/1238/0.html ）（四）多次展開單向多次展開（UMD這是多次展開中最簡單的一種，當(dāng)一次展開后化合物得不到很好的分離時(shí)，可將展開后的薄層除去展開劑，再用相同展開劑沿同一方向進(jìn)行相同距離重復(fù)展開，這種操作可以反復(fù)進(jìn)行直至分離滿意為止。 此法在紙色譜中曾被研究應(yīng)用過。經(jīng)過幾次展開，斑點(diǎn)的比移值（nRf）可用下式表示：此處n為展開次數(shù)，用斑點(diǎn)間距離（△X）對(duì)展開次數(shù)n作圖，可獲得最佳間距的展開次數(shù)。一般二次展開即可，能得到最佳的分離，但還不能使斑點(diǎn)十分濃集。這種技術(shù)在薄層色譜中也得到廣泛應(yīng)用，Picman在硅膠板上用此法從銀膠菊中分離了倍半萜酯異構(gòu)體；從蒼耳中分離了蒼耳素和蒼耳明。增量多次展開（IMD）此法是指在同一塊薄層上，用同一種展開劑，沿同一方向，展距遞增的重復(fù)展開。增量多次展開常采取增加薄層長度的分?jǐn)?shù)展開方式（如展開至 1/4，1/2，3/4長度），以至最后為整個(gè)薄層長度。增量多次展開能提供比一般薄層色譜好得多的分離度，在短時(shí)間得到較多次展開，有利于斑點(diǎn)的濃集及 Rf值較小的組分的分離。在固定條件下，狹窄的斑點(diǎn)意味著分離效率及靈敏度的增加。Szabady等人對(duì)他們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了數(shù)學(xué)論證， 并將實(shí)驗(yàn)值與計(jì)算值進(jìn)行了比較。階式展開階式展開也叫分級(jí)展開，也是多次展開的一種，當(dāng)樣品中存在的各成分的極性相差很大時(shí)，很難用一種展開劑在同一塊薄層上得到分離。如用兩種或兩種以上極性不同的展開劑分別展開幾次，則可以將極性相差很大的組分在一塊薄層板上分離。利用此法進(jìn)行分離的例子很多，其中以朱敏在高效薄層板上分離定量元中11種異喹啉生物堿的例子最為成功，作者第一次用乙醚 -環(huán)己烷-甲醇（5:3:0.5）展開，除去展開劑后，用碘蒸氣薰0.5min，在波長280nm處測(cè)定四

氫黃連堿、紫堇堿、延索乙素、畢扣扣靈及海罌粟堿等5種生物堿，掃描后將薄層放入氨氣中薰10min,取出后稍揮一下表面蒸氣；第二次用乙醚-環(huán)己烷-甲醇（5:3:0.5）展開，揮去展開劑后于波長280nm處測(cè)定原阿片堿、隱品堿及!（別隱品堿等）種生物堿；第三次用甲苯-氯仿-甲醇-二乙胺（721:0.3）展開，揮去展開劑后于350nm處測(cè)定黃連堿、小蘗堿及巴馬亭3種生物堿。圖7-3-24為不同品種元及11種異喹啉生物堿的薄層色譜圖。cDefchoaaobBsQfioc

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oon?40fi_oob-oooaoofi4I0odoo8?o?0ffcoco4ooa30OSoOSefldCDFgehot口o!3口0OS□oQoa0400O0-00O0&乜Dg疥0DQOO3|]S7-3 24車同種無胡營層色營團(tuán)A— fl D-Wctnft.E-^**M 片犠略一*品每H—d■孫陀叔士L螢堤域;L中聲睛我—巴馬華If狂低爾礒〔祈?加廠*片■瞬■｛壽養(yǎng)査〔査于一Jt蒐那ILIP曲一泵紫靳韋比》7—東』匕毎開負(fù)甘一*冊(cè)如潢比hS—廉*為■贅方援升超下蔚點(diǎn)?色］十斗一熬廉幵j一利一機(jī)朋叭■一福三厭屣幵結(jié)果表明，不同種元中所含生物堿的種類及含量均有明顯差異，從而造成質(zhì)量上的差別，故所得結(jié)果對(duì)資源利用很有意義，也證明階式展開是解決復(fù)雜多組分的一種簡便有效的方法。Matysik等報(bào)道的用階式梯度薄層色譜分離洋地黃提取物中的地高辛等C種洋地黃甙，Markowski等用兩步增量梯度展開分離上述化合物。Matysik在高效硅膠薄層板上，在水平展開室中用多次梯度展開分離了 13種氨基酸的DABS（4,4N-二甲基氨基苯-4'-磺酰氯）衍生物，并與常規(guī)梯度展開進(jìn)行比較，結(jié)果見圖7-3-25、7-3-26，表7-3-4、7-3-5。

圖7-^-25寓規(guī)梯jf展開后IJAJW-氨基既混合狗的色譜圖■趕序見表3-3⑷門(rlVft Mdf￡臣駕ES7-3-2fi多;欠狒度展開后】W卜-氨旱酸混合物的色譜圖?程序見*7-3-5表7-3-4常規(guī)4步梯度展開，每步板不干燥(./books/C/1239/0.html )表7-3-5多次梯度4步展開(MGD，每步后板干燥(./books/C/1240/0.html )4.程序多次展開（PMDPerry等在總結(jié)多種展開方式的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)了程序多次展開的方法。此法由

單向展開所組成，每次展開包括兩個(gè)步驟。第一步是按常法展開，當(dāng)達(dá)到規(guī)定的展開時(shí)間后,停止展開，隨即開始第二步干燥過程。與普通多次展開不同，每次展開之間不用取出薄層板,仍與溶劑貯存器接觸，而是通過在薄層板背部輻射加熱蒸發(fā)溶劑或在板的正面通過惰性氣流使之干燥，見圖7-3-27及圖7-3-28。用氮?dú)饬鞒ト軇┦菫楸苊庖恍┎环€(wěn)定化合物受熱氧化或分解?！龈慑夹男柚?使其馬一說蚪韌蠱母泊一傭楠詭一椿制7-3-2HPMD%港H示誼圈改良的先赴霜惜嬴汽湛向F鍛經(jīng)扳的裳囲忡疲于取旃設(shè)計(jì)fit鋰開時(shí)瀋列黨覽的糕失訶攙少制攝低隊(duì)復(fù)■干寮心需中?使其馬一說蚪韌蠱母泊一傭楠詭一椿制t一氣慎人口亡一氣體,63」皿:恥PMD技術(shù)是利用在固定相上溶劑前沿界面變化提高分離度的技術(shù)。在薄層板上斑點(diǎn)的寬度遠(yuǎn)比固定相的顆粒直徑大， 以致斑點(diǎn)的后緣由溶劑帶動(dòng)向前移動(dòng)時(shí)，斑點(diǎn)的前沿還處于干燥狀態(tài)（斑點(diǎn)的前沿與后緣之間的距離為斑點(diǎn)寬度）由于樣品分子的平均移動(dòng)速率等于Rf值乘以溶劑的展速，在斑點(diǎn)的前沿開始移動(dòng)時(shí)，其后緣已移動(dòng)了Rf值乘上斑點(diǎn)的起始寬度距離，因此斑點(diǎn)的最后寬度相當(dāng)于（1-Rf）x起始寬度。見圖7-3-29。

7-3-19左薄層楓上的斑點(diǎn)再加縮■日'前辿的展開刑前沿錄犧珥慮的盾縛-血集前沿鉗是干的；訃、當(dāng)麗沿開始轉(zhuǎn)功對(duì).啟境已轉(zhuǎn)砂「出址園點(diǎn)的寬虞"的叩賂〔"理點(diǎn)的也廈睡低頁"I斥”）（再點(diǎn)的起餉世度TOC\o"1-5"\h\z在常規(guī)薄層色譜中，僅在展開時(shí)出現(xiàn)一次斑點(diǎn)濃集。如重復(fù)展開 "次，則最后的斑點(diǎn)寬度降低到（1-Rf）nx起始寬度，但實(shí)際上沒有（1-Rf）n那么明顯，主要是展開時(shí)又?jǐn)U散增寬，所以多次展開的優(yōu)點(diǎn)不是在斑點(diǎn)的寬度上， 而是增加相鄰斑點(diǎn)的距離，并經(jīng)過一個(gè)最大值后再隨著繼續(xù)展開而降低。在 PMD法中則在溶劑自薄層板上除去時(shí)尚能出現(xiàn)額外的斑點(diǎn)濃集， 斑點(diǎn)濃集的程度隨溶劑前沿退縮的速率及Rf值而不同，溶劑前沿退縮使斑點(diǎn)大致如同溶劑前進(jìn)時(shí)一樣再一次濃集。對(duì)Rf值低的斑點(diǎn)這種濃集更有效，這意味著分離效率及靈敏度的提高。PMD儀器帶有程序器，可將一個(gè)給定的分離程序參數(shù)送入程序器使之自動(dòng)完成。CAMA（自動(dòng)展開室（ADC這種展開室是CAMA公司生產(chǎn)的程序多次展開設(shè)備，存10個(gè)預(yù)編程序，可按需要設(shè)置，展開結(jié)束時(shí)自動(dòng)停止，自動(dòng)干燥薄層板，保證每次色譜展開保持相同條件，提高了色譜分離的重現(xiàn)性，減少人為誤差及展開劑的損失。CAMA（全自動(dòng)多次展開系統(tǒng)（AMDBurger在Perry等的程序多次展開的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)AMD全自動(dòng)多次展開系統(tǒng)，其特點(diǎn)是以微機(jī)預(yù)編程序，設(shè)計(jì)了一個(gè)展開劑極性很寬的梯度程序， 展開劑極性由高到低，每一次展距都比前一次增加，每次展開前溶劑按要求混合后由泵送至展開室，展開后自動(dòng)吹干，并開始下一個(gè)程序，這樣不僅每次展開后斑點(diǎn)得到濃集，從而增加了分離容量及改善了分離效果， 而且可以用給定程序在同一薄層上分離極性相差極大的組分。AMDS開室，流程見圖7-3-30。

圖7-3-30I：,扎H⑴全自話器衣展開宣流規(guī)圖I—峽開宣芒一特般舉祁一冏忡一悌段黃生部;，一投槪陀浦一儲(chǔ)氣酣汀一九空系胡一收黑飆與柱色譜中的梯度一樣，AMD弟度的溶劑也是先用強(qiáng)極性溶劑，然后逐步減小溶劑的極性，強(qiáng)極性溶劑的移動(dòng)距離短，非極性溶劑移動(dòng)距離加長，在10-25步展開時(shí)每步增長的距離約為3mm總展距約為3-10cm,見圖7-3-31甲醇、乙腈為AMD中常用的極性溶劑，中等極性為二氯甲烷、二異丙醚或；t-丁基甲基醚。正己烷是最常用的非極性成分。用于AMD勺溶劑必須能被真空干燥以及與系統(tǒng)中的溶劑成分有相似的移動(dòng)特性（Kappa值）。當(dāng)AMD展開使峰寬度濃集到只有1mm寸，移動(dòng)距離80mmS味著分離數(shù)可達(dá)80個(gè)。這就使AME與超壓流動(dòng)薄層（OPLC相當(dāng)（五）連續(xù)展開這種方法是在不增加薄層板長度而使展距加長， 使Rf值較小的組分移動(dòng)較大的距離。連續(xù)展開有兩種。I.Regis短床展開室（SB/CD短床展開室的底部有四條凸起的埂，將薄層板以 5種不同的傾斜角度放置在展開室，這樣就可以進(jìn)行5種不同展距的連續(xù)展開，同時(shí)薄層板從展室的開口處伸出，當(dāng)展開劑展至開口處就會(huì)自然蒸發(fā)，使達(dá)到連續(xù)展開的目的，結(jié)果獲得低的Rf值及好的分離，設(shè)備見圖7-3-32。B7-3-32WCD展開槽m以山m1I—簾四4L巴如訊扳：？一破棗蓋板訂一薄挖械（攝盅醍廈為l（kwx20cmh如果沒有SB/CD展開室，也可以用普通平底展開室進(jìn)行連續(xù)展開，只要在展開室頂部的蓋板上留一狹縫，使薄層板上部伸出狹縫，當(dāng)展開劑行至薄層前沿時(shí)就會(huì)不斷蒸發(fā)，見圖7-3-33。ILC.ILC.1粧逢綻展開示意圖2.蒸發(fā)展開崗=V -藝兀昱二示耳旬逢綻展開示意圖2.蒸發(fā)展開崗=V -藝兀昱二示耳旬這是另一種類型的連續(xù)展開，在這種展開中展開劑的蒸發(fā)是在薄板的整個(gè)表面及整個(gè)展開過程中發(fā)生的，見圖7-3-34。當(dāng)展開劑前緣推進(jìn)到某一位置時(shí)，流入薄層的展開劑量恰好全部蒸發(fā)掉， 此時(shí)處于穩(wěn)定態(tài)，結(jié)果溶劑必然成負(fù)速度梯度，因此蒸發(fā)展開的分離效能比一般展開方式為高， 選擇性也好。這種展開有利于Rf'值小于0.3的成分的分離。但這種方法由于沒有前沿，需要選擇一種適當(dāng)?shù)膮⒖嘉镔|(zhì)同時(shí)展開并采用相對(duì)Rf值即Ri,s值來表示組分移動(dòng)的情況。（六）程序蒸氣展開（VP-TLC在薄層分離時(shí)為要得到重現(xiàn)的Rf值以及避免“邊緣效應(yīng)”的產(chǎn)生，通常要在用展開劑蒸氣飽和的展開槽中進(jìn)行，為此Stahl設(shè)計(jì)了S-展開室。但Dezeeuw在對(duì)薄層分離的展開機(jī)理的研究中，總結(jié)了水蒸氣和溶劑蒸氣對(duì)展開的影響，認(rèn)為在不飽和的展開室中用多元展開劑可以改良分離，這是由于在吸附劑上出現(xiàn)了吸附蒸氣的濃度梯度之故。改善的程度由溶劑組分的極性和蒸發(fā)速度及所用吸附劑的特性而定。在探討了各種類型的展開室（飽和、不飽和和夾心展開室）中溶劑蒸氣作用的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)了一種程序蒸氣箱（VP-箱），見圖7-3-35。

[S7-3-35程序裁％箱示意窗[S7-3-35程序裁％箱示意窗1—解制芒枚霜&骨兇1敘咸勒It板洛一藝配夾;&—任底得哦満環(huán)的內(nèi)部務(wù)道自口和人口I入口與恒冊(cè)莽相氓采用VP箱時(shí)，薄層板是水平放置的，展開室橫割成許多小槽，槽中分別注入各種溶劑，展開時(shí)將薄層面對(duì)這些小槽，薄層既不能接觸槽壁以免斑點(diǎn)擴(kuò)散，又不能距離槽壁過大而減弱溶劑蒸氣的作用。每一小槽中的蒸氣僅對(duì)其所面對(duì)的薄層產(chǎn)生影響，這樣就能按設(shè)計(jì)的要求，在薄層上造成蒸氣程序，此蒸氣程序可使欲分離的物質(zhì)斑點(diǎn)在某薄層區(qū)域加速前進(jìn)，而在另一區(qū)域減速展開。 VP-箱的出現(xiàn)使一些不能互溶的溶劑也能組成一個(gè)溶劑系統(tǒng)而在展開過程中對(duì)分離發(fā)揮作用。例如在分離靛酚、蘇丹紅、甲基黃及4-硝基苯胺混合物時(shí)用苯為展開劑，4種染料的Rf值較低并且不能完全分離，見圖7-3-36A。

D B13D B13.』U(；-u1-15---&總B；門O (J -. V VV ”Ls\LU vgfe-C-*o:ioQd一Q你總... ..wVw gE圖——北染科在用V?-a前后的分禺情況A-N- -N-（0.假開利，笨-3L仍〔RO：20bG—VP-第*展開剤，輩;匸L古喘開劑屮小榕桿潰悻組誡的位爲(wèi)示總軋1醸酚亡絹基葦腿門一蘇孫町出一屮基敲改用苯-氯仿（8:2）為展開劑，Rf值增高，但分離不能改善，見圖7-3-36B。然而當(dāng)用以苯為展開劑的VP-箱和有一簡單的苯-氯仿蒸氣梯度時(shí)，可以大大改善分離，見圖7-3-36C，D,而且能夠在VP-箱中按照需要使板面上的任一部位以任何速度對(duì)斑點(diǎn)的移動(dòng)作加速或減速， 從而控制色譜分離過程。不論所研究物質(zhì)的極性如何，也不論溶劑及所用蒸氣組成的極性如何， 都能設(shè)法獲得高度改善的分離，因此有利于同系物、異構(gòu)體和基本結(jié)構(gòu)相同的各種衍生物的分離。這種技術(shù)對(duì)藥物化學(xué)和毒理學(xué)中的許多衍生物的分離極為有用。例如激素類、磺胺類、安眠藥類、生物堿類、農(nóng)藥、止痛藥、鎮(zhèn)痛藥、麻醉藥及精神病藥以及對(duì)毒理學(xué)和生物化學(xué)的極為重要的代謝產(chǎn)物的分析。 其次，程序蒸氣薄層在制備色譜中也十分有用，在常規(guī)制備薄層中經(jīng)常因物質(zhì)點(diǎn)樣過多而發(fā)生相互重疊， 用本技術(shù)能使區(qū)帶完全分開。（七）分離-反應(yīng)-分離展開（SRS法）Stahl介紹的分離-反應(yīng)-分離展開，也是一種雙向展開技術(shù)，與一般雙向展開法不同的是在兩個(gè)方向展開時(shí)使用同一種展開劑， 將樣品點(diǎn)在正方形薄層板一角，展開一次后將薄層板用加熱、光照或用酸、堿蒸氣等方法處理后，將薄層板轉(zhuǎn)90°,于垂直于第一次展開的方向用相同展開劑再展開第二次，顯色后凡在對(duì)角線上的成分都是性質(zhì)穩(wěn)定的成分，而不在對(duì)角線上的成分是經(jīng)處理后新產(chǎn)生的成分，因此SRS法也可稱為反應(yīng)薄層法，Stahl首先用此技術(shù)成功地研究了除蟲菊酯的失活性。用己烷-乙酸乙酯（75:25）進(jìn)行雙向展開，第一向展開后樣品經(jīng)日光或紫外光照射后再加熱，薄層上出現(xiàn)了除蟲菊酯的氧化產(chǎn)物，見圖7-3-37。酸_向展開I酸_向展開I■ :*S1.IE7-1-57除由菊誡酋輛的薄展色譜囹I偉蟲怖酣【：2-瑋電軻酣[]iJ陣蟲超?S【過牴ft舸：4—際由躺酣II址輒北物活一.比除蟲側(cè)幽同定梅：咗莪第一向展開后灣層粗劃復(fù)瑯分用紫外徴肌豹（八）超壓薄層色譜法（OPLC上述的各種薄層展開技術(shù)多是由毛細(xì)管作用使展開劑通過薄層上的吸附劑進(jìn)行組分的分離。1979年由Tyihak提出的超壓薄層色譜法是應(yīng)用加壓室（PUM室）的平面液相色譜技術(shù)。1980-1983年Tyihak等對(duì)有關(guān)理論及分析條件等的一系列研究，使這一分析技術(shù)有了進(jìn)一步發(fā)展， 1988年執(zhí)中對(duì)此法進(jìn)行了全面的介紹。1.用于超壓薄層的儀器（1）超微型加壓室（PUMS）圓形的PUM室（縱截面），見圖7-3-38。吸附層6涂布于玻璃板或塑料板7上，吸附板上面完全蓋覆一塑料膜9,由于交界空間部的氣體壓力使膜與上支架金屬板8緊貼，固定于其表面上，并用O形密閉環(huán)5封閉，因此，空間作為氣體壓力緩沖室。氣體入口3,壓力表1及開劑進(jìn)口10。安裝在上支架金屬板上的入口2用于在加壓下樣品的導(dǎo)入，上下支架金屬板的直徑分別為 230nm及235nm吸附層面積為10cmX10cm或20cmX20cm不等，上下支架金屬板用幾個(gè)夾子4固定。

圖.■—3—38商^形廷彳護(hù)加玨t jLilh-itiui 14）冨i縱嚴(yán)函」i—力計(jì)垃一加尺下樣咼述口訂一FF哺氣體退口M—夾亢：5-0哥宙陽環(huán)浦一薄匸洋輒1販軸檢/塑和恥R I■下點(diǎn)持幀矢9—PFI灣冷厲腸開柚直口（2）超壓薄層色譜儀Chrompres25超壓薄層色譜儀，包括主機(jī)和兩個(gè)泵，溶劑傳送泵 2,連接展開劑進(jìn)口閥，可連續(xù)供展開劑至加壓的薄層表面。水泵1只用兩次：在開始前以提高室壓力，完全展開后以撤空加壓室，圖7-3-39為加壓室打開時(shí)的情況，圖中上鑄件1和下鑄件3用不銹鋼榫入鎖孔6中使其鉤扣在一起。如放開鎖扣，可同時(shí)對(duì)上鑄件頂部邊上的鎖桿施加壓力。 拉動(dòng)兩個(gè)柄5,可將上蓋升起或放下。ffi7-3-39門inn叫冊(cè)巳，25〔們1仁儀結(jié)構(gòu)圖高效薄層板置于2的位置，由在上鑄件的薄膜覆蓋的緩沖室4加壓。在主機(jī)鎖定并已加壓的情況下，溶劑從展開劑孔7進(jìn)入展開劑槽8中。2.分析技術(shù)（1）薄層板的浸漬要求薄層板的邊必須用聚合物液體（惰性塑料分散體、石蠟）封閉以免展開劑從薄要求薄層板的邊必須用聚合物液體（惰性塑料分散體、石蠟）封閉以免展開劑從薄層板的邊緣溢出。（2）展開方式可進(jìn)行單向、雙向及連續(xù)展開。（3）分離技術(shù)用Chrompres25超壓薄層色譜儀將已點(diǎn)樣的高效薄層板置于控制溫度的高壓膜平面加壓下由閥系統(tǒng)引入展開劑至薄層板，展開劑的移動(dòng)可由儀器上的有機(jī)玻璃上蓋觀察，展畢，停止展開劑泵，減去壓力，取出薄板。（4）定量測(cè)定用薄層掃描儀進(jìn)行測(cè)定。OPLC法分離時(shí)間短，展速較一般薄層色譜快 5-10倍，分離效率高，斑點(diǎn)集中，靈敏度高，重現(xiàn)性好，可進(jìn)行一種展開劑展開或多步梯度展開，可進(jìn)行分析或半制備分離，節(jié)約展開劑，各步可離線、離線/在線或完全離線操作。本法最大的優(yōu)點(diǎn)是展距與時(shí)間呈線性關(guān)系，見圖7-3-40，分離效率（N值）隨展距的加長而提高，見圖7-3-41，這兩個(gè)特點(diǎn)是一般薄層色譜甚至高效薄層色譜所不具備的。例如采用高效薄層板以正丁醇-乙酸-水（4:1:1）為展開劑，展距9.3cm經(jīng)250min仍不能將21種氨基酸完全分開，并且斑點(diǎn)擴(kuò)散，但用OPLC技術(shù)，膜外壓為12atm,,展開劑流速10ml/h，展距16cm,只需47min，上述氨基酸可以得到分離。打；mu圖了-d■劇不同展開童中就距與時(shí)間的關(guān)系樣晶#r試迪陽集轉(zhuǎn)羈舍樹，薄L：:延膠SDF宙/韜精扌展開利=二撫甲烷、彊外斥工*S；俺世:初hnVhirtm審〔tu:極j：2—rt tirnr堿人弓一直和室〔uf扳h4—U曲〔！1￡桓）詁一ffi■和窘HTLCtthL暮悒刖皇〔TLCtt>了-FM宣（HFIU用>點(diǎn)一否炮和竜UIT1C粧】|0 i_由 ? ，一 」 ■5~~~ （00~~m3 麗―JKSeImmS1-H-4］不同巖開宣中展距與柱效的姜系QE91--5rm.t基岸lr闿？-』—40|一炮和室fHPTIJ:ft）:2-不飽事室〔RHLC板hmM室（WTU板〕：4—楹室FJ（撫，沾一孑連和室5」：板*皿一IW室仃丄戦）：7-FCMVTl￡#（Jiflr-RMihBFI,視】Gulyas等應(yīng)用超壓薄層與掃描技術(shù)對(duì)擬交感神經(jīng)胺劑如麻黃素以及士的寧、咖啡因、苯丙胺等興奮劑進(jìn)行了成功的分離檢測(cè)，檢出量為0.5-1.0卩g,變異系數(shù)（RSD為5%方法快速，分離效率高，具有薄層及高效液相色譜的共同優(yōu)點(diǎn)。Fater等在硅膠60F254鋁片上，在Chrompres25OPLC儀上，進(jìn)行雙向展開，分離16種巴比妥衍生物。Dugo等用兩種展開劑：丁酸乙酯-己烷（80:20）及氯仿-丁酸乙酯-己烷（9:1:15）在硅膠60F254HPTL薄層上分離柑橘類水果中含氧雜環(huán)化合物的OPLC分析。Kovacs等在硅膠HPTLCW層上用正己烷-正丁醇-三乙胺（83:9.5:7.5）500^1及正己烷-