1-血清免疫球蛋白IgG提取1_第1頁
1-血清免疫球蛋白IgG提取1_第2頁
1-血清免疫球蛋白IgG提取1_第3頁
1-血清免疫球蛋白IgG提取1_第4頁
1-血清免疫球蛋白IgG提取1_第5頁
已閱讀5頁，還剩5頁未讀， 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

鹽析法純化血清中IgG類抗體實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆整}析法提取血清免疫球蛋白IgG抗體的原理熟悉血清IgG提取純化操作過程和方法二、實(shí)驗(yàn)原理蛋白質(zhì)在不同濃度的鹽溶液中相對(duì)溶解度不同，它在一定濃度的中性鹽溶液中易于沉淀，而其他蛋白質(zhì)組分在此時(shí)不易沉淀，通過離心可將兩者分離。透析法脫鹽:

透析是將含有小分子雜質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液裝在半透膜（玻璃紙、火綿紙等）制的透析袋里放在透析緩沖液中進(jìn)行，可不斷更換緩沖液，直至雜質(zhì)被除去四、操作步驟室溫靜置30min,4℃離心，4000rpm,10min上清液（β球蛋白）沉淀為γ球蛋白紫外分光光度計(jì)測(cè)定蛋白含量沉淀溶于1mL生理鹽水移入透析袋，充分透析，沉淀溶于1mL生理鹽水,滴加飽和硫酸銨溶液0.5mL棄去上清液（含清蛋白）棄去上清液（α、β球蛋白）沉淀溶于1mL生理鹽水,滴加飽和硫酸銨溶液0.5mL室溫靜置30min,4℃離心，4000rpm,10min1mL血清＋1mL生理鹽水滴加飽和硫酸銨溶液2mL

室溫靜置30min,4℃離心，4000rpm,10min五、結(jié)果判斷

分別測(cè)OD280和OD260處的光密度值，按照公式計(jì)算蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）=1.45OD280—0.74OD260IgG正常參考值

：8．00～16．00g／L效價(jià)可用免疫雙擴(kuò)散試驗(yàn)判斷；特異性則可通過雙擴(kuò)、免疫電泳或交叉凝集試驗(yàn)進(jìn)行考察；濃度也可通過免疫濁度法等檢測(cè)。六、注意事項(xiàng)鹽的飽和度：影響鹽析的重要因素，不同蛋白質(zhì)的鹽析要求鹽的飽和度不同pH值：在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)溶解度最小越易沉淀析出。蛋白質(zhì)濃度：越大越易沉淀，使用鹽的飽和度的極限愈低。過高也易引起其他雜蛋白共沉。溫度：一般可在室溫下進(jìn)行，某些對(duì)熱特別敏感的酶，則宜低溫。脫鹽：透析時(shí)間較長(zhǎng)，常在低溫下進(jìn)行，并加入防腐劑避免變性或微生物的污染。飽和硫酸銨溶液的滴加方式：逐滴，攪拌鹽析后放置時(shí)間、離心操作的速度、時(shí)間透析袋的使用七、方法學(xué)評(píng)價(jià)硫酸銨水中溶解度高，受溫度影響小，不易使蛋白質(zhì)變性，操作簡(jiǎn)單，為鹽析中常用的中性鹽硫酸銨中含有氮，會(huì)干擾蛋白質(zhì)的測(cè)定，且溶液的緩沖能力差，故多用于大量蛋白的粗提。若要獲得純化的

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間，僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請(qǐng)與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論