中藥比較藥代動力學(xué)研究思路與應(yīng)用(宋敏)

中藥比較藥代動力學(xué)研究思路與應(yīng)用宋敏 博士副教授藥物分析教研室中國藥科大學(xué)1中藥研究現(xiàn)狀中藥研究熱點：質(zhì)量控制、藥效物質(zhì)基礎(chǔ) 質(zhì)量控制：DNA分子標(biāo)記技術(shù)建立部分動物藥的鑒別方法采用生物自顯影技術(shù)、細(xì)胞膜技術(shù)、生物活性測定等生物方法建立藥材的定性鑒別和定量分析方法采用“一標(biāo)多測”技術(shù)建立多成分含量測定方法；采用指紋圖譜分析法建立部分藥材的整體質(zhì)量控制方法--逐步由單一指標(biāo)性成分定性定量向活性、有效成分及生物測定的綜合檢測過渡

2中藥藥代動力學(xué)∈藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究目前，研究手段大多與化學(xué)藥物相類似，針對已知活性成分單體進行研究，但單味中藥即是一個化學(xué)分子庫，且有效成分不甚明確，相互間可能存在的影響關(guān)系不明確。thekavaextractincreasedtheoralbioavailabilityofkawaininratwhichwasalsothemaincauseoftheadversedrugreactionPharmacokineticsanddispositionofthekavalactonekawain:interactionwithkavaextractandkavalactonesinvivoandinvitro.Drug.Metab.Dispos.2005,33,1555–1563.中藥藥代動力學(xué)研究現(xiàn)狀3中藥藥代動力學(xué)∈藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究中藥中化學(xué)成分存在相互影響ThecoexistingingredientsinGentianamanshuricahadremarkableinfluenceonthepharmacokineticsofgentiopicrinStudiesonpharmacokineticsofgentiopicrininlongdananditscompoundpreparationinrats.Chin.Pharm.J.2003,40,212–215.中藥藥代動力學(xué)研究現(xiàn)狀4中藥藥代動力學(xué)有效成份單體與其在中藥提取物中的體內(nèi)過程并不一致，勢必在藥理作用上得以體現(xiàn)SuchasdihydrotanshinoneandcryptotanshinonewerelessactiveinacetylcholinesteraseinhibitorywhenisolatedRen,Y.H.,Peter,J.H.,Robert,C.H.,Melanie-Jayne,R.H.,2004.NovelditerpenoidacetylcholinesteraseinhibitorsfromSalviamiltiorrhiza.PlantaMed.2004,70,201–204.5中藥藥代動力學(xué)藥理作用差異salvinolicacidB,whichisthemainhydrophiliccomponentinS.miltiorrhizaBge.,showedlowereffectiveconcentrationininvitroangiogenesisstudythanthecrudeextract

CrudeextractofSalviamiltiorrhizaandsalvianolicacidBenhanceinvitroangiogenesisinmurineSVRendothelialcellline.PlantaMed.2003,69,26-32中草藥間的相互配伍反應(yīng)及與其他藥物的相互作用日益得到重視，但仍需進一步研究6 挖掘丹參藥材中共存組份之間可能存在的相互影響情況，認(rèn)識丹參藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為臨床用藥提供指導(dǎo)，為新藥開發(fā)提供理論依據(jù)。第一部分

丹參提取物有效成分比較藥代動力學(xué)7第一部分

丹參提取物有效成分比較藥代動力學(xué)丹參水溶性成分丹參酯溶性成分8丹參水溶性成分:丹酚酸B和原兒茶醛 丹酚酸B：丹參水溶性成分中含量最高和藥典規(guī)定的含量測定指標(biāo)成分。 原兒茶醛：丹酚酸B在體外可能的降解產(chǎn)物。9實驗條件ThermoFinniganSurveyorLC-TSQQuantumUltraAM液相色譜串聯(lián)四極質(zhì)譜系統(tǒng)(美國菲尼根質(zhì)譜公司)。色譜柱：Waters-C18250mm

4.6mm,5

m (預(yù)柱為C18,10mm

4.6mm,5

m)；流動相：甲醇(A)－1％冰乙酸(B)為流動相， 梯度洗脫：0min(40％A)-4min(40％A)-4.1min(80％A)-10min(80％A)；流速：1.0mL·min-1，柱后分流，0.3mL·min-1進入質(zhì)譜檢測器；進樣量：20

l。一、原兒茶醛的藥動學(xué)研究10質(zhì)譜圖Massspectraofprotocatechualdehyde(A)andinternalguaiacol(B)AB11A:BlankplasmaB:Protocatechualdehydeaddedtoblankplasma,Cprotocatechualdehyde=200.0ng·ml-1(tR=4.90min)C:Ratplasmasampletaken20minafterigofprotocatechualdehyde,Cprotocatechualdehyde=1002.7ng·ml-1(tR=4.89min)ABC12藥動學(xué)試驗設(shè)計Sprague-Dawley大鼠6只，雌雄各半，體重250±10g，由南京醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供。大鼠于受試的前晚起禁食，不禁水，于灌藥4小時后給食。大鼠灌胃給藥原兒茶醛62mg·kg-1。分別于給藥后2、5、10、15、20、30、40min和1.0、1.5、2.0、3.0h從眼底靜脈叢取血0.5mL，置肝素鈉抗凝處理過的試管中，3000r·min-1離心10min，轉(zhuǎn)移血漿，置-20℃保存待測。13原兒茶醛藥－時曲線Meanplasmaconcentration-timecurveafterigprotocatechualdehyde62mg·kg-1inrat達峰時間在10～15min，而后以極快的速度消除，180min后只能測到少數(shù)大鼠的血藥濃度。14色譜條件與質(zhì)譜條件質(zhì)譜條件 丹酚酸B是三分子丹參素和一分子咖啡酸的縮合物，雖然在負(fù)離子監(jiān)測模式下也可生成m/z717的[M-H]-，繼而經(jīng)二級碰撞脫去一分子丹參素產(chǎn)生子離子m/z519[M-198-H]-，但在相同的碰撞能量下也可生成脫去兩分子丹參素的子離子m/z321，兩者豐度相差不大，不夠穩(wěn)定如圖所示；相比較正離子監(jiān)測模式下[M+Na]＋峰m/z741較穩(wěn)定，且其子離子m/z561為脫去一分子咖啡酸后生成，豐度較強，因此被選用。ABNegativemode; B.Positivemode二、丹酚酸B的藥動學(xué)研究15丹酚酸B在大鼠體內(nèi)的藥－時曲線Meanplasmaconcentration-timecurveofsalvianolicacidBafterig.salvianolicacidB260mg·kg-1inrat16三、丹參水溶性提取物的中

丹酚酸B和原兒茶醛的藥動學(xué)灌胃試液的配制：取丹參干燥藥材粉末500g，水1000mL提取三次，每次1hour，過濾后濾液濃縮，再分別用60%,85%和95%的乙醇沉淀鞣質(zhì)，過濾，濾液減壓濃縮至干，用適量生理鹽水溶液即得，HPLC-UV測定其中丹酚酸B含量為26mg/mL，原兒茶醛為6.2mg/mL。17血藥濃度經(jīng)時過程 大鼠灌胃給藥丹參水提物（其中相當(dāng)于丹酚酸B260mg·kg-1和原兒茶醛62mg·kg-1）后的丹酚酸B和原兒茶醛的藥－時曲線。Meanplasmaconcentration-timeprofilesofsalvianolicacidBandprotocatechualdehydeinratafterigofDanshenwatersolubleextract18小結(jié)與討論原兒茶醛：大鼠灌胃給藥原兒茶醛單體后的AUC為64754.0ng/ml·min，而灌胃給藥含有相同含量原兒茶醛的丹參水提物后，其AUC只有25067.9ng/ml·min，即單體給藥的AUC為提取物給藥的2.6倍，Cmax為5.1倍，MRT為0.4倍，可見原兒茶醛單體給藥時吸收較好，而消除快；以提取物方式給藥后的原兒茶醛呈一房室模型，即只在中央室少量吸收，未向周邊室分布就開始消除。Comparisonoftheplasmaconcentration-timeprofilesofprotocatechualdehyde19小結(jié)與討論丹酚酸B：以提取物方式給藥后的丹酚酸B的AUC為98904.3ng/ml·min，是單體方式給藥后的AUC(為22569.4ng/ml·min)的4.4倍，Cmax為3.4倍，MRT為1.5倍，即提取物方式給藥使丹酚酸B的吸收變好了，消除減慢了?？赡艿脑虬ㄌ崛∥镏械牟⒋娉煞执龠M了丹酚酸B的吸收并減緩其消除，或其它成分的代謝轉(zhuǎn)化。Comparisonoftheplasmaconcentration-timeprofilesofsalvianolicacidB20小結(jié) 經(jīng)過大鼠原兒茶醛和丹酚酸B的藥動學(xué)比較研究可知，丹參藥材水溶性提取物中的其他組份可直接影響原兒茶醛和丹酚酸B的吸收及消除，分別對它們產(chǎn)生抑制和促進作用。因此，利用中藥中含有的“標(biāo)志成分”的純品（或標(biāo)準(zhǔn)品）進行藥動學(xué)研究是必要的，這也是目前中藥藥動學(xué)研究的重要方法，可以提供較好的參考，但卻不能以此代替中藥材提取物或中藥復(fù)方制劑（更復(fù)雜）的藥動學(xué)研究。21丹參脂溶性成分的大鼠藥代動力學(xué)研究 同時分析檢測7個活性成分，獲得其中5個成分的大鼠體內(nèi)的經(jīng)時過程Meanratio-timeprofileofseveralcompoundsinDanshenaceticetherextract22藥代動力學(xué)試驗設(shè)計 Sprague-Dawley大鼠18只，平分為3組，每組雌雄各半，體重250±10g，大鼠于受試的前晚起禁食，不禁水，于給藥4小時后進食。3組大鼠分別灌胃給藥丹參酮ⅡA單體8.0mg·kg-1

隱丹參酮單體5.7mg·kg-1丹參脂溶性提取物 （相當(dāng)于分別含隱丹參酮、丹參酮ⅡA為5.7和8.0mg·kg-1） 分別于給藥后5、10、15、20、30、40min和1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、24.0h從眼底靜脈叢取血0.5mL，置肝素鈉抗凝處理過的試管中，3000r·min-1離心10min，轉(zhuǎn)移血漿，置-20℃保存待測。23藥代動力學(xué)結(jié)果-1Meanconcentration–timeprofilesofcryptotanshinoneinratplasmaafterintra-gavageofcryptotanshinone(5.7mg/kg)andtanshinonesextract(23.3mg/kg)(mean±S.D.,n=6).TheCmaxandAUCweresignificantlydifferent(P<0.001).24Meanconcentration–timeprofilesoftanshinoneIIAinratplasmaafterintra-gavageofcryptotanshinone(5.7mg/kg),tanshinoneIIA(8.0mg/kg)andtanshinonesextract(23.3mg/kg)(mean±S.D.,n=6).藥代動力學(xué)結(jié)果-225結(jié)果分析與討論1.灌胃丹參酮ⅡA

或隱丹參酮單體后丹參酮ⅡA

的藥動學(xué)結(jié)果比較： 根據(jù)隱丹參酮的代謝物丹參酮ⅡATmax為25min可以發(fā)現(xiàn)，隱丹參酮在大鼠體內(nèi)很快就發(fā)生脫氫反應(yīng)被代謝丹參酮ⅡA，灌胃丹參酮ⅡA8mg/kg時AUC為499.37ng/ml·min還沒有灌胃隱丹參酮5.7mg/kg時代謝產(chǎn)生的丹參酮ⅡA的AUC為560.68ng/ml·min高，說明丹參酮ⅡA的口服吸收很不好。 比較灌胃丹參酮ⅡA和灌胃隱丹參酮后丹參酮ⅡA的消除半衰期，經(jīng)方差分析（P=0.46＞0.05）結(jié)果表明兩者無明顯差異。丹參酮ⅡA 隱丹參酮26結(jié)果分析與討論2.灌胃隱丹參酮單體或丹參脂溶性提取物后隱丹參酮的藥動學(xué)結(jié)果比較：cryptotanshinonecompartmentmodelCmaxTmaxt1/2AUC(Tn)ng/mLminminng/ml·minig.cryptotanshinoneOne9.7833.3172.662346.60ig.extractTwo51.4535.00464.928822.31P0.008＜0.050.734＞0.050.082＞0.050.027＜0.05灌胃丹參酮提取物后所測得的隱丹參酮的Cmax和AUC(Tn)分別提高了5.3倍和3.8倍。說明，丹參酮提取物中的其他成份可促進藥效成份隱丹參酮的吸收從而對其藥動學(xué)行為產(chǎn)生明顯的影響。大鼠分別灌胃給予隱丹參酮單體和丹參酮提取物后，隱丹參酮的藥－時曲線分別符合一、二房室模型，Tmax無差異。說明提取物中的其他成份對使隱丹參酮在大鼠體內(nèi)的吸收速度加快，同時使其從中央室向周邊室分布。27tanshinoneⅡAcompartmentmodelCmaxTmaxt1/2βAUC(Tn)ng/mLminminng/ml·minig.cryptotanshinoneTwo3.5825.0331.22560.68ig.tanshinoneⅡATwo3.4019.2293.16499.37ig.extractTwo34.0438.3462.629257.19P0.003＜0.051.23E-6＜0.050.357＞0.050.004＜0.05結(jié)果分析與討論3.灌胃丹參酮ⅡA單體或丹參脂溶性提取物后丹參酮ⅡA的藥動學(xué)結(jié)果比較：灌胃丹參酮提取物后所測得的丹參酮ⅡA的Cmax和AUC(Tn)分別提高了10.0倍和18.5倍。說明，丹參酮提取物中的其他成份可促進藥效成份丹參酮ⅡA的吸收、影