實驗1微生物顯微鏡的使用細菌形態(tài)的觀察和細菌的革蘭氏染色

實驗一顯微鏡油鏡的使用與保護細菌形態(tài)結構的觀察細菌的革蘭氏染色實驗目的1）掌握顯微鏡油鏡的使用和保護法2）認識細菌的基本形態(tài)與特殊結構。3）掌握細菌涂片標本的制備、革蘭氏染色法的步驟、細菌的革蘭氏染色結果。4）學習無菌操作技術實驗內容：

1）顯微鏡油鏡的使用方法；2）觀察細菌基本形態(tài)的染色裝片；3）觀察幾種常見細菌菌落；4）進行革蘭氏染色法的操作實驗原理

顯微鏡的光學系統(tǒng)中，物鏡的性能最為關鍵，影響顯微鏡的分辨率。顯微鏡物鏡中的油鏡放大倍數(shù)最大，可達100X,

油鏡使用需在載玻片與鏡頭之間滴加鏡油（香柏油）。

油鏡的基本原理總放大倍數(shù)(物鏡放大倍數(shù)x目鏡放大倍數(shù))物鏡的數(shù)值孔徑NANA=n?sin

n是指介質（空氣、浸油等）的折射率；

是孔徑角的一半。分辨率顯微鏡所能分辨的兩點之間的距離分辨率＝

/2×N.A.=/2×n?sin

（為所使用的光線的波長）油鏡的分辨率為0.2μm左右

油鏡的使用

增加照明亮度油鏡頭焦距很短，直徑很小，所需光照強度最大增加顯微鏡的分辨率顯微鏡性能的優(yōu)劣主要決定其分辨率的大小。

為什么使用香柏油？

當物鏡與裝片間的介質是空氣（空氣折射率n=1.0）時，光線會發(fā)生折射，使進入物鏡的光線減少，降低了視野的照明度。當介質為香柏油時，香柏油的折射率（1.52）與玻璃相近，光線可經(jīng)過載片直接進入物鏡而不發(fā)生折射，增加了照明度，更重要的是增加了數(shù)值孔徑達到提高分辨率的目的。顯微鏡使用方法顯微鏡各部分名稱油鏡的維護與保養(yǎng)透鏡的清潔用無水乙醇和無水乙醚（3:7/4:6）擦拭鏡頭。尤其是用完油鏡后。干燥防止生霉目的要求鞏固顯微鏡油鏡的使用方法認識細菌的基本形態(tài)和特殊結構觀察并描繪幾種常見微生物的基本形態(tài)與特殊結構微生物形態(tài)觀察實驗儀器、材料和用具顯微鏡、鏡油、鏡頭紙、擦鏡液細菌裝片：細菌三種基本形態(tài)裝片及細菌特殊結構-芽孢、鞭毛、莢膜裝片。細菌基本形態(tài)觀察（1）觀察金黃色葡萄球菌、八疊球菌裝片。注意菌體間的關系。（2）觀察枯草芽孢桿菌、大腸桿菌裝片。（3）觀察螺菌裝片。注意菌體的螺旋。

細菌的基本形態(tài)ArrangementofCocci球菌A.arrangementofcocciB.staphylococcusarrangementC.streptococcusarrangementD.sarcinaarrangementE.diplococcusarrangementArrangementsofBacilli牙孢桿菌A.arrangementsofbacilliB.singlebacillusC.streptobacillusSpiralFormsA.spiralformsB.spirillumC.spirochete(arrows)mixedwithredbloodcellsD.vibrio細菌特殊結構觀察（1）固氮菌（莢膜）裝片：注意菌體和莢膜的染色差異，莢膜的大小、以及與菌體的關系。（2）螺菌（鞭毛）裝片：注意鞭毛的染色、位置、數(shù)目、形狀和大小。（3）巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、破傷風梭菌裝片，注意孢體和菌體的染色差異，芽孢的形狀、大小和位置。CapsulestainofEnterobacteraerogenes細菌莢膜細菌的鞭毛arrangementofflagella鞭毛細菌芽孢目的要求掌握細菌涂片標本的制備方法及革蘭氏染色法的步驟識別細菌的革蘭氏染色結果學習無菌操作技術細菌革蘭氏染色實驗儀器、材料和用具(1)顯微鏡、鏡油、擦鏡紙、擦鏡液(2)結晶紫、革氏碘染液、95%酒精、番紅染液(3)載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、酒精燈、(4)枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌液體培養(yǎng)液、牙垢實驗原理實驗步驟涂片左手持菌液試管,右手持接種環(huán)在火焰中灼燒,冷卻后從試管中取菌液一滴,在潔凈載玻片上做一涂膜;從固體斜面或平板上取菌時,用無菌接種環(huán)取少量菌體,涂抹均勻于玻片上預先滴有的一滴自來水中;干燥在空氣中自然干燥用鑷子夾住涂片一端,

在火焰上連續(xù)通過三次;以載玻片在手背上試感覺不燙為宜.固定3.95%的乙醇脫色：滴加95%的乙醇，輕輕搖動玻片進行脫色，直至流出的乙醇無紫色時，水洗；染色步驟1.結晶紫初染：滴加數(shù)滴結晶紫染液于細菌涂片上，