動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)(上課用)

2.2動(dòng)物細(xì)胞工程1、簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程、條件及應(yīng)用2、對(duì)比說(shuō)出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)原理、條件、結(jié)果、培養(yǎng)目的學(xué)習(xí)目標(biāo)：動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)、生產(chǎn)單克隆抗體技術(shù)復(fù)習(xí)：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)技術(shù)、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程閱讀“動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程”并思考：1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念是什么？該技術(shù)實(shí)施的原理是什么？特點(diǎn)是什么？2、為什么要對(duì)取出的動(dòng)物組織進(jìn)行處理，使細(xì)胞分散？3、用胰蛋白酶對(duì)動(dòng)物組織進(jìn)行處理是因?yàn)榧?xì)胞間的物質(zhì)主要是什么？用胃蛋白酶可以嗎？4、胰蛋白酶真的不會(huì)把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？5、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？6、簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的操作過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念是什么？該技術(shù)實(shí)施的原理是什么？從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。

原理是細(xì)胞增殖（有絲分裂）。聚焦一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)特點(diǎn)：細(xì)胞貼壁：

懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無(wú)毒、易于貼附。細(xì)胞的接觸抑制：

當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。

細(xì)胞貼壁過(guò)程那么什么是接觸抑制？接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過(guò)程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，數(shù)量不再增加。50代以后失去接觸抑制接觸抑制動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)特性部分細(xì)胞突變，獲得不死性，向癌細(xì)胞方向發(fā)展，糖蛋白減少。2、為什么要對(duì)取出的動(dòng)物組織進(jìn)行處理，使細(xì)胞分散？分散的單個(gè)細(xì)胞容易攝取所需的營(yíng)養(yǎng)，排出代謝廢物；而用大塊組織培養(yǎng)時(shí)，內(nèi)部細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)和代謝廢物的排出都較困難。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程3、用胰蛋白酶對(duì)動(dòng)物組織進(jìn)行處理是因?yàn)榧?xì)胞間的物質(zhì)主要是什么？用胃蛋白酶可以嗎？細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)（膠原纖維）。胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當(dāng)pH大于6時(shí)，胃蛋白酶就會(huì)失去活性。胰蛋白酶作用的適宜環(huán)境pH為7.2～8.4。多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程4、胰蛋白酶真的不會(huì)把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？胰蛋白酶除了可以消化細(xì)胞間的蛋白外，長(zhǎng)時(shí)間的作用也會(huì)消化細(xì)胞膜蛋白，對(duì)細(xì)胞有損傷作用，因此必須控制好胰蛋白酶的消化時(shí)間。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程5、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官，它們的細(xì)胞分化程度低，增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，容易培養(yǎng)。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程6、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液胰蛋白酶10代細(xì)胞原代培養(yǎng)50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)細(xì)胞株無(wú)限傳代細(xì)胞系單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)一般傳至10代直至50代就不能再分裂了，這時(shí)細(xì)胞核內(nèi)遺傳物質(zhì)未發(fā)生變化，形成的細(xì)胞群傳代培養(yǎng)過(guò)程中有個(gè)別細(xì)胞傳至50代以后，由于遺傳物質(zhì)改變，失去控制，成為無(wú)限增殖的不死的癌癥細(xì)胞，形成的細(xì)胞群7、什么是原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)？為什么要進(jìn)行傳代培養(yǎng)？原代培養(yǎng)：

取材（動(dòng)物組織）→細(xì)胞分散→初次培養(yǎng)傳代培養(yǎng)：

培養(yǎng)的細(xì)胞→細(xì)胞分散→繼續(xù)培養(yǎng)進(jìn)行傳代培養(yǎng)的原因：

接觸抑制一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程8、傳代培養(yǎng)中，第10代細(xì)胞與第50代以后細(xì)胞的主要區(qū)別是什么？細(xì)胞癌變,失去接觸抑制特性。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程9、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否象植物組織培養(yǎng)那樣獲得克隆個(gè)體？需要誘導(dǎo)其脫分化的過(guò)程嗎？不可以，因?yàn)楦叨确只膭?dòng)物細(xì)胞的全能性受到抑制。不需要誘導(dǎo)其脫分化。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程原代培養(yǎng)定義：把第1代細(xì)胞的培養(yǎng)與10代以內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。過(guò)程：從動(dòng)物機(jī)體中取出組織

剪碎加胰蛋白酶細(xì)胞游離加培養(yǎng)液將細(xì)胞接種到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)

培養(yǎng)（1—2天換一次培養(yǎng)液）

細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)

長(zhǎng)成單層細(xì)胞取材（動(dòng)物組織）→細(xì)胞分散→初次培養(yǎng)傳代培養(yǎng)定義：當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)停止，這時(shí)如果要使細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)，就要及時(shí)用胰蛋白酶等，使細(xì)胞從瓶壁上解離下來(lái)，然后加入新的培養(yǎng)液，將細(xì)胞分離稀釋，并從原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，這個(gè)過(guò)程稱傳代培養(yǎng)培養(yǎng)的細(xì)胞→細(xì)胞分散→繼續(xù)培養(yǎng)

細(xì)胞株：從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，能傳到40-50代，其遺傳物質(zhì)沒(méi)有發(fā)生變化。

細(xì)胞系：傳到40-50代后有部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化，帶有癌變的特點(diǎn)，可能在培養(yǎng)條件下無(wú)限制的傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清等。）3、溫度和PH36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）保證細(xì)胞順利的生長(zhǎng)增殖思考：動(dòng)物血清的作用？主要是：提供有利于細(xì)胞生長(zhǎng)增殖所需的激素、生長(zhǎng)因子或提供合成培養(yǎng)基所缺乏的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。