專題5-DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)

專題5DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)考點(diǎn)一DNA的粗提取與鑒定1.基本原理提取原理DNA在NaCl溶液中的溶解度隨濃度的變化而改變，DNA在0.14mol／L的NaCl溶液中溶解度最低。提純?cè)恚▽?duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性及在酒精中的溶解度不同）

①酶的專一性——蛋白酶水解蛋白質(zhì)而對(duì)會(huì)對(duì)DNA不產(chǎn)生影響。（加柔嫩粉）②蛋白質(zhì)、DNA熱穩(wěn)定性不同。溫度值為60～80℃，因?yàn)樵摐囟戎档鞍踪|(zhì)變性沉淀，而DNA不會(huì)變性。③洗滌劑瓦解細(xì)胞膜，對(duì)DNA沒有影響。（3）DNA鑒定原理在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺呈現(xiàn)藍(lán)色(1)材料的選取：選用DNA含量相對(duì)

的生物組織，如非哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞（雞血）、菜花、洋蔥等。（2）材料處理：雞血（吸水脹破法），植物細(xì)胞（洗滌劑和食鹽。食鹽的作用是溶解DNA，洗滌劑的作用的溶解細(xì)胞膜）提取血細(xì)胞核物質(zhì)(蒸餾水漲破)→溶解(2mol/L的NaCl溶液)→過濾(除雜質(zhì))→析出(滴蒸餾水，降NaCl溶液濃度至0.14mol/L)→過濾→再溶解(2mol/L的NaCl溶液)→過濾→進(jìn)一步提純(體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻酒精)→鑒定。提純環(huán)節(jié)中還可加入肉嫩粉（木瓜蛋白酶），將濾液放在60～75℃的恒溫水浴箱中保溫10～15分鐘能去除濾液中的雜質(zhì)要點(diǎn)1、三次過濾

過濾目的第一次過濾用蒸餾水稀釋過的雞血細(xì)胞液獲得含核物質(zhì)的濾液第二次過濾溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液獲得含DNA的濾液第三次過濾含黏稠物的0.14mol/LNaCl溶液獲得紗布上的粘稠物，其化學(xué)本質(zhì)是DNA2、兩次沉淀析出依據(jù)的原理第一次DNA在氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為0.14mol/L時(shí)溶解度最低第二次DNA在冷卻的95%的酒精中能沉淀析出3、兩次加蒸餾水加蒸餾水的目的第一次使血細(xì)胞破裂第二次降低NaCl濃度使DNA析出4.關(guān)于DNA粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)的有關(guān)說法正確的是A充分溶解DNA的鹽溶液是0.14mol/L的NaCl溶液B實(shí)驗(yàn)中提取較純凈的DNA利用了DNA不溶于酒精的特點(diǎn)C對(duì)最后提取出DNA用二苯胺試劑鑒定時(shí)需用酒精燈直接加熱D實(shí)驗(yàn)操作過程中先后兩次加入蒸餾水的作用相同B6.下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說法正確的是A．洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜，同時(shí)也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度B．在探究洗滌劑對(duì)植物細(xì)胞DNA提取的影響實(shí)驗(yàn)中，需要控制的變量是洗滌劑和植物細(xì)胞C．常溫下，DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色D．將濾液放在60～75℃的恒溫水浴箱中保溫10～15分鐘能去除濾液中的雜質(zhì)，其原理是利用了DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同D7.下列有關(guān)“DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)原理的敘述正確的是 （） A．DNA在NaCl溶液中的溶解度，隨NaCl溶液濃度的降低而減小 B．利用DNA不溶于酒精的性質(zhì)，可除去細(xì)胞中溶于酒精的物質(zhì)而得到較純的DNA C．DNA是大分子有機(jī)物，不溶于水而溶于所有有機(jī)溶劑 D．在沸水中，DNA遇二苯胺會(huì)出現(xiàn)紫色反應(yīng)

BPCR技術(shù)擴(kuò)增DNA片段1．原理：DNA復(fù)制。

2．條件：模板、原料、酶。

3．場(chǎng)所：體外PCR擴(kuò)增儀。

4.過程：(1)變性:當(dāng)溫度上升到90℃以上時(shí)，雙鏈DNA解旋為單鏈，(2)復(fù)性：溫度下降到50℃左右，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合(3)延伸：溫度上升到72℃左右，溶液中的四種脫氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的DNA鏈，PCR擴(kuò)增技術(shù)和DNA復(fù)制的比較細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制PCR不同點(diǎn)解旋解旋酶，邊解旋邊復(fù)制80～高溫解旋，雙鏈完全分開酶解旋酶，DNA聚合酶，DNA連接酶TaqDNA聚合酶引物RNADNA或RNA能量ATP不加溫度體內(nèi)溫和條件高溫細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制PCR不同點(diǎn)子鏈合成一條鏈連續(xù)(先導(dǎo)鏈)，另一條鏈不連續(xù)，先合成片段，再由DNA連接酶連接(滯后鏈)兩條子鏈均連續(xù)合成相同點(diǎn)①提供DNA模板；②四種脫氧核苷酸做原料；③子鏈延伸的方向都是從5′端到3′端PCR技術(shù)的應(yīng)用

PCR技術(shù)模擬細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制過程，實(shí)現(xiàn)對(duì)某一段DNA的擴(kuò)增。PCR技術(shù)能在幾小時(shí)內(nèi)將極微量的DNA特異性地?cái)U(kuò)增上百萬倍，從而有效地解決了因?yàn)闃悠分蠨NA含量太低而難以對(duì)樣品進(jìn)行分析研究的難題，大大提高了對(duì)DNA分子的分析和檢測(cè)能力，被廣泛地應(yīng)用于基因克隆、基因序列分析、遺傳病診斷、古生物學(xué)研究以及刑偵破案、親子鑒定等諸多方面。考點(diǎn)二血紅蛋白的提取和分離

1.凝膠色譜法凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的方法之一。所用的凝膠實(shí)際上是一些微小的多孔球體，這些小球體大多數(shù)是由多糖類化合物構(gòu)成的，小球體內(nèi)部有許多貫穿的通道，當(dāng)一個(gè)含有各種分子的樣品溶液緩慢流經(jīng)時(shí)，相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)分子不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，只能分布在顆粒之間，通過的路程較短，移動(dòng)速度較快；相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)分子比較容易進(jìn)入凝膠內(nèi)的通道，通過的路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢。因此，樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)先流出，相對(duì)分子質(zhì)量較小的分子后流出。

2.電泳凝膠電泳法的原理是不同蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)、電量、形狀和大小不同，在電場(chǎng)中受到的作用力大小、方向、阻力不同，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)方向和運(yùn)動(dòng)速率不同。從而達(dá)到對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒