豬流行性腹瀉的診斷與治療

豬流行性腹瀉的診斷與治療

豬腹瀉（ped）是由鎮(zhèn)病毒科冠狀病毒（pedv）引起的一種高度接觸性腸道疾病，主要由肝引流、嘔吐、脫水和厭食減少引起。本病有一定的季節(jié)性,多發(fā)生于冬季12月至第2年2月寒冬季節(jié),但在夏季也可發(fā)生。PED在各年齡的豬均可感染,傳播迅速,仔豬死亡率高,給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。臨床上由于PED與豬傳染性胃腸炎(TGE)的臨床癥狀極其相似,再加上PED經(jīng)常與其他腹瀉類疾病混合感染,所以僅憑臨床癥狀來確診PED較為困難,還需進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。本文主要針對豬的流行性腹瀉的流行病學(xué)診斷、臨床及病理診斷、病原學(xué)診斷、血清學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷等進(jìn)行闡述,為該病的確診提供參考。1pedv感染的臨床癥狀豬流行性腹瀉發(fā)病有一定的季節(jié)性,多發(fā)生于冬季12月至第2年2月寒冬季節(jié),但在夏季也可發(fā)生。該病自1971年首次在英國暴發(fā)以來,相繼在比利時、德國、匈牙利、瑞士等許多歐洲國家也都暴發(fā)了PED。在1978年英國和比利時首次報道分離得到該病的病毒,確診了PEDV的感染。隨后,20世紀(jì)80年代,日本、韓國、中國等一些亞洲國家暴發(fā)了豬腹瀉病,經(jīng)熒光抗體試驗(yàn)和血清中和試驗(yàn)診斷為PEDV感染而導(dǎo)致的豬腹瀉。我國于1980年首次成功分離到PEDV,以后許多地區(qū)均有本病發(fā)生的報道。各種年齡的豬都能感染發(fā)病,哺乳仔豬、斷奶仔豬和育肥豬感染發(fā)病率達(dá)100%,成年母豬為15%~90%,其中,1周齡哺乳仔豬受害最嚴(yán)重,病死率平均50%,但有時高達(dá)90%,但4~5周齡的哺乳仔豬病死率不高,尤其是無母源抗體的哺乳仔豬不發(fā)生或僅發(fā)生輕微腹瀉,發(fā)病率和死亡率都很低。另外,癥狀的輕重程度會隨年齡的大小而有差異,年齡越小的,其癥狀表現(xiàn)的越重。1周齡的哺乳仔豬腹瀉在2~4u2005d內(nèi)因脫水而死亡,日齡較大的仔豬約1周后可康復(fù)。斷奶豬、肥育豬以及母豬常呈現(xiàn)沉郁和厭食癥狀,持續(xù)腹瀉4~7u2005d,逐漸恢復(fù)正常。成年豬可能只表現(xiàn)沉郁、厭食和嘔吐,一般經(jīng)4~5u2005d即可好轉(zhuǎn)。2豬群和給予豬一般情況的發(fā)生情況該病的臨床癥狀主要是發(fā)病豬群都呈黃色水樣腹瀉,體溫基本正常,少數(shù)病豬出現(xiàn)體溫升高l~2u2005℃,并帶有惡臭氣味的稀便等特征。本病的潛伏期長短不一,哺乳仔豬8~36u2005h,育肥豬1~3u2005d或可能潛伏時間更長。其臨床癥狀的嚴(yán)重程度變化較大,主要取決于豬群免疫力及地方流行性。一般豬通常由拉水樣糞便、嚴(yán)重脫水和代謝性酸中毒而引起死亡。哺乳仔豬和育肥豬還表現(xiàn)為嘔吐、精神沉郁、發(fā)病率較高但死亡率低等特點(diǎn),尤其在育肥后期,大多豬群在7~10u2005d后康復(fù),死亡率只有1%~3%,而這種死亡經(jīng)常在腹瀉的早期,剖檢病死豬常見背部肌肉壞死。應(yīng)激敏感性高的豬群發(fā)生PED時死亡率更高。該病的臨診癥狀與豬傳染性胃腸炎(TGE)十分相似,但程度較TGE輕,在同窩豬群中傳播的速度也比TGE慢得多。解剖豬的腹腔可以觀察到小腸內(nèi)充滿了液體,腸道內(nèi)呈現(xiàn)大量黏樣或水樣糞便,腸體膨脹,小腸壁變薄,腸系膜充血、水腫,淋巴結(jié)水腫,心臟擴(kuò)張,內(nèi)臟器官淤血。病豬的組織學(xué)變化主要為空腸中后部的小腸絨毛上皮細(xì)胞脫落、絨毛變短,但在結(jié)腸,未能觀察到組織病理學(xué)變化。3實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)藥物診斷的發(fā)展豬流行性腹瀉的實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要包括病原學(xué)診斷、血清學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷法。近幾年來,隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,原位雜交技術(shù)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)診斷技術(shù)因其快速、方便、特異性強(qiáng)、敏感和準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)已成為實(shí)驗(yàn)室最常用的檢測方法。同時,病原學(xué)診斷和血清學(xué)診斷方法也有了很大的發(fā)展,經(jīng)過不斷的改進(jìn)和完善,其診斷方法具備了簡單、快速、可重復(fù)性強(qiáng)等特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室診斷?，F(xiàn)就以上診斷方法分別敘述如下:3.1u2005u2005疾病的原始診斷3.1.1回歸動物試驗(yàn)通過采集仔豬空腸及腸內(nèi)容物或刮取空腸及腸內(nèi)容物在青霉素和鏈霉素PBS液中制成5倍懸液,然后通過離心取上清液經(jīng)220u2005nm微孔濾膜過濾,將濾液接種于Vero細(xì)胞單層上,放在37u2005℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~4u2005d,觀察細(xì)胞有無病變。有病變的細(xì)胞可見細(xì)胞面粗糙,顆粒增多,有多核細(xì)胞,細(xì)胞逐漸脫落;或?qū)V液感染試驗(yàn)仔豬,觀察仔豬的病理變化和臨床癥狀,進(jìn)行回歸動物試驗(yàn)。如武三孝將試驗(yàn)仔豬分為A、B、C、Du20054組,A組是口服加雙抗的腸液(剪右耳做標(biāo)記);B組口服未加雙抗腸液(剪左耳做標(biāo)記);C組口服腸管磨碎物(剪雙耳做標(biāo)記);D組作空白對照組?？诜┝棵拷M均為50u2005mL和30u2005mL各1頭,48u2005h后觀察臨床癥狀。回歸動物試驗(yàn)可驗(yàn)證所分離的病毒。3.1.2tgev與pedv在臨床上的復(fù)制一般來說,電鏡法可以有效的作出病原的診斷,可以通過電鏡來觀察病毒的結(jié)構(gòu)、形態(tài)特征及立體構(gòu)型等特點(diǎn)。如將感染豬小腸或病毒細(xì)胞培養(yǎng)物制成超薄切片在電鏡下觀察,則可從平面上觀察到病毒的內(nèi)部結(jié)構(gòu),形態(tài)大小,復(fù)制方式等。由于TGEV與PEDV同屬冠狀病毒,形狀非常相似,在普通電鏡下無法區(qū)別,為此需要用免疫電鏡法(IEM)。IEM法既可用已知的PEDV高免血清檢測未知抗原,又可用已知的PEDV抗原檢測未知抗體。王繼科等把抗原和抗體分別經(jīng)10u2005000u2005g/min離心,免疫復(fù)合物又經(jīng)12u2005000u2005g/min離心,最后在電鏡下直接觀察到典型的病毒粒子形成的免疫復(fù)合物,建立了具有3次篩選作用的改良的IEM法,具有簡便、直觀、快速和定性正確等優(yōu)點(diǎn)。但由于需用電鏡設(shè)備,其價格十分的昂貴,一般的實(shí)驗(yàn)室及豬場沒有這樣的條件,不適合于大規(guī)模診斷和臨床診斷。3.2u2005u2005血液清算術(shù)3.2.1pedv人工感染豬免疫熒光法(IF)一般分為直接免疫熒光法(FAT)、間接免疫熒光法(IFAT)和免疫過氧化物酶技術(shù),3種方法都可應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室診斷,但前者較為常用。若IF或免疫過氧化物酶試驗(yàn)呈陽性,并伴有腹瀉癥狀,則幾乎肯定為PEDV、。較常用的是直接免疫熒光法(FAT)檢測,是一種比較可靠的特異性診斷方法。在1990年,崔現(xiàn)蘭等應(yīng)用FAT檢查病豬小腸的冷凍切片或小腸抹片,對PEDV人工感染仔豬檢出率為91.4%,電鏡觀察陽性率為47.8%。應(yīng)用間接免疫熒光法(IFAT)對PED陽性豬血清的檢出陽性率為89%。后來,在1997年,林志雄等用適用于Vero、PK-15等傳代細(xì)胞株生長繁殖的PEDV-G1株直接免疫免疫熒光法,用該方法檢測來自有嚴(yán)重腹瀉、嘔吐和死亡癥狀的6個豬場155份仔豬腸黏膜樣品,檢出率為52%,并用血清中和試驗(yàn)檢測該6個豬場的PEDV抗體,證實(shí)被PEDV感染過。同時,應(yīng)用哈爾濱獸研所的熒光抗體方法比較,陽性符合率達(dá)95%,陰性符合率90%。并不與豬傳染性胃腸炎病毒、豬細(xì)小病毒、輪狀病毒和大腸桿菌等發(fā)生交叉反應(yīng)。證明該方法具有較高的準(zhǔn)確性和特異性、。而朱維正等用間接血凝試驗(yàn)與間接免疫熒光法(IFAT)比較后認(rèn)為IFAT法更敏感。3.2.2病毒的檢測和分型病毒活毒素與相應(yīng)的抗體結(jié)合后,失去對易感動物群的致病力,稱之為中和試驗(yàn)。中和試驗(yàn)還可以分為兔體中和試驗(yàn)、熒光抗體病毒中和試驗(yàn)、過氧化物酶聯(lián)中和試驗(yàn)等。中和試驗(yàn)主要用于:1)從待檢血清中檢出抗體,或從病料中檢出病毒,用于診斷病毒性傳染病;2)用抗毒素血清檢查材料中的毒素或鑒定細(xì)菌的毒素類型;3)測定抗病毒血清或抗毒素效價;4)新分離病毒的鑒定和分型,中和試驗(yàn)不僅可在易感的實(shí)驗(yàn)動物體內(nèi)進(jìn)行,亦可在細(xì)胞或雞胚上進(jìn)行。在1994年,我國的研究工作者林志雄等建立了PEDV微量中和試驗(yàn)。采用適應(yīng)于傳代細(xì)胞生長的PEDV-GI株,以PK-l5(豬腎細(xì)胞)作為指示細(xì)胞,48u2005h判定。研究證實(shí)本方法檢驗(yàn)準(zhǔn)確、可靠、具有較高的敏感性、可用于流行病學(xué)調(diào)查。3.2.3pedv的診斷目前,ELISA法最大的優(yōu)點(diǎn)就是可從糞便中直接檢查PEDV抗原,應(yīng)用較為廣泛。但在ELISA方法出現(xiàn)之前,國外許多學(xué)者都是利用培養(yǎng)病毒的方法直接對PEDV抗體進(jìn)行檢測。如1988年Hofmann等首次報道將PEDV適應(yīng)于Vero傳代細(xì)胞培養(yǎng)后,對PED診斷學(xué)方面的研究迅速地有了較大進(jìn)展,應(yīng)用于PED及其抗體檢測的診斷試劑制備和檢測方法的建立,但由于PEDV適應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)難度大及制備全病毒抗原存在潛在排毒的危險,致使現(xiàn)有的診斷方法僅限于實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用階段尚未能大量應(yīng)用于臨床實(shí)踐,因而急需一種安全、穩(wěn)定、快速、易于制備且特異性和重復(fù)性均高的新型診斷方法的建立以適用于大批次試樣的檢測。用ELISA方法檢測PEDV被大量應(yīng)用于臨床實(shí)踐中,該法既可用于測定抗原,也可用于測定抗體,是國際貿(mào)易指定標(biāo)準(zhǔn)診斷方法之一。根據(jù)ELISA的基本原理,發(fā)展出了雙抗體夾心法ELISA、競爭阻斷ELISA、間接ELISA以及斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(Dot-ELISA法)等診斷方法。3.2.3.腹瀉病豬糞便中超標(biāo)準(zhǔn)抗體的檢測該法屬于非競爭結(jié)合測定。它是檢測抗原最常用的ELISA,適用于檢測分子中具有至少兩個抗原決定簇的多價抗原,而不能用于小分子半抗原的檢測。朱維正(1988)應(yīng)用雙抗體ELISA法從腹瀉病豬糞便中直接檢測病毒抗原,首先將特異性抗體包被固相載體上,其次加待檢標(biāo)本,然后加酶標(biāo)抗體,使形成固相抗體—待測抗原—酶標(biāo)抗體夾心復(fù)合物,最后加底物顯色,從而檢測標(biāo)本中抗原的量。其檢測結(jié)果與電鏡檢查的陽性符合率為97.37%,陰性符合率為100%。3.2.3.elisa在pedv血清學(xué)檢測中的應(yīng)用該法可用于抗原和半抗原的定量測定,也可對抗體進(jìn)行檢測。在國外,如Rodaku2005L等利用PEDVu2005M蛋白的單克隆抗體建立了敏感性強(qiáng)、特異性高的競爭阻斷ELISA診斷方法,適于PEDV流行病學(xué)調(diào)查;Hou等利用PEDV重組N蛋白抗原建立了檢測PEDV血清的ELISA方法,為PEDV血清學(xué)監(jiān)測提供手段。Kimu2005O等建立了單克隆抗體基礎(chǔ)上的免疫組化法,該方法可在福爾馬林固定、石蠟包埋的腸組織中準(zhǔn)確而特異的檢出PEDV,可用于鑒別診斷PEDV與TGEV。3.2.3.elisa法檢測pedv此法是測定抗體最常用的方法,屬非競爭結(jié)合試驗(yàn)。在國外,Oh等建立了間接ELISA診斷方法,與病毒血清中和試驗(yàn)對比證明,該ELISA方法具有較高的敏感性和特異性,能用于PEDV的檢測。國內(nèi)對PEDV的診斷主要代表有于強(qiáng)等在1987年用PEDV吉毒株豬胎腸單層細(xì)胞培養(yǎng)物,以凍融法制備抗原,建立了間接ELISA法檢測PED抗體的方法。對30份直接免疫熒光證實(shí)的PED病豬群血清測定,97%為陽性,并證實(shí)包被板在-20u2005℃可保存2個月。3.2.3.臨床應(yīng)用檢測該方法是在常規(guī)ELISA方法的使用中不斷進(jìn)行改進(jìn)和衍化而來的一種新方法。新測定方法的問世,不僅進(jìn)一步提高了測定靈敏度、特異性,而且使ELISA技術(shù)提高了自動化程度,使其應(yīng)用更加簡便、快速。陳茹等在1997年用分離純化的PEDV抗原,建立斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Dot-ELISA)檢測豬流行性腹瀉(PED)抗體。采用此方法分別對來自加拿大、中國臺灣省進(jìn)口的種豬和海南省、廣東省種豬群的血清樣本共834份進(jìn)行了檢測,檢測的抗體陽性率達(dá)21%。用瓊擴(kuò)試驗(yàn)與Dot-ELISA比較,陰性血清樣品檢測符合率為100%,而陽性血清樣品檢測符合率為31.8%。說明后者更敏感,且該試驗(yàn)重復(fù)性較好。檢測試劑在4u2005℃保存60u2005d以及室溫保存30u2005d,其檢測效果基本一致。3.3生物學(xué)診斷技術(shù)隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步,在分子生物學(xué)研究領(lǐng)域?yàn)樨i的流行性腹瀉的診斷提供了基因分析的多種方法,很多病毒性疾病都可以通過分子生物學(xué)進(jìn)行有效的診斷,分子生物學(xué)診斷技術(shù)具有簡單方便、準(zhǔn)確性高、特異性強(qiáng)、敏感度高、檢測速度較快等優(yōu)點(diǎn)。目前,許多實(shí)驗(yàn)室診斷都普遍采用是原位雜交技術(shù)(ISH)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)2種方法來檢測PEDV。ISH是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合一種診斷技術(shù);PCR是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段,還有限制性內(nèi)切酶譜對病毒特定基因階段及相對應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析,可作出確定的被檢病毒在冠狀病毒屬中的位置。3.3.1pedv在豬腹瀉中的位雜交檢測原位雜交技術(shù)(inu2005situu2005hybridization,ISH)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門新興技術(shù),始于20世紀(jì)60年代。在20世紀(jì)60末至70年代初,美國一些專家Gall和Buongiorno-Nardelli等利用同位素標(biāo)記的核酸基因探針進(jìn)行了與細(xì)胞或組織基因定位,從而創(chuàng)造了原位雜交技術(shù)。原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列,將有放射性或非放射性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測DNA或RNA互補(bǔ)配對,結(jié)合成專一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列必須具備3個重要條件:組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物。Okjinu2005Kim等利用標(biāo)記地高辛的核酸探針(0.1u2005ng/μL)加入的300μL的標(biāo)準(zhǔn)雜交緩沖液中,在加熱板上95u2005℃加熱10u2005min后把組織切片放到冰上淬火。大約有50u2005ng的地高辛的核酸探針添插到標(biāo)準(zhǔn)雜交緩沖液中(50u2005μL)。通過一系列的處理后,標(biāo)記地高辛的核酸探針可以與人工感染仔豬的PEDV的核衣殼蛋白基因進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對,通過透射電鏡下觀察到仔豬的空腸和結(jié)腸的上皮細(xì)胞的胞質(zhì)呈黑色。從而可以證明是PEDV感染的仔豬腹瀉。該試驗(yàn)在79個陽性樣本中檢測出71個是陽性的,檢出率為91%。另外,該試驗(yàn)還證明,原位雜交技術(shù)對于檢測福爾馬林溶液固定的組織樣本較為敏感,其檢測效果較好。3.3.2檢測rt-pcr法在國外比較有代表性的研究工作者有Ishikawa等根據(jù)S基因序列設(shè)計了一對可擴(kuò)增目的片段854u2005bp的引物,成功的建立了診斷PEDV的RT-PCR法,可進(jìn)行細(xì)胞毒和糞便毒的檢測,靈敏度可達(dá)100u2005TCID50/mL,并可在8u2005h內(nèi)測出。盡管此法敏感性和特異性都很好,但由于對儀器設(shè)備等要求很高,只能適合于實(shí)驗(yàn)室診斷,不能廣泛應(yīng)用于臨床診斷。Kimu2005O等對免疫組化、原位雜交、RT-PCRu20053種方法進(jìn)行了比較,認(rèn)為RT-PCR法檢測結(jié)果的重復(fù)性最好。如Kubota等以M基因和N基因?yàn)榘谢蚪⒘薘T-PCR方法來檢測PEDV,在糞便樣品中能檢測到PEDV的最低含量為100u2005TCID50;Song等建立了鑒別診斷PEDV、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)和豬輪狀病毒(PORV)的多重反轉(zhuǎn)錄PCR(Multi-RT-PCR)為鑒別3種病毒性腹瀉病原的混合感染提供了技術(shù)支持,同時又建立了檢測PEDV的實(shí)時熒光定量PCR,對仔豬體內(nèi)PEDV的病毒載量進(jìn)行了定量;在韓國Kimu2005O等已建立了TGEV和PEDV的二聯(lián)RT-PCR診斷方法,可同時檢測出10TCID50/mL的TGEV和PEDV。但當(dāng)被檢樣品為福爾馬林固定時,采用免疫組化和原位雜交這2種方法更適合。在國內(nèi),楊群等根據(jù)GenBank上發(fā)表的豬流行性腹瀉(PEDV)和豬傳染性胃腸炎(TGEV)基因序列,針對其PEDV的M(膜蛋白)基因保守區(qū)及TGEV的S基因(纖突蛋白基因)5′端保守區(qū),各設(shè)計一對引物,建立了一種用來檢測PEDV和TGEV的多重RT-PCR的方法,同韓國引進(jìn)的PEDV和TGEV病毒抗原快速診斷試劑盒檢測結(jié)果相比較,該法具有更好的特異性和敏感性。3.3.2.pcr定量方法熒光定量PCR(fluorescenceu2005quantitativeu2005polymeraseu2005chainu2005reaction,FQ-PCR)技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。人們主要就是利用PCR擴(kuò)增在某一特定擴(kuò)增時期,擴(kuò)增產(chǎn)物是指數(shù)增長的,那么最終PCR產(chǎn)物與模板量直接相關(guān)的這種特點(diǎn)來進(jìn)行模板定量。PCR定量關(guān)鍵是選擇好擴(kuò)增呈指數(shù)增長的最佳時機(jī)和內(nèi)部設(shè)置擴(kuò)增模板對照。由于PCR定量方法是不斷放大的過程,使原有模板DNA細(xì)小差異也隨之放大。因此PCR定量技術(shù)與常規(guī)的Southern、Northern和點(diǎn)印跡雜交定量相比非常敏感。同時要求反應(yīng)條件異常嚴(yán)格。該法克服了傳統(tǒng)PCR易污染、后處理步驟繁雜冗長、缺乏準(zhǔn)確定量等缺點(diǎn),具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、定量準(zhǔn)確、速度快、全封閉反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn),在PEDV診斷方面也取得了進(jìn)展。Kim,S-H等根據(jù)Taqu2005Man探針熒光定量分析原理,FAM作為熒光報告基團(tuán),Cy5作為淬滅基團(tuán),建立了多重實(shí)時熒光定量PCR,為PEDV和TGEV病毒載量的檢測提供了技術(shù)手段,其最低檢出量分別為9×101拷貝/μL和7×101拷貝/μL。3.3.2.原位pcr技術(shù)原位PCR是Hasse等于1990年建立的技術(shù),原位PCR技術(shù)是常規(guī)的原位雜交技術(shù)與PCR技術(shù)的有機(jī)結(jié)合,即通過PCR技術(shù)對靶核酸序列在染色體上或組織細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行原位擴(kuò)增使其拷貝數(shù)增加,然后通過原位雜交技術(shù)進(jìn)行檢測,從而對靶核酸序列進(jìn)行定性、定位和定量分析。原位PCR技術(shù)大大提高了原位雜交技術(shù)的靈敏度和專一性,可用于低拷貝甚至單拷貝的基因定位,是細(xì)胞學(xué)科研與臨床診斷領(lǐng)域里的一項(xiàng)有較大潛力的新技術(shù)。原位PCR既能分辨鑒定帶有靶序列的細(xì)胞,又能標(biāo)出靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位置,對于在分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)歸有