化妝品防腐挑戰(zhàn)

防腐挑戰(zhàn)性測試標(biāo)準(zhǔn)：廣東省日化商會團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/GDCDC010-2019目錄CONTENT1防腐劑的介紹2防腐劑與微生物的關(guān)系3防腐挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)及其評價1.1防腐劑的定義：一類在化妝品中廣泛使用的原料，是指以抑制微生物在化妝品中的生長為目的，而在化妝品中加入的物質(zhì)。——《化妝品安全衛(wèi)生技術(shù)規(guī)范》（2015版）1.2防腐劑的作用：合理延長產(chǎn)品的保存期；減少產(chǎn)品使用過程中的污染；保障消費(fèi)者的健康安全；1防腐劑的介紹1.1防腐劑種類：《化妝品安全衛(wèi)生技術(shù)規(guī)范》（2015版）第三章

化妝品準(zhǔn)用組分共51類1防腐劑的介紹酚類季銨鹽類有機(jī)酸類酯類防腐劑種類1防腐劑的介紹醇類1.2防腐劑作用原理：破壞微生物細(xì)胞壁或抑制微生物細(xì)胞壁的形成影響細(xì)胞膜的功能抑制蛋白質(zhì)合成、使蛋白質(zhì)變性

1防腐劑的介紹2防腐劑與微生物的關(guān)系化妝品中的一些成分可以為微生物提供生長所需的豐富碳源、氮源等營養(yǎng)成分且其中化合物的氧化作用也可為微生物的生長提供化學(xué)能微生物的生長繁殖會使產(chǎn)品腐敗變質(zhì)，產(chǎn)生毒素、引起使用者皮膚過敏添加防腐劑增加成本對人體健康造成傷害防腐失敗致使產(chǎn)品變質(zhì)防腐劑添加量過高防腐劑添加量過低2防腐劑與微生物的關(guān)系防腐挑戰(zhàn)性試驗(yàn)是目前評價防腐劑效果的最為廣泛和經(jīng)典的檢測方法。在產(chǎn)品中接入若干種類、一定數(shù)量的微生物并定期檢測樣品中微生物的數(shù)量，根據(jù)數(shù)量的變化來評價其防腐效果。2防腐劑與微生物的關(guān)系2防腐劑與微生物的關(guān)系2.1防腐挑戰(zhàn)的試驗(yàn)?zāi)康模哼x擇既能有效抗抑菌，又可以保證化妝品質(zhì)量安全穩(wěn)定的防腐劑。確定選定的防腐劑能在預(yù)期的保質(zhì)期內(nèi)有效地控制化妝品中微生物污染。

樣品的背景微生物檢查

待測樣品加菌菌液制備樣品檢測3防腐挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)及其評價3.1樣品的背景微生物檢查10g或10mL樣品+90mL滅菌生理鹽水制成供試液不少于2個包裝單位倒卵磷脂-吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，用于細(xì)菌，培養(yǎng)條件為36℃±1℃，48小時±2小時倒卵磷脂-吐溫80沙氏瓊脂培養(yǎng)基，用于真菌，培養(yǎng)條件為28℃±2℃，5天，并于第3天起逐日觀察計數(shù)，以菌落未蔓延生長的最大天數(shù)結(jié)果報告（每100mL卵磷脂-吐溫80營養(yǎng)瓊脂中加入1mL0.5%氯化三苯四氮唑，簡稱TTC溶液）吸取1mL稀釋液至4個平皿中注：當(dāng)樣品中菌落數(shù)＜100CFU/mL（g）時，方可進(jìn)行防腐挑戰(zhàn)性測試3防腐挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)及其評價混合菌3.2菌液制備單一菌工作量較小，模擬自然界中微生物混生雜居的特點(diǎn)，更符合污染時的實(shí)際情況工作量大，但有助于研究防腐劑對于單獨(dú)菌的作用3防腐挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)及其評價菌株白色假絲酵母ATCC10231巴西曲霉ATCC16404金黃色葡萄球菌ATCC6538大腸桿菌ATCC8739銅綠假單胞菌ATCC9027PS：菌株代數(shù)均不超過5代可以使用加入世界菌種保藏聯(lián)合會的菌種保藏機(jī)構(gòu)提供的、與上述菌種等效的試驗(yàn)菌。3防腐挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)及其評價3.2.1細(xì)菌懸液制備：

待測細(xì)菌接種、培養(yǎng)36±1℃，18h-24h取出試管斜面，洗脫后得到菌懸液10倍梯度稀釋，得到目標(biāo)濃度菌懸液3防腐挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)及其評價待測霉菌接種、培養(yǎng)白念28±2℃，24-48h；黑曲28±2℃

，5-7d洗脫后得到菌懸液（過濾菌絲體）10倍梯度稀釋，得到目標(biāo)濃度菌懸液3防腐挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)及其評價3.2.2霉菌懸液制備：

100g或100mL樣品3.3待測樣品加菌1mL菌液當(dāng)選擇混菌方法時，各菌液等體積混合，樣品與菌液混合均勻后，置于室溫（20℃-25℃）避光貯存細(xì)菌濃度：1×108CFU/mL-9×108CFU/mL真菌濃度：1×107CFU/mL-9×107CFU/mL3防腐挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)及其評價3.4樣品檢測10g或10mL樣品+90mL滅菌生理鹽水制成供試液吸取1mL稀釋液平皿中進(jìn)行梯度稀釋倒入培養(yǎng)基細(xì)菌為80NA+TTC，36℃±1℃，48小時±2小時真菌為80沙氏，28℃±2℃，5天分別于加菌后第7、14、21和28天檢測化妝品中的菌落數(shù)。取樣前，充分混勻樣品3防腐挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)及其評價3.5菌落計數(shù)及計算化妝品的防腐效果可以以菌落數(shù)的對數(shù)減少值（RX）作為評價指標(biāo)。計算方式見下式RX=lgNO-lgNX式中：NO——菌液在樣品中的初始濃度NX——樣品在不同檢測時間的菌落數(shù)。3防腐挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)及其評價3.6化妝品防腐效果評價標(biāo)準(zhǔn)3防腐挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)及其評價3.6.1舉例大腸在樣品中的初始濃度（N0）第7天大腸菌落數(shù)（NX）第14天大腸菌落數(shù)（NX）第28天大腸菌落數(shù)（NX）4.1×106CFU/mL2.8×103CFU/mL1.2×102CFU/mL<10log值6.613.452.08<1RX3.164.53>5.61RX=lgNO-lgNX3防腐挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)及其評價符合標(biāo)準(zhǔn)I3.6.2舉例大腸在樣品中的初始濃度（N0）第7天大腸菌落數(shù)（NX）第14天大腸菌落數(shù)（NX）4.1×106CFU/mL2.