實(shí)驗(yàn)九 熒光分光實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)九

熒光法測(cè)定硫酸奎寧分析化學(xué)教研室分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)2023/9/301.分子熒光分析法簡(jiǎn)介2023/9/30S2S1S0T1發(fā)射熒光發(fā)射磷光系間跨越內(nèi)轉(zhuǎn)換振動(dòng)弛豫l2l1l

3

l

2T22023/9/30熒光(fluorescence)

:物質(zhì)接受光子能量后,被激發(fā),從激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)返回基態(tài)時(shí)發(fā)射的光.熒光分析法:根據(jù)物質(zhì)的熒光譜線位置及強(qiáng)度進(jìn)行物質(zhì)鑒定和含量測(cè)定的方法2023/9/301.特點(diǎn)（1）靈敏度高

比紫外-可見(jiàn)分光光度法高2～4個(gè)數(shù)量級(jí)；（2）選擇性強(qiáng)

既可依據(jù)特征發(fā)射光譜，又可根據(jù)特征吸收光譜；（3）試樣量少

缺點(diǎn)：應(yīng)用范圍小。2.熒光分析法的應(yīng)用2023/9/302.應(yīng)用(1)無(wú)機(jī)化合物的分析

與有機(jī)試劑配合物后測(cè)量,可測(cè)量約60多種元素(2)生物與有機(jī)化合物的分析

免疫熒光技術(shù)有些熒光染料可以和免疫球蛋白結(jié)合而不破壞抗體的免疫活性。這種以熒光標(biāo)記的抗體溶液可以作為特異性試劑，使免疫學(xué)技術(shù)和熒光分析方法相結(jié)合，進(jìn)行免疫細(xì)胞學(xué)的研究。這種方法具有熒光分析的敏感性和免疫反應(yīng)的特異性。2023/9/30藥物研制：組合化學(xué)藥物分析：可卡因、嗎啡、鴉片堿、巴比妥類、酚噻嗪、阿托品、異煙肼、利血平、色胺、阿司匹林、青霉素、四環(huán)素等藥物的分析(3)新藥研制和藥物分析(4)其他

環(huán)境、自來(lái)水和污水水質(zhì)監(jiān)測(cè)食品科學(xué):食品添加劑、維生素含量和霉素等的分析化學(xué)、化工和材料科學(xué)常規(guī)分析、新化合物的光化學(xué)行為研究等無(wú)機(jī)離子及其配合物的分析晶體材料的共振熒光2023/9/301.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.實(shí)驗(yàn)原理3.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容4.注意事項(xiàng)本實(shí)驗(yàn)內(nèi)容2023/9/301.熟悉VARIAN熒光分光光度計(jì)的原理和使用2.掌握激發(fā)光譜和發(fā)射光譜的概念及測(cè)定方法3.掌握用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行熒光定量分析實(shí)驗(yàn)?zāi)康?023/9/30VARIAN熒光分光光度儀

2023/9/30熒光分光光度計(jì)基本流程如圖：2023/9/30光譜掃描的實(shí)現(xiàn):儀器有兩套光柵分光系統(tǒng)，根據(jù)激發(fā)和發(fā)射光柵動(dòng)的形式可形成兩種光譜：激發(fā)光譜：激發(fā)光柵轉(zhuǎn)動(dòng)發(fā)射光譜：發(fā)射光柵轉(zhuǎn)動(dòng)2023/9/30Lightsource

excitation

emissionSampleDetectorMonochromatorMonochromator

熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜

固定發(fā)射光波長(zhǎng).以不同波長(zhǎng)的入射光激發(fā)熒光物質(zhì),化合物發(fā)射的熒光強(qiáng)度F與入射光波長(zhǎng)的關(guān)系曲線λ

200250300350400450500nm2023/9/30

excitation

emissionSampleDetectorMonochromatorMonochromatorLightsource2.發(fā)射光譜(或熒光光譜

)固定激發(fā)光波長(zhǎng).化合物發(fā)射的熒光中各種波長(zhǎng)組分的熒光強(qiáng)度.200250300350400450500nm2