急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

AcuteOralToxicityTest葛均輝2012.4.24一、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、動物的稱重、編號、隨機(jī)分組；2、受試物的配制（等容量稀釋）；3、小鼠灌胃染毒操作技術(shù)；4、急性毒性反應(yīng)觀察；5、LD50（機(jī)率單位法）的計(jì)算和毒性分級。二、材料和試劑1、實(shí)驗(yàn)動物

選用健康成年小鼠（18~22g）。試驗(yàn)前要對動物飼養(yǎng)觀察3~7天，以適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境，并淘汰不健康或體重不符合要求的動物；2、器材

注射器，灌胃針，體重稱，吸管，吸球，容量瓶，燒杯，棉棒，試劑瓶；3、試劑

DDV（80g/100ml），苦味酸，蒸餾水。三、操作步驟（一）實(shí)驗(yàn)動物與分組首選健康成年小鼠(18~22g)和大鼠(180~220g)，也可選用其它敏感動物。同性別實(shí)驗(yàn)動物個(gè)體間體重相差不得超過平均體重的10%。本次試驗(yàn)取體重18~22g的小鼠，試驗(yàn)時(shí)，將小鼠稱體重、編號、按隨機(jī)分組原則，將實(shí)驗(yàn)動物分成5組，每組8只。動物編號

染色法

126397854（二）劑量選擇首先了解受試化學(xué)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，查閱與受試化學(xué)物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)相近似的其它化學(xué)物毒性資料（LD50），以此值作為受試化學(xué)物的預(yù)期毒性中值，即中間劑量組。上下各推1~2個(gè)劑量組，進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。注意，動物種系和給藥途徑相同的毒性資料才可用作預(yù)期毒性中值。LD0、LD01、LD100。各劑量組的間距可根據(jù)LD50計(jì)算方法要求按等比級數(shù)或等差級數(shù)安排。本實(shí)驗(yàn)用機(jī)率單位法計(jì)算LD50，要求按等比級數(shù)排列，常用1：0.8，如敵敵畏的最高劑量為125mg/kg，其次劑量組為125mg/kg×0.8=100mg/kg，依次類推為80、64和51.2mg/kg五個(gè)劑量組。（三）受試化學(xué)物配制與稀釋1、溶劑

水溶性受試化學(xué)物以蒸餾水為溶劑配制成溶液，脂溶性受試化學(xué)物以吐溫-80、二甲基亞砜、植物油、淀粉等配制成混懸液。2、受試物的配制

（等容量稀釋）

根據(jù)計(jì)算結(jié)果精確量取需要的受試物的量，稀釋成需要的濃度。配制步驟取1.5625mlDDV，用水稀釋至100ml，濃度為12.5mg/ml，為（1）液；?。?）液80ml，稀釋至100ml，濃度為10mg/ml，為（2）液；?。?）液80ml，稀釋至100ml，濃度為8mg/ml，為（3）液；取（3）液80ml，稀釋至100ml，濃度為6.4mg/ml，為（4）液；?。?）液80ml，稀釋至100ml，濃度為5.12mg/ml。按10ml/kg體重經(jīng)口灌胃小鼠，則染毒劑量分別為125、100、80、64、51.2mg/kg。（四）灌胃1、灌胃量實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)禁食（一般12~16h），不限制飲水。然后對各組動物用經(jīng)口灌胃法一次染毒。一次灌胃液體積為小鼠0.2~1ml，大鼠1~4ml，豚鼠l~5ml，染毒后繼續(xù)禁食3~4h。各劑量組動物給予受試物的體積均為10ml/kg。不同體重小鼠灌胃容量計(jì)算：小鼠灌胃容量V(ml)=體重(g)×10(ml/kg)

=體重(g)×10ml/1000g2、灌胃操作小鼠、大鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠頭部兩耳后皮膚，無名指或小指將尾部緊壓在手上，使小鼠腹部向上，盡量使其體位垂直，注意使動物的上消化道固定成一直線。右手持連著灌胃針的注射器，將灌胃針由動物口腔側(cè)插入，避牙齒，沿咽后壁緩緩滑入食管。若遇阻力，可輕輕上下滑動探索，一旦感覺阻力消失，即深入至胃部，隨后將受