動(dòng)物試驗(yàn)基本操作技術(shù)-基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院-河北大學(xué)課件

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作技術(shù)河北大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作技術(shù)河北大學(xué)主要內(nèi)容實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇、抓取與固定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的手術(shù)實(shí)施實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處死主要內(nèi)容實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇、抓取與固定2一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇、抓取與固定一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇、抓取與固定3（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇、抓取與固定1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗和其可行性、科學(xué)性等。（1）常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：犬、家兔、貓、大鼠、豚鼠、小鼠、雞、蛙、蟾蜍等。（2）動(dòng)物的選擇依據(jù)

①種屬選擇：豚鼠易致敏，家兔體溫變化靈敏。②品系選擇：近交系、突變系、雜交一代、封閉群、非純系；無菌動(dòng)物、指定菌動(dòng)物、SPF動(dòng)物、帶菌動(dòng)物③個(gè)體選擇：根據(jù)年齡、性別、及健康狀況（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇、抓取與固定4（1）小鼠捉拿時(shí)先用右手將鼠尾抓住提起，放在較粗糙的臺(tái)面或鼠籠上，在其向前爬行時(shí)，右手向后拉尾，用左手拇指和食指抓住小鼠的兩耳和頭頸部皮膚，拉直四肢并用左手無名指壓緊尾和后肢，右手即可作注射或其他實(shí)驗(yàn)操作。取尾血及尾靜脈注射時(shí)，可將小鼠固定在金屬或木制的固定器上。2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取與固定（1）小鼠捉拿時(shí)先用右手將鼠尾抓住提起，放在較粗糙的臺(tái)面或鼠5（2）大鼠大鼠兇猛，實(shí)驗(yàn)者應(yīng)戴帆布手套，用右手將大鼠尾抓住提起，放在較粗糙的臺(tái)面或鼠籠上，抓住鼠尾向后輕拉，左手抓緊兩耳和頭頸部皮膚，余下三指緊捏鼠背部皮膚，如果大鼠后肢掙扎厲害，可將鼠尾放在小指和無名指之間夾住，將整個(gè)鼠固定在左手中，右手進(jìn)行操作。也可借助專用布袋或鼠盒進(jìn)行操作。（2）大鼠大鼠兇猛，實(shí)驗(yàn)者應(yīng)戴帆布手套，用右手將大鼠尾抓住6（3）豚鼠豚鼠具有膽小易驚的特性，因此抓取時(shí)要求快、穩(wěn)、準(zhǔn)。一般方法是：先用右手掌迅速、輕輕地扣住豚鼠背部，抓住其肩腳上方，以拇指和示指環(huán)握頸部，對(duì)于體型較大或懷孕的豚鼠，可用另一只手托住其臀部。（3）豚鼠豚鼠具有膽小易驚的特性，因此抓取時(shí)要求快、穩(wěn)、準(zhǔn)。7（4）蛙和蟾蜍用左手將動(dòng)物貼緊在手掌中，并以左手中指、無名指、小指壓住其左腹側(cè)和后肢，拇指和食指分別壓住左、右前肢，右手進(jìn)行操作。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，可用圖釘，采取俯臥位或仰臥位固定在蛙板上。抓取蟾蜍時(shí)，禁忌擠壓兩側(cè)耳部毒腺，以免毒液射入眼中。（4）蛙和蟾蜍用左手將動(dòng)物貼緊在手掌中，并以左手中指、8（5）家兔

一手抓住兔頸部的被毛與皮膚，另一手托其臀部或腹部，使其軀干的重量大部分集中在手上，然后稱重。家兔麻醉后固定方式分仰臥位和俯臥位，仰臥位固定時(shí)，四肢用粗棉線固定，頭用家兔頭固定夾固定或用棉線鉤住家兔門齒后再固定在家兔臺(tái)頭端鐵柱上；進(jìn)行頭顱部手術(shù)時(shí)，多采用仰臥位固定配合馬蹄形固定器進(jìn)行固定。（5）家兔一手抓住兔頸部的被毛與皮膚，另一手托其臀9二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉101、不同的動(dòng)物，選擇不同的麻醉藥物、實(shí)施不同的麻醉方法。

2、麻醉藥物應(yīng)用原則：

依據(jù)動(dòng)物體重計(jì)算麻醉藥物的劑量；

依據(jù)動(dòng)物生命體征的變化控制給藥的速度；

掌握寧少勿多、分階段給藥的方式。1、不同的動(dòng)物，選擇不同的麻醉藥物、實(shí)施不同的麻醉方法。

11（一）麻醉劑種類應(yīng)用范圍：適用于各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的全身麻醉作用機(jī)制：抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)，使肌肉松弛作用特點(diǎn)：麻醉安全系數(shù)較大、麻醉深度易于掌握等優(yōu)點(diǎn)。性狀：無色透明、極易揮發(fā)、具刺激氣味的特性缺點(diǎn)：對(duì)上呼吸道粘膜有較強(qiáng)的刺激作用，使分泌物增加，易發(fā)生呼吸道阻塞。其他藥物：三氟乙烷、氯仿等，在教學(xué)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較少。

1、非吸入性麻醉劑戊巴比妥鈉氯胺酮氨基甲酸乙酯（烏拉坦）水合氯醛等。2、吸入性麻醉劑----乙醚（常用）（一）麻醉劑種類應(yīng)用范圍：適用于各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的全身麻醉1、非12（二）麻醉劑用量1、全身麻醉

（1）靜脈注射麻醉：戊巴比妥鈉：3％，1ml/kg

烏拉坦：25%,4ml/kg（2）腹腔注射：戊巴比妥鈉：0.5%，0.1ml/10g（3）吸入麻醉：乙醚

2、局部麻醉:

1％普魯卡因

頸部2～3ml，股部1～2ml（二）麻醉劑用量1、全身麻醉

（1）靜脈注射麻醉：13（三）麻醉給藥途徑1、選擇給藥途徑的原則------

可腹腔注射的藥物不必通過靜脈給藥，

可肌肉注射的藥物也應(yīng)避免腹腔注射。

給藥途徑應(yīng)按肌肉、腹腔、靜脈的順序。2、給藥途徑（1）肌肉注射------主要用于注射不溶于水的藥物。

注射部位：肌肉發(fā)達(dá)、血管豐富的部位，如大鼠、小鼠和豚鼠的大腿外側(cè)緣；家兔、貓、犬、猴的臀部或股部。注射時(shí)固定動(dòng)物，剪去注射部被毛，與肌肉層組織接觸面呈60度角刺入注射器針頭，回抽無回血后注入藥液（小動(dòng)物可免回抽針?biāo)ǎ?。注射完畢后用手輕輕按摩注射部位，促進(jìn)藥液吸收。（三）麻醉給藥途徑1、選擇給藥途徑的原則------

14（2）腹腔注射------嚙齒類動(dòng)物注射部位：是左下腹部。進(jìn)入腹腔有落空感，回抽無血液或尿液時(shí)即表示未傷及肝臟和膀胱。（3）靜脈注射------注射部位：根據(jù)動(dòng)物的種類選擇注射部位。犬多選用后肢小隱靜脈，豚鼠和兔多選用耳緣靜脈。大鼠和小鼠可從尾靜脈注射。（2）腹腔注射------嚙齒類動(dòng)物15

①兔耳緣靜脈注射-----

將動(dòng)物同定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，剪去耳緣部位的被毛，用乙醇輕輕擦拭，耳緣靜脈即清晰可見。用左手食指和中指夾住靜脈近心端，拇指和小指夾住耳緣部分，以左手無名指和小指放在耳下作墊，待靜脈充盈后，有手持注射器使針頭盡量由靜脈遠(yuǎn)心端刺入，順血管方向平行、向心端刺入。注射完畢抽出針頭，用棉球壓迫注射部位數(shù)分鐘，以免出血。①兔耳緣靜脈注射-----16②尾靜脈注射：鼠尾靜脈有3根，兩側(cè)及背側(cè)各1根，左、右兩側(cè)尾靜脈較易固定，應(yīng)優(yōu)先選擇。注射時(shí)，先將鼠固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中，露出尾部組織，用45～50℃溫水浸泡鼠尾l～2min或用75％乙醇溶液反復(fù)擦拭，以達(dá)到消毒、擴(kuò)張血管和軟化表皮角質(zhì)的目的。注意藥液推入靜脈時(shí)是否通暢，若阻力較大，注射部位皮下發(fā)白，表示針頭未刺入靜脈內(nèi)，應(yīng)換部位重新注射；若推入藥液順利無阻，則表明已刺入靜脈內(nèi)，應(yīng)把針頭和鼠尾固定好，不要晃動(dòng)，緩緩將藥液推入，注射完畢，用棉球在注射部位輕輕揉壓，使血液及藥液不致回流而漏出。②尾靜脈注射：鼠尾靜脈有3根，兩側(cè)及背側(cè)各1根，左、右兩側(cè)尾17（四）動(dòng)物麻醉技巧與效果的判斷1、動(dòng)物麻醉技巧

（1）靜脈注射麻醉藥物時(shí)，開始給藥的速度可略為快些，即先給予總量的1／3，以求動(dòng)物能順利、快速地渡過興奮期。給后2／3劑量的速度宜慢；邊注射、邊注意觀察動(dòng)物的生命體征變化（心跳、呼吸、肌肉松弛情況等）。當(dāng)確定已達(dá)到麻醉效果時(shí)，即可停止給藥，不必急于將剩余的麻醉藥物全部推入。

（2）若麻醉劑量已給足，動(dòng)物仍有掙扎、興奮等表現(xiàn)時(shí)，應(yīng)觀察一段時(shí)間，確認(rèn)動(dòng)物是否已渡過興奮期，切不可盲目追加麻醉藥物。避免因麻醉過深，抑制心跳呼吸中樞而導(dǎo)致動(dòng)物死亡。（四）動(dòng)物麻醉技巧與效果的判斷1、動(dòng)物麻醉技巧182、動(dòng)物麻醉效果的判斷（動(dòng)物達(dá)到麻醉時(shí)的基本狀態(tài)）：（1）肢體肌肉松弛；（2）呼吸平穩(wěn)；（3）角膜反射遲鈍。

2、動(dòng)物麻醉效果的判斷（動(dòng)物達(dá)到麻醉時(shí)的基本狀態(tài)）：19（五）麻醉注意事項(xiàng)

1、乙醚是揮發(fā)性很強(qiáng)的液體，易燃易爆，使用時(shí)應(yīng)遠(yuǎn)離火源。平時(shí)應(yīng)裝在棕色玻璃瓶中，儲(chǔ)存于陰涼于燥處，不宜放在冰箱內(nèi)，以免遇到電火花時(shí)引起爆炸。2、動(dòng)物麻醉后可使體溫下降，要注意保溫。在寒冷季節(jié)，注射前應(yīng)將麻醉劑加熱至與動(dòng)物體溫相一致的水平。3、犬、貓或靈長(zhǎng)類動(dòng)物，手術(shù)前8～12h應(yīng)禁食，避免麻醉或手術(shù)過程中發(fā)生嘔吐。家兔或嚙齒類動(dòng)物無嘔吐反射，術(shù)前無需禁食。4、靜脈麻醉時(shí)，應(yīng)注意給藥速度，密切觀察動(dòng)物生命體征的變化，出現(xiàn)呼吸節(jié)律不整和心動(dòng)過緩時(shí)，應(yīng)立即停止給藥。（五）麻醉注意事項(xiàng)1、乙醚是揮發(fā)性很強(qiáng)的20（六）固定動(dòng)物當(dāng)麻醉效應(yīng)趨于平穩(wěn)時(shí)，即可固定動(dòng)物。固定動(dòng)物的體位主要有仰臥位、俯臥位、側(cè)臥位等。也可用特制的盒及相應(yīng)的工具進(jìn)行特殊的固定。但要注意的問題是，隨著麻醉藥物的失效，動(dòng)物可能因掙扎、躁動(dòng)等而發(fā)生失去控制的情況。（六）固定動(dòng)物當(dāng)麻醉效應(yīng)趨于平穩(wěn)時(shí)，即可固定動(dòng)物。固定動(dòng)物21三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的手術(shù)實(shí)施三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的手術(shù)實(shí)施221、確立手術(shù)方案，明手術(shù)中需特別注意的問題。2、按技術(shù)要求進(jìn)行操作3、手術(shù)過程中注意