電針足三里、氣海穴對(duì)腎氣虛大鼠血清胃泌素、d-木糖濃度的影響

電針足三里、氣海穴對(duì)腎氣虛大鼠血清胃泌素、d-木糖濃度的影響

中醫(yī)認(rèn)為，脾臟是主體的，是后天生物和氣生物的來源，在人類生活活動(dòng)中起著非常重要的作用。脾氣虛多表現(xiàn)為健運(yùn)無權(quán)、氣血生化無源等一系列表現(xiàn)。所以研究其本質(zhì),首先要從脾主運(yùn)化著手。隨著醫(yī)學(xué)水平的提高,脾氣虛證作為多種疾病的一個(gè)癥狀分型被廣泛的研究。大量中醫(yī)臨床資料顯示,針刺治療此病證療效確切,副作用小。然而臨床治療此病癥的針灸處方不盡相同,故本研究通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法,來驗(yàn)證《針灸處方學(xué)》中健脾穴組:“足三里、氣?！?偏重補(bǔ)先、后天,調(diào)全身之氣機(jī);“脾俞、胃俞”,為臟腑之氣輸注,偏重補(bǔ)局部和兩穴組配合應(yīng)用的效果,篩選療效最佳的針灸處方,為基礎(chǔ)科研提供可靠依據(jù),同時(shí)提高臨床治療效果,縮減治療周期。1材料和方法1.1大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心清潔級(jí)大鼠50只,雌雄各半,體重180~230g,鼠齡3個(gè)月左右。購于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)5d,后將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為空白組(10只)、模型組(10只)、“足三里、氣?！苯M(10只)、“脾俞、胃俞”組(10只)和兩穴組聯(lián)合應(yīng)用組(10只),共5組。明暗周期12h,室內(nèi)溫度18~25℃,濕度40%~50%。1.2木糖的試劑盒胃泌素放免試劑盒(北京北方生物技術(shù)研究所,批號(hào):20080220),木糖試劑盒,木糖。華佗牌毫針(0.35mm×13mm,蘇州醫(yī)療用品有限公司),離心機(jī)(LD5-2,北京醫(yī)用離心機(jī)廠),低溫度冰箱(-20℃),電子天平,韓式電針儀。1.3制備大濃度濃鹽水大黃購于沈陽同仁堂藥房。100%大黃制劑液:大黃以100mL水中放入100g大黃的比例,用蒸餾水浸泡30min,然后用武火煮沸后,再用文火煮5min,冷卻后過濾,于-4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?.4造模指標(biāo)的檢測模型組及3個(gè)針灸實(shí)驗(yàn)組,均以大黃苦寒瀉下、飲食失節(jié)二因素復(fù)制脾氣虛證模型。避免單因素造成的脾虛狀態(tài),因?yàn)榇朔N脾虛狀態(tài)多為一過性的,自愈性強(qiáng),停止給藥后,癥狀會(huì)自然消失。根據(jù)陳小野教授的文獻(xiàn)顯示,這種造模檢測各項(xiàng)指標(biāo)最為明顯,故選此法。按以下方法處理:(1)大黃法:每日早7:00-8:00以每只12.5mg/kg灌服大黃制劑液,日1次;(2)飲食失節(jié)法:每日上午8:00給食,下午18:00撤食。正常組每日上午以3mL/只灌服生理鹽水,日1次,自由飲食,共12d。在第一階段結(jié)束后,隨機(jī)從正常組取出2只大鼠,模型組各取出2只,腹腔抽血,處死,進(jìn)行造模指標(biāo)的檢測。其余大鼠繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。1.5中醫(yī)灌胃用藥組自實(shí)驗(yàn)第17天,正常組、造模組給予生理鹽水灌胃每只3mL/d,針灸治療組分別為“足三里、氣?！苯M,“脾俞、胃俞”組,和兩穴組配合應(yīng)用組,共8d,再次腹腔抽血,處死。1.6受熱迫致神“便率規(guī)劃法”實(shí)驗(yàn)全程觀測動(dòng)物的體重、食量、糞便情況(軟便、便溏、泄瀉,受激排便率增高),懶動(dòng),拱背,扎堆,眼瞇,毛色枯黃,嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)受驚動(dòng)時(shí)無神,抓取時(shí)掙扎無力。全部大鼠腹腔抽血,分離血清,檢測血清胃泌素和D-木糖濃度,采血后解剖,摘取胸腺和脾臟準(zhǔn)確稱重,算出相應(yīng)的指數(shù)。1.7統(tǒng)計(jì)方法數(shù)值采用x—±s表示,兩組間比較用t檢驗(yàn),方差齊性檢驗(yàn),方差分析檢驗(yàn),全部資料應(yīng)用Spss軟件分析完成。2結(jié)果2.1脾虛證模型與診斷2.1.1越界、為染色造模大鼠于第2、3天出現(xiàn)軟便,泄瀉,多為便溏;第6、7天時(shí),出現(xiàn)成群蜷縮,扎堆,拱背,懶動(dòng);第10天以后,可見消瘦,受激排便率明顯增多,同時(shí)出現(xiàn)毛發(fā)枯稿,受驚動(dòng)明無神,抓取時(shí)掙扎無力。2.1.2大鼠血清胃泌素、木糖濃度、臟、胸腺指數(shù)變化造模12d后,隨機(jī)取正常組、模型組和3個(gè)實(shí)驗(yàn)組各取2只大鼠,共10只行腹腔抽血,后解剖。見表1。模型組血清胃泌素、木糖濃度、脾臟、胸腺指數(shù)均明顯下降,與正常組比較均有顯著差異(P<0.01)。結(jié)合動(dòng)物一般狀況,脾氣虛證造模成功。2.2對(duì)模型組與單純刺激“脾電商、胃認(rèn)知者”穴的聯(lián)合應(yīng)用見表2。不同健脾穴組對(duì)血清胃泌素影響不同。針刺治療8d后,3個(gè)實(shí)驗(yàn)組胃泌素水平與模型組相比,均有明顯增高趨勢,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),兩穴組聯(lián)合應(yīng)用要優(yōu)于單純刺激“脾俞、胃俞”穴組,(P<0.05)。但單純刺激“足三里、氣?！毖ńM與“脾俞、胃俞”穴組和聯(lián)合應(yīng)用穴組相比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2.3兩穴組聯(lián)合應(yīng)用更有利于顯著提高生活質(zhì)量,但單獨(dú)刺激的“脾電商、胃物流”穴組和“脾俞、胃物流”穴組聯(lián)合應(yīng)用3個(gè)實(shí)驗(yàn)組血清木糖濃度與模型組相比,均有明顯增高趨勢,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),兩穴組聯(lián)合應(yīng)用要優(yōu)于單純刺激“脾俞、胃俞”穴組,(P<0.05)。2.4比較兩組在不同組不同療效情況“足三里、氣?！毖ńM、聯(lián)合應(yīng)用穴組與模型組相比,均有升高趨勢,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?！捌⒂帷⑽赣帷毖ńM與模型組相比,差異不明顯,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3對(duì)臟器組織中d-木糖含量的影響胃泌素作為最重要的一種胃腸激素,具有促進(jìn)胃酸、胃蛋白酶的分泌、胃腸蠕動(dòng)、胃腸黏膜增生和刺激內(nèi)因子、膽汁、胰酶及碳酸氫鹽分泌的作用,對(duì)胃十二指腸黏膜及壁細(xì)胞群有營養(yǎng)作用,對(duì)消化道吸收、分泌、運(yùn)動(dòng)以及代謝活動(dòng)有調(diào)節(jié)作用。脾氣虛證時(shí),胃竇G細(xì)胞數(shù)量減少,胞漿內(nèi)分泌免疫反應(yīng)顆粒細(xì)小,著色變淺,釋放胃泌素減少,血清胃泌素水平降低。血清D-木糖濃度一直是較為公認(rèn)的測試脾氣虛患者近端小腸消化和吸收功能的極其敏感的指標(biāo)。脾氣健則衛(wèi)氣旺,“四季脾旺不受邪”,脾虛證患者機(jī)體多有免疫功能紊亂的表現(xiàn),而脾和胸腺為機(jī)體主要免疫器官,在重量上可以一定程度的反映其內(nèi)部淋巴細(xì)胞數(shù)量,故用脾指數(shù)=脾(mg)/體重(g),胸腺指數(shù)=胸腺(mg)/體重(g),來間接地了解體內(nèi)淋巴細(xì)胞總體水平。本實(shí)驗(yàn)以動(dòng)物模型研究電針刺激“足三里、氣?！?“脾俞、胃俞”和二組配合應(yīng)用對(duì)脾氣虛證大鼠血清胃泌素、D-木糖濃度、脾和胸腺指數(shù)的影響。結(jié)果顯示,3個(gè)針灸實(shí)驗(yàn)組與模型組相比,GAS和D-木糖測定均有明顯的升高趨勢,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而且“足三里、氣