沙門(mén)氏菌的檢驗(yàn)過(guò)程

因沙門(mén)氏菌是最常見(jiàn)的食源性細(xì)菌病原體，因此在本節(jié)中重點(diǎn)介紹沙門(mén)氏菌的檢驗(yàn)。沙門(mén)氏菌是食物傳播病原菌中研究最活躍的細(xì)菌。從食品中分離和鑒定沙門(mén)氏菌，當(dāng)前通用的方法學(xué)分5個(gè)步驟：1.前增菌第一步使食物樣品在含有營(yíng)養(yǎng)的非選擇性培養(yǎng)基中增菌，使受損傷的沙門(mén)氏菌細(xì)胞恢復(fù)到穩(wěn)定的生理狀態(tài)。2.選擇性增菌在含選擇性抑制劑的促生長(zhǎng)培養(yǎng)基中間，樣品進(jìn)一步增菌的一個(gè)步驟。此培養(yǎng)基允許沙門(mén)氏菌持續(xù)增殖，同時(shí)阻止大多數(shù)其他細(xì)菌的增殖。3.選擇性平板分離這一步采用固體選擇性培養(yǎng)基，抑制非沙門(mén)氏菌的生長(zhǎng)，提供肉眼可見(jiàn)的疑似沙門(mén)氏菌純菌落的識(shí)別。4.生物化學(xué)篩選排除大多數(shù)非沙門(mén)氏菌。也提供了沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物菌屬的初步鑒定。5.血清學(xué)技術(shù)提供了培養(yǎng)物菌種的鑒定。這五個(gè)步驟代表理想狀況。不過(guò)一個(gè)有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)員，可能在一個(gè)或幾個(gè)步驟中看出特性和差別。目前檢驗(yàn)食品中的沙門(mén)氏菌是按統(tǒng)計(jì)學(xué)取樣方案為基礎(chǔ)，25g食品為標(biāo)準(zhǔn)分析單位。三、從食品中分離沙門(mén)氏菌樣品的制備下面的方法是以25g樣品為檢測(cè)單位，樣品：肉湯為1∶9的比例。除非另有說(shuō)明，根據(jù)混合程度，加足夠的肉湯保持1∶9的比例。對(duì)不需準(zhǔn)確稱(chēng)量檢測(cè)的樣品，例如：田雞腿，可參看特定方法說(shuō)明。1、干蛋黃、干蛋白、干全蛋、液奶（去脂牛奶，含2%脂肪牛奶，全脂奶，和脫脂奶）、粉狀調(diào)制食品（蛋糕，甜餅，炸面圈，餅干和面包）、嬰兒食品、口食或軟管進(jìn)食含蛋的食品：檢驗(yàn)前的冷凍樣品最好不要解凍。如果冷凍樣品必須軟化以獲取待檢測(cè)部分，則盡可能迅速的解凍所需部分，使競(jìng)爭(zhēng)菌數(shù)少增加或降低沙門(mén)氏菌的可能損傷。解凍需在45℃以下，有自動(dòng)調(diào)溫器自控的水浴鍋內(nèi)不斷攪拌進(jìn)行15min或在2小時(shí)內(nèi)解凍。無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品，放入滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中（500mL）或其他合適的容器內(nèi)。非粉狀的樣品，加入225mL滅菌乳糖肉湯。如果制品是粉狀，加入約15mL滅菌乳糖肉湯，用滅菌玻璃棒，匙或滅菌壓舌器攪拌，使成均勻懸液。再加3份乳糖肉湯10mL，10mL，190mL，使總量為225mL。充分?jǐn)嚢瑁钡綐悠吠耆珣腋](méi)有團(tuán)塊為止。蓋緊瓶蓋在室溫靜置60min。振搖使充分混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)用滅菌的1NNaOH或1NHcl調(diào)節(jié)pH至6.8±0.2。在測(cè)定最終pH前要蓋緊瓶蓋并充分混勻。然后將瓶蓋旋松約1/4圈，置35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)。以下步驟按四，1-10進(jìn)行。2、蛋類(lèi)：A、含殼蛋：用硬刷子在水流下刷洗蛋。把蛋在含0.1%十二烷酸磺酸鈉（SDS）的200ppm氯離子溶液中浸泡30min。加8mL5.25%次氯酸鈉到含1gSDS的992mL蒸餾水中，制備200ppmcl-/0.1%SDS溶液。這種消毒劑需在使用前臨時(shí)制備。無(wú)菌操作打開(kāi)蛋，使用滅菌的蛋分離器，棄去蛋白。無(wú)菌操作稱(chēng)取25g蛋黃到滅菌的500mL錐型瓶或其他合適容器內(nèi)。加225mL胰胳胨（胰化物）大豆肉湯（TSB），并振蕩充分混勻。在室溫下靜置60分鐘。振搖使其充分混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)調(diào)節(jié)pH值至6.8±0.2，置35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)，以下步驟按四，1-10繼續(xù)。B、液全蛋（均狀）：無(wú)菌操作稱(chēng)25g置于無(wú)菌的500mL錐形燒瓶或其它合適容器中。加225mLTSB并振蕩充分混勻。按上面所述繼續(xù)。、煮硬的蛋（雞蛋，鴨蛋或其他蛋類(lèi)）：目前，不知道蛋白中的沙門(mén)氏菌抑制因子是否具有熱穩(wěn)定性。因此，無(wú)菌操作分離蛋白和蛋黃。稱(chēng)取25g粉狀蛋黃固體到無(wú)菌500mL錐型瓶或其他合適容器中。加225mLTSB并旋轉(zhuǎn)充分混勻。按上面所述繼續(xù)。3、脫脂乳粉A、速溶：無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品，加入滅菌燒杯（250mL）或其它合適容器內(nèi)。經(jīng)滅菌玻璃或紙質(zhì)（用帶卷好以備高壓滅菌）漏斗，往滅菌的500mL錐形燒瓶或其它合適容器中（裝有225mL煌綠水），緩緩傾注25g檢測(cè)單位，使其覆蓋在煌綠水表面。也可將多份25g檢驗(yàn)單位按比例倒入相應(yīng)份數(shù)的煌綠水表面。按每1000mL滅菌蒸餾水中加1%煌綠溶液2mL配置煌綠水。將盛有樣品�前增菌培養(yǎng)基的容器靜置60±5分鐘。松松地蓋上容器蓋，不需要混合或調(diào)節(jié)pH值，于35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)，以下步驟按四，1-10繼續(xù)。B、非速溶：按上述A脫脂乳粉的方法進(jìn)行，只不過(guò)不允許將多份檢驗(yàn)單位按比例合并檢驗(yàn)。4、全脂奶粉：無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品，加入無(wú)菌的，帶螺旋帽的廣口瓶中（500mL）或其他合適的容器內(nèi)。加入225mL滅菌蒸餾水并振蕩充分混勻。蓋緊在室溫下靜置60分鐘。使其充分混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)調(diào)節(jié)pH值至6.8±0.2。在測(cè)定最終pH前要蓋緊瓶蓋并充分混勻。然后加0.45mL1%的煌綠染液并充分混勻。旋松瓶蓋約1/4轉(zhuǎn)后，置35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)，以下步驟按四，1-10繼續(xù)。5、酪蛋白：無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品，加入無(wú)菌均質(zhì)杯中，加225mL滅菌乳糖肉湯到樣品中并勻質(zhì)2分鐘。無(wú)菌操作，把已勻質(zhì)的混合物轉(zhuǎn)移到滅菌，帶螺旋帽的500mL廣口瓶或其他合適的容器內(nèi)。蓋緊蓋子在室溫下靜置60分鐘。振搖使充分混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)調(diào)節(jié)pH值至6.8±0.2。在測(cè)定最終pH前要蓋緊瓶蓋并充分混勻。旋松瓶蓋約1/4圈后，置35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)，以下步驟按四，1-10繼續(xù)。6、大豆粉：無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品，加入滅菌燒杯（250mL）或其它合適容器內(nèi)。用滅菌玻璃或紙質(zhì)（用帶卷好以備高壓滅菌）漏斗，往裝有225mL乳糖肉湯的滅菌的500mL錐形燒瓶或其它合適容器中，緩緩傾注25g檢測(cè)單位，使其覆蓋在乳糖肉湯表面。檢測(cè)單位（25g）不可多份按比例混合檢測(cè)。容器靜置60±5分鐘。松松地蓋上容器蓋，不需要混合或調(diào)節(jié)pH值，于35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)，以下步驟按四，1-10繼續(xù)。7、含蛋制品（面條，蛋卷，通心粉，意大利面條）、干酪、生面團(tuán)、調(diào)制色拉（火腿，蛋，雞肉，金槍魚(yú)，火雞）、新鮮的、冷凍的、或干的水果和蔬菜、果仁、甲殼類(lèi)動(dòng)物（小蝦，蟹，小龍蝦，LANGOSTINOS，龍蝦）和魚(yú)：檢測(cè)前冷凍樣品最好不要解凍，如果冷凍樣品必須軟化以取其檢測(cè)部分，則要在持續(xù)攪拌并帶有自動(dòng)調(diào)溫器控制的45℃水浴內(nèi)15分鐘內(nèi)解凍?；蛘咴?�5℃18小時(shí)內(nèi)進(jìn)行。無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品，加入滅菌的均質(zhì)器中。加入225mL滅菌的乳糖肉湯并均質(zhì)2分鐘。再無(wú)菌操作轉(zhuǎn)移已均質(zhì)的混合物到無(wú)菌的帶螺旋帽的廣口瓶中（500mL）或其他合適的容器內(nèi)。蓋緊瓶蓋，于在室溫下靜置60分鐘。振搖使其充分混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)調(diào)節(jié)pH值至6.8±0.2。充分混勻。旋松瓶蓋約1/4轉(zhuǎn)后，置35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)，以下步驟按四，1-10繼續(xù)。8、干酵母：無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品，放入滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中（500mL），或其他合適的容器內(nèi)。加入225mL滅菌胰酪胨（胰化）大豆肉湯，充分混勻使酵母形成均勻懸液。蓋緊瓶蓋于在室溫下靜置60分鐘。振搖使其充分混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)，調(diào)節(jié)pH值至6.8±0.2，在測(cè)定最終pH前要混合充分。旋松瓶蓋約1/4轉(zhuǎn)后，置35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)。非活性干酵母，以下步驟按，1-11進(jìn)行?；钚愿山湍?，混勻經(jīng)培養(yǎng)過(guò)的樣品，轉(zhuǎn)種1mL到10mLLST）中，另轉(zhuǎn)種1mL到10mL四磺酸鹽（TT）肉湯中。將此兩種選擇性肉湯于35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)。充分地旋轉(zhuǎn)混合經(jīng)培養(yǎng)過(guò)的增菌肉湯，每種肉湯都要用3mm接種環(huán)劃線(xiàn)接種3個(gè)選擇性平板（四，3和四，4），接下面的四，5�10進(jìn)行。9、食品上霜和上頂用的混合物：無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品，放入滅菌，帶螺旋帽的廣口瓶或其他合適的容器中。加入225mL營(yíng)養(yǎng)肉湯并充分混合。蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘。振搖使其充分混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)，調(diào)節(jié)pH值至6.8±0.2。旋松瓶蓋約1/4轉(zhuǎn)后，置35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)。以下步驟按四，1-10繼續(xù)。10、調(diào)味品：A、黑胡椒、白胡椒、芹菜籽或者干辣椒粉、小茴香、紅辣椒、歐芹片、迷迷香、芝麻、麝香草、蔬菜片：無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品，放入滅菌帶螺旋帽的廣口瓶或其他合適的容器中。加入225mL滅菌胰酪胨大豆（TSB）肉湯，充分混勻，蓋緊瓶蓋于在室溫下靜置60分鐘。旋動(dòng)混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)，調(diào)節(jié)pH值至6.8±0.2。旋松瓶蓋約1/4轉(zhuǎn)后，置35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)。以下步驟按四，1-10繼續(xù)。B、洋蔥片、洋蔥粉、大蒜片：無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品，放入滅菌帶螺旋帽的廣口瓶或其他合適的容器中。將樣品于含KSO的TSB胰酪胨大豆肉湯23（1000mLTSB加5gKSO使KSO的最終的濃度為0.5%）中進(jìn)行前增菌。添2323加KSO于肉湯中。分裝225mL于500mL錐形瓶中，經(jīng)121℃高壓滅菌15分23鐘。滅菌后無(wú)菌操作測(cè)定容量，必要時(shí)再調(diào)整至225mL。將225mL含KSO的23無(wú)菌TSB加入樣品中，充分混勻。接下去按三，10A節(jié)進(jìn)行。、牙買(mǎi)加胡椒、桂皮、丁香及薄荷：目前還沒(méi)有方法可以中和這四種香料的毒性。將香料稀釋至無(wú)毒的程度，再進(jìn)行菌檢。檢驗(yàn)牙買(mǎi)加胡椒，桂皮和薄荷時(shí)，樣品與肉湯比例為1∶100，而丁麝香樣品與肉湯比例為1∶1000。檢查葉狀的調(diào)味品，因遇到脫水的制品，可吸收肉湯這一實(shí)際困難，其樣品與肉湯比例要大于1∶10。檢查這些調(diào)味品按三，10A描述的方法進(jìn)行，保持推薦的樣品與肉湯的比例。11、糖果與糖衣（包括巧克力）：無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品放入滅菌的攪拌容器中。加入225mL滅菌的調(diào)配脫脂乳粉，攪拌2分鐘。再無(wú)菌操作轉(zhuǎn)移攪拌過(guò)的混合物到滅菌帶螺旋帽的500mL廣口瓶中或其他合適的容器內(nèi)。蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘。轉(zhuǎn)動(dòng)混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)調(diào)節(jié)pH值至6.8±0.2。再加入0.45mL1%煌綠染液混勻，將瓶蓋旋松1/4轉(zhuǎn)后培養(yǎng)。以下按四，1�10節(jié)進(jìn)行。12、椰子：無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品放入滅菌的帶螺旋帽的500mL廣口瓶中或其他合適的容器內(nèi)。加入225mL滅菌的乳糖肉湯，振搖后，蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘，再振搖使其充分混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)調(diào)節(jié)pH值至6.8±0.2?？傆?jì)加入2.25mL15分鐘）的陰離子特吉托爾7號(hào)，并充分混勻?？捎靡颜暨^(guò)（15分鐘）的三硝基甲苯X�100來(lái)代替。這些表面活性劑限制使用最小量，使之剛剛起泡沫即可。三硝基甲苯X�100大約2或3滴。旋松瓶蓋約1/4轉(zhuǎn)后，置35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)。以下步驟按四，1-10繼續(xù)。13、食用染料與食用色素：pH6.0或以上的染料（10%懸浮液），按上述干全蛋方法（C�1）處理。沉淀染料或pH低于6.0的染料，無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品，放入滅菌的帶螺旋帽的500mL廣口瓶中或其他合適的容器內(nèi)。加入225mL不含煌綠染料的四硫磺酸鹽肉湯混勻。蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘，用pH計(jì)調(diào)節(jié)pH值至6.8±0.2。再加入2.25mL0.1%的煌綠溶液，充分旋動(dòng)混勻。旋松瓶蓋約1/4轉(zhuǎn)后，置35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)。接下去按下面的四，3�10節(jié)進(jìn)行。14、明膠：無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品，放入滅菌的帶螺旋帽的500mL廣口瓶中或其他合適的容器內(nèi)。加入225mL滅菌的乳糖肉湯和5mL5%明膠酶水溶液?；旌暇鶆?，蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘。轉(zhuǎn)動(dòng)混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)調(diào)節(jié)pH值至6.8±0.2。將瓶蓋旋松1/4轉(zhuǎn)，置35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)。以下按四，1�10節(jié)進(jìn)行。15、肉、肉代用品、肉副產(chǎn)品、動(dòng)物產(chǎn)品、腺體制品和粗粉（魚(yú)，肉，骨）：無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品放入滅菌的攪拌器中。加入225mL滅菌的乳糖肉湯，攪拌2分鐘。再無(wú)菌操作轉(zhuǎn)移已攪拌的混合物到滅菌的帶螺旋帽的500mL廣口瓶中或其他合適的容器內(nèi)。蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘。如果混合物為粉狀，研磨過(guò)或已粉碎的，則不用攪拌。不需要攪拌的樣品，加入乳糖肉湯，并充分混勻；蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘。旋動(dòng)使充分混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)調(diào)節(jié)pH值至6.8±0.2?？傆?jì)加入2.25mL15分鐘）的特吉托爾陰離子7號(hào)，混勻。也可用已蒸過(guò)（15分鐘）的三硝基甲苯X�100來(lái)代替?？刂剖褂眠@些表面活性劑劑量，剛剛起泡沫即可。實(shí)際用量取決于試驗(yàn)材料的成分；分析粉狀腺體制品，不需要用表面活性劑。將瓶蓋旋松1/4轉(zhuǎn)后，將樣品混合物置35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)。以下按四，1�10節(jié)進(jìn)行。16、田雞腿（此方法用于國(guó)內(nèi)的和國(guó)外的所有田雞腿檢驗(yàn)）：將15對(duì)田雞腿放入滅菌塑料袋內(nèi)，并用滅菌乳糖肉湯浸沒(méi)。如果單個(gè)腿估計(jì)平均重在25g或以上，則只需檢查15對(duì)的每對(duì)中的一條腿。把袋放入大塑料燒杯內(nèi)或其它合適的容器中，在機(jī)械蕩器上震蕩15min，以4cm（1-1/2in）機(jī)械振蕩100次/分鐘。從袋中傾倒出乳糖肉湯于另一個(gè)滅菌塑料袋內(nèi)。加更多的乳糖肉湯，使總量為3500mL。充分混勻，于室溫下靜置60分鐘。必要時(shí)調(diào)節(jié)pH值至6.8±0.2。再把裝有乳糖肉湯的塑料袋放入塑料燒杯或其它合適的容器內(nèi)，于35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)。接下去按下面的四，1�10節(jié)進(jìn)行。17、野兔骨架（此方法用于國(guó)內(nèi)的和國(guó)外的所有的野兔骨架）：取3只野兔骨架放入滅菌塑料袋內(nèi)，并用滅菌乳糖肉湯浸沒(méi)（見(jiàn)上述A，23�25節(jié)），把袋放入大塑料燒杯內(nèi)或其它合適的容器中，在機(jī)械震蕩器上以4cm（1-1/2in）幅度振蕩100次/分鐘，震蕩15min。從袋中傾倒出乳糖肉湯混合物于另一個(gè)滅菌塑料袋內(nèi)，加更多的乳糖肉湯，使總量為3500mL。充分混勻，于室溫靜置60分鐘。必要時(shí)用pH試紙調(diào)置6.8±0.2，于35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)。接下去按下面的四，1�10節(jié)進(jìn)行。18、口香糖：無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品到滅菌燒杯（250mL）或其他合適容器中。制備過(guò)濾除菌的1.0%纖維素酶溶液（加1g纖維素酶到99mL無(wú)菌水中），用0.45um膜過(guò)濾除菌，置于150mL瓶中。（纖維素酶溶液在2·5℃可保存最長(zhǎng)2周時(shí)間）。加入225mL無(wú)菌乳糖肉湯和2.25mL無(wú)菌纖維素酶溶液于500mL無(wú)菌帶螺旋蓋的廣口瓶或其他合適容器。用磁力攪拌器劇烈攪拌酶/肉湯混合物時(shí)，通過(guò)無(wú)菌玻璃漏斗迅速倒入25g待檢樣品。旋好瓶蓋，室溫下靜置60分鐘，無(wú)須調(diào)pH值。旋松瓶蓋，35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)。以下按四進(jìn)行。四、沙門(mén)氏菌的分離1、擰緊瓶蓋并輕輕振蕩培養(yǎng)過(guò)的樣品混合物。生鮮食物、嚴(yán)重污染的食品和動(dòng)物飼料：轉(zhuǎn)移0.1mL混合物到10mLRAPPAPORT�VASSILIADIS（RV）肉湯培養(yǎng)基中，另轉(zhuǎn)移1mL混合物到10mL四硫磺酸鹽肉湯（TT）中。其它食品：轉(zhuǎn)移1mL混合物到10mL亞硒酸鹽胱氨酸肉湯（SC）中，另轉(zhuǎn)移1mL混合物到10mL四硫磺酸鹽肉湯（TT）中。2、選擇性增菌按如下步驟進(jìn)行：生鮮食品、嚴(yán)重污染的食品和動(dòng)物飼料：RV培養(yǎng)基在42±0.2℃（水溶）中培養(yǎng)24±2小時(shí)。TT肉湯在43±0.2℃（水溶）中培養(yǎng)24±2小時(shí)。其它食品：SC和TT肉湯在35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)。3、混合均勻（如果是試管，渦旋式混合），用3mm直徑的接種環(huán)，滿(mǎn)環(huán)（10μ）劃線(xiàn)接種TT肉湯于亞硫酸鉍（）瓊脂，木糖賴(lài)氨酸去氧膽酸鹽（XLD）瓊脂和HEKTOEN氏腸道菌（HE）瓊脂平板上。BS瓊脂平板于劃線(xiàn)接種的前一天制備好儲(chǔ)存在室溫暗處。4、再用3mm直徑的接種環(huán)，從RV培養(yǎng)基（樣品為生鮮食物，嚴(yán)重污染的食品和動(dòng)物飼料）和SC肉湯（除了生鮮食物，嚴(yán)重污染的食品和動(dòng)物飼料以外其它樣品）取滿(mǎn)環(huán)（10μ），劃線(xiàn)接種于上述平板上。5、把選擇性平板置35℃培養(yǎng)24±2小時(shí)。6、檢查平板中可疑沙門(mén)氏菌菌落的存在。典型的沙門(mén)氏菌菌落形態(tài)：從每個(gè)經(jīng)過(guò)24±2小時(shí)培養(yǎng)后選擇性平板上挑取2個(gè)或更多個(gè)菌落。典型的沙門(mén)氏菌菌落如下：A、在HEKTOEN氏腸道菌（HE）瓊脂上。菌落呈蘭綠至蘭色，帶或不帶黑色中心。許多沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物可呈現(xiàn)大的光澤黑色中心或幾乎全部黑色的菌落。B、在木糖賴(lài)氨酸去氧膽酸鹽（XLD）瓊脂上。粉色菌落，帶或不帶黑色中心。許多沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物可有大的光澤黑色中心或呈幾乎全部黑色的菌落。、亞硫酸鉍（BS）瓊脂上。呈褐色，灰色或黑色，有時(shí)帶有金屬光澤。菌落周?chē)呐囵B(yǎng)基通常開(kāi)始呈褐色，但伴隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而變?yōu)楹谏?，并有所謂的暈環(huán)效應(yīng)。如果典型菌落出現(xiàn)在經(jīng)24±2小時(shí)培養(yǎng)后的BS瓊脂上，則挑取2個(gè)或更多個(gè)典型菌落。不論BS瓊脂平板在培養(yǎng)24±2小時(shí)時(shí)是否挑取過(guò)菌落，BS平板再培養(yǎng)24±2小時(shí)。培養(yǎng)了48±2小時(shí)后，如果BS平板上出現(xiàn)典型菌，則挑取2個(gè)或更多個(gè)菌落，如果只在經(jīng)過(guò)24±2小時(shí)培養(yǎng)的BS平板上挑取了菌落，接種到三糖鐵瓊脂（TSI）和賴(lài)氨酸瓊脂（LIA）上，會(huì)呈現(xiàn)非典型反應(yīng)以至視為培養(yǎng)物中不存在沙門(mén)氏菌。參見(jiàn)下面四.8部分和四.9部分，有關(guān)TSI和LIA反應(yīng)的詳細(xì)描述。非典型的沙門(mén)氏菌菌落形態(tài)：不存在典型的或可疑的沙門(mén)氏菌菌落時(shí)，按如下步驟檢驗(yàn)非典型的沙門(mén)氏菌菌落。A、HE和XLD瓊脂：非典型的沙門(mén)氏菌在HE和XLD瓊脂上呈黃色菌落，帶或不帶黑色中心。HE和XLD平板經(jīng)24±2小時(shí)培養(yǎng)后，沒(méi)有典型的沙門(mén)氏菌菌落，則挑取2個(gè)或更多個(gè)非典型的沙門(mén)氏菌菌落。B、BS瓊脂：某些非典型菌株產(chǎn)生綠色菌落，其周?chē)囵B(yǎng)基稍微或不呈暗色。如果BS平板培養(yǎng)24±2小時(shí)后，沒(méi)有出現(xiàn)典型菌落，則不挑取任何菌落，讓平板繼續(xù)培養(yǎng)24±2小時(shí)。如果經(jīng)48±2小時(shí)培養(yǎng)后，仍沒(méi)有典型或可疑的菌落出現(xiàn)，則挑取2個(gè)或更多個(gè)非典型的菌落。7、用滅菌接種針輕輕地接觸每個(gè)菌落中心部位，接種TSI斜面，先在斜面上劃線(xiàn)，再于底層穿刺。不需灼燒接種針，即可接種LIA斜面，先穿刺接種底層兩次，再劃線(xiàn)斜面上。由于賴(lài)氨酸脫羧反應(yīng)需嚴(yán)格厭氧條件，因而LIA斜面