蜜蜂用抗菌藥物藥效評價試驗指導(dǎo)原則

蜜蜂用抗菌藥物藥效評價試驗指導(dǎo)原則—、概述（一） 定義與目的蜜蜂用抗菌藥物是指用于治療由細(xì)菌或真菌引起蜜蜂疾病的專用藥物。蜜蜂用抗菌藥物藥效評價試驗是評價蜜蜂用抗菌藥物的劑量確定試驗，也稱II期臨床試驗，目的是了解不同劑量的受試藥物對蜂群疾病的抗菌效果，確定受試藥物的治療作用及劑量。（二） 適用范圍本指導(dǎo)原則適用于申報治療蜜蜂細(xì)菌或真菌疾病的所有抗菌藥物，包括我國未批準(zhǔn)在蜜蜂用的抗菌藥物及各種制劑，均應(yīng)進(jìn)行藥效評價試驗。按每種適應(yīng)癥進(jìn)行試驗，一般采用人工誘發(fā)感染（接種），條件不具備時也可選擇自然感染病例。二、試驗設(shè)計（一）試驗蜂群蜂種：應(yīng)與藥物申報應(yīng)用的蜂種相一致。來源：應(yīng)為來源清楚、飼養(yǎng)規(guī)范的蜂群。群勢要求：各蜂群的群勢應(yīng)基本一致，平均為6足框以上。在試驗前定群，分別記錄卵、幼蟲、蜂蓋子、成年蜂的數(shù)量。試驗組蜂群數(shù)：每個試驗組蜂群數(shù)不低于（含）5群。每個適應(yīng)癥的蜂群數(shù)不得低于30群。自然感染病例的選擇：選用的自然感染病例應(yīng)癥狀明顯、典型，并從病例中分離出致病菌。受試蜂群的人工誘發(fā)感染：接種蟲齡應(yīng)與疾病發(fā)生的蟲齡相適應(yīng)，幼蟲病一般在幼蟲2日齡時接種，成年蜂在幼蜂剛出房時接種。誘發(fā)蜂群發(fā)生疾病的典型癥狀，并能從具典型癥狀的病蟲中分離出所接種的病原菌。試驗用菌必須是新鮮、并與野生菌株致病力、毒力相當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)物（實驗室長期人工培養(yǎng)的菌株要定時回接恢復(fù)致病力與毒力）。蜂群疾病的誘發(fā)：將病原菌混入飼料中通過飼喂的方式誘發(fā)疾病的發(fā)生。蜂群疾病誘發(fā)成功后記錄病情指數(shù)（幼蟲病害）或發(fā)病率（成年蜂病害）。病例淘汰：試驗期間，試驗蜂群若發(fā)生嚴(yán)重的盜蜂、逃群、分蜂，以及其他蜜蜂疾病發(fā)生、敵害襲擾等，導(dǎo)致無法評價藥效，應(yīng)予以淘汰。（二） 試驗藥物受試藥物及來源：受試藥物應(yīng)與擬上市的制劑完全一致、同一劑型，有完整的產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有合乎規(guī)定格式的說明書。受試藥物應(yīng)來源于同一批號，由申報單位自行研制并在GMP驗收合格的車間生產(chǎn)的樣品，并提供農(nóng)業(yè)部認(rèn)可的檢驗機構(gòu)出具的產(chǎn)品檢驗合格報告。對照藥物及來源：對照藥物應(yīng)當(dāng)是已經(jīng)在我國批準(zhǔn)上市，與受試藥物屬于同一類的藥物，適應(yīng)癥相同、劑型相同、給藥方式相同。來源可以從市場購買或者由申報單位提供，并提供由農(nóng)業(yè)部認(rèn)可的檢驗機構(gòu)出具的產(chǎn)品檢驗合格報告。（三） 給藥方案按照試驗方案進(jìn)行給藥，包括給藥的時間、給藥的劑量、多次給藥的給藥間隔時間、總給藥次數(shù)。對照藥物應(yīng)嚴(yán)格按照批準(zhǔn)的說明書給藥。配制含藥物糖漿給藥法：用飽和糖漿配制含藥糖漿，在傍晚蜜蜂均回巢時飼喂，含藥糖漿的飼喂量以蜂群在2日內(nèi)食盡為宣。配制含藥花粉給藥法：先用少量稀糖漿（糖：水=1:2）將花粉粒濕潤12小時，然后將藥物均勻地拌入花粉中，再用濃糖漿（糖：水=1:1）將含藥花粉拌成花粉團(tuán)。拌入糖漿量以花粉團(tuán)用手稍捏緊指間無糖漿流出，松手花粉團(tuán)不松散為宜。將含藥花粉團(tuán)壓成餅狀置于蜂箱內(nèi)上框梁上供蜜蜂自行取食，飼喂量以蜂群在2日內(nèi)食盡為宣。（四） 試驗周期試驗周期為整個給藥療程（治療期）加上停止給藥后的21天時間。（五） 試驗分組選用人工誘發(fā)感染，單方制劑試驗要求分成以下六組:（1）空白對照（不感染不給藥）組；

（2） 感染不給藥組（陰性對照組）；（3） 受試藥物推薦劑量加倍組；（4） 受試藥物推薦劑量組；（5） 受試藥物推薦劑量減半組；（6） 藥物對照組（陽性對照組）。選用自然感染病例，單方制劑試驗要求分成以下五組:（1） 空白對照（不感染不給藥）組（2） 受試藥物推薦劑量加倍組；（3） 受試藥物推薦劑量組；（4） 受試藥物推薦劑量減半組；（5） 藥物對照組（陽性對照組）。如為復(fù)方制劑還應(yīng)增設(shè)單個藥物的推薦劑量組。（六）觀察指標(biāo)詳細(xì)觀察記錄試驗開始后、給藥前、給藥后和停藥后各處理組蜂群的群勢變化情況、病情指數(shù)或發(fā)病率的變化情況，計算防治效果。蜜蜂幼蟲病情指數(shù)和藥物防治效果的計算蜜蜂幼蟲病檢查子脾時，按發(fā)病輕重程度分級。0級：子脾上未發(fā)現(xiàn)病蟲；1級：病害蟲數(shù)占總幼蟲數(shù)，＜5%；2級：病害蟲數(shù)占總幼蟲數(shù)，5%?30%；3級：病害蟲數(shù)占總幼蟲數(shù)，＞30%。病情指數(shù)=Z各級病情指數(shù)x各級病脾數(shù)

最高病情指數(shù)x病情指數(shù)=其中病情指數(shù)越大，說明病害越嚴(yán)重。對于人工誘發(fā)感染病例：防治效果（%）=x防治效果（%）=x100%對與自然感染病例:六后里空白對照（不感染不給藥）組病情指數(shù)-受試藥物組病情指數(shù)猝防治效果（％）= 空白對照（不感染不給藥）組病情指數(shù) *100%成年蜜蜂藥物防治效果的計算對于人工誘發(fā)感染病例：防治效果（％）二屈不給藥組；陰性對照組）病情指數(shù):受試藥/病情指數(shù)*100%感染不給藥組（陰性對照組）病情指數(shù)對與自然感染病例:食、4六后里空白對照（不感染不給藥）組病情指數(shù)-受試藥物組病情指數(shù)猝防治效果（％）= 空白對照（不感染不給藥）組病情指數(shù) *100%（七） 統(tǒng)計分析選擇合適的統(tǒng)計分析程序，對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。將受試藥物組與對照組（包括空白對照組、藥物對照組或感染不給藥組）的防治效果進(jìn)行X2檢驗，確定受試藥物的治療效果及其劑量。（八） 結(jié)果評價臨床藥效試驗結(jié)果按下列標(biāo)準(zhǔn)評價：高效：疾病完全被控制，子脾上無病蟲，防治效果±90%。中效：病情明顯好轉(zhuǎn)，子脾上病蟲數(shù)極少，防治效果±75%。有效：病情有所好轉(zhuǎn)，防治效果±60%。無效：用藥后病情無明顯好轉(zhuǎn)，防治效果＜60%。三、試驗報告為公正、科學(xué)地評價藥物療效，對試驗報告內(nèi)容做如下要求：試驗?zāi)康?。試驗蜂群?yīng)注明品種。受試藥物需注明蜂藥名稱、生產(chǎn)廠家、規(guī)格、生產(chǎn)批號