高效液相色譜法測(cè)定化妝品中氫苯酚

高效液相色譜法測(cè)定化妝品中氫苯酚

作為一種消毒和防病毒藥物，氫和苯乙二醇具有治療皮膚傷口、濕疹和緩解疼痛的作用，具有一定的美白效果。但由于其毒性及刺激性大,長(zhǎng)期接觸能引起白血病、腫瘤、心血管疾病。所以我國(guó)化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定氫醌、苯酚為美白祛斑類(lèi)化妝品的禁用物質(zhì)。只可作為藥物治療用于局部和短期使用。目前,氫醌、苯酚的檢測(cè)方法有分光光度法、氣相色譜法、液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法。本文建立了二極管陣列檢測(cè)器的高效液相色譜法,結(jié)果表明,該法分析速度快、干擾少、靈敏度高、定性定量準(zhǔn)確,應(yīng)用于各類(lèi)美白、祛斑化妝品中氫醌、苯酚的監(jiān)測(cè),獲得滿(mǎn)意結(jié)果。1材料和方法1.1儀器HP-1100高效液相色譜儀具二極管陣列檢測(cè)器,色譜工作站,自動(dòng)進(jìn)樣器。1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及方法氫醌標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱(chēng)取0.1001g氫醌(色譜純)于燒杯中,用少量甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中,再用甲醇定容至刻度。該溶液濃度為1.00mg/ml,可穩(wěn)定1個(gè)月。苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱(chēng)取0.1002g苯酚(分析純重結(jié)晶)于燒杯中,用少量甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度。該溶液濃度為1.00mg/ml,可穩(wěn)定1個(gè)月。鹽酸乙二胺:稱(chēng)取0.548g鹽酸乙二胺(分析純)溶于少量精制去離子水中,加水至1000ml。用0.45μ微孔濾膜過(guò)濾。濃度為5mmol。流動(dòng)相:甲醇(色譜純)與5mmol鹽酸乙二胺混合液(40+60)。1.3檢測(cè)波長(zhǎng)和溫度色譜柱:ZORBAX.CN4.6mm×25cm,流動(dòng)相:甲醇+鹽酸乙二胺(50mmol)=40+60,柱溫:30℃;流速:0.80ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng):277nm,波長(zhǎng)寬度16nm;參比波長(zhǎng):360nm,波長(zhǎng)寬度:50nm。1.4超聲清洗液色譜法稱(chēng)取試樣1.00g,置于10ml比色管中,用甲醇定容至刻度,充分振蕩,于超聲波清洗器中超聲15min,離心,用0.2μ微孔濾膜過(guò)濾。取5μl注入色譜儀,測(cè)其峰高。同時(shí)做試劑空白。1.5標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定容液用移液管分別準(zhǔn)確移取0.500mg/ml氫醌、苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50、1.00、2.00ml于10ml棕色容量瓶中,用甲醇定容至刻度。此溶液濃度分別為25、50、100μg/ml。進(jìn)樣量為5μl,注入色譜儀以濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。1.6氫、苯酚的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω=ρ×Vmω=ρ×Vm式中:ω—樣品中氫醌或苯酚的質(zhì)量分?jǐn)?shù),μg/gρ—從校準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出的待測(cè)液中氫醌、苯酚的質(zhì)量濃度,μg/mlV—樣品液中總體積,mlm—樣品質(zhì)量,g2結(jié)果與討論2.1流動(dòng)相醇專(zhuān)業(yè)本實(shí)驗(yàn)選擇了ODS-C18、ZORBAX.CN色譜柱及甲醇、甲醇:鹽酸乙二胺流動(dòng)相。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明用ODS柱、甲醇為流動(dòng)相氫醌、苯酚無(wú)響應(yīng),在ZORBAX.CN柱、流動(dòng)相為甲醇+鹽酸乙二胺(50mmol)=40+60條件下分離效果好、靈敏度高。2.2檢測(cè)結(jié)果及靈敏度本實(shí)驗(yàn)對(duì)吸收波長(zhǎng)254、218、277nm進(jìn)行選擇,由氫醌、苯酚的紫外吸收譜圖圖3、圖4可見(jiàn),在254nm處吸收值低,靈敏度差。由圖3、圖4所示,氫醌、苯酚在218nm處有一最大吸收峰,在此波長(zhǎng)下測(cè)定氫醌、苯酚具有較高的靈敏度。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn),此條件下樣品中許多組分都有吸收。具體結(jié)果見(jiàn)圖5,樣品在218、254、277nm波長(zhǎng)下檢測(cè)色譜圖。氫醌、苯酚在277nm波長(zhǎng)比254nm具有較強(qiáng)的靈敏度,結(jié)果見(jiàn)圖6氫醌、苯酚在254nm與277nm波長(zhǎng)下吸光度值比較。所以本方法選用277nm為測(cè)定波長(zhǎng)。在此條件下氫醌、苯酚有較好的分離效果,干擾少,靈敏度高,分析速度快。結(jié)果見(jiàn)圖7氫醌、苯酚標(biāo)準(zhǔn)色譜圖。2.3復(fù)合色譜法的驗(yàn)證高效液相色譜用于定性的依據(jù)是樣品與標(biāo)準(zhǔn)的保留時(shí)間相同,但是由于化妝品樣品種類(lèi)繁多,基體復(fù)雜,單純用保留時(shí)間定性可靠性較差。本實(shí)驗(yàn)選用二極管陣列檢測(cè)器高效液相色譜法,用保留時(shí)間和紫外吸收譜圖共同定性,提高了方法的準(zhǔn)確度。結(jié)果見(jiàn)圖8、圖9樣品的色譜圖,圖10、圖11樣品的紫外吸收譜圖與標(biāo)準(zhǔn)紫外吸收譜圖的比較。由圖8、圖9、圖10、圖11可知,樣品色譜圖中有一與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保留時(shí)間相同的成份,但兩者紫外吸收譜圖則完全不同,說(shuō)明是兩種不同的物質(zhì),則被測(cè)樣品中不含氫醌、苯酚。所以本文選用二極管陣列檢測(cè)器,定性結(jié)果更準(zhǔn)確可靠。2.5精密度和準(zhǔn)確度精確稱(chēng)取面膜粉1.00g10份于具塞試管中,其中3份做樣品本底測(cè)定,其余每份樣品中加0.5mg/ml氫醌、苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00ml,用甲醇定容至10ml。以下同樣品處理操作,進(jìn)行精密度和準(zhǔn)確度測(cè)定。由實(shí)驗(yàn)得,方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為:氫醌1.50%;苯酚2.0%?；厥章蕿?氫醌107%;苯酚114%。氫醌最低檢出量為1.27μg。當(dāng)取樣量為1g時(shí),最低檢出濃度為12.7μg/g。苯酚最低檢出量為1.15μg,當(dāng)取樣量為1g時(shí),最低檢出濃度為11.5