白術(shù)中兩種白術(shù)內(nèi)酯的變化研究

白術(shù)中兩種白術(shù)內(nèi)酯的變化研究

中藥白術(shù)是薔薇科植物白術(shù)的干燥根莖。神農(nóng)本草列為上品,具有健脾益氣、燥濕利水、止汗安胎功效。白術(shù)根莖中含揮發(fā)油、倍半萜內(nèi)酯化合物等,其中自術(shù)內(nèi)酯類成分(白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ)為白術(shù)的抗炎、抗癌有效成分,經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明,該類成分具有調(diào)節(jié)胃腸道功能和促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收的作用,尤其白術(shù)內(nèi)酯I藥理作用明顯,白術(shù)內(nèi)酯I、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ也為白術(shù)的特征性成分。用HPLC對不同提取方法、不同采收期和產(chǎn)地的白術(shù)樣品中兩種白術(shù)內(nèi)酯的含量進(jìn)行比較研究,未見報(bào)道。1河北五地麻黃白術(shù)藥材為2005年采自湖南省平江縣白術(shù)種植基地,另于同期在市場購湖南平江,隆回和浙江,安徽,河北五地白術(shù)飲片。Agilent1100高效液相色譜儀,Agilent1100晶體二極管陣列檢測器(DAD),四元泵,Agilent色譜工作站.白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)品由湖南省藥品檢驗(yàn)所提供,純度>99%,甲醇為色譜純,水為重蒸水(自制)。2柱溫enha色譜柱:Kromasil-ODS柱(4.6X200mm,5um)(Scienhome);柱溫:30℃;流動相:甲醇一水(54:46);流速:1.OmL/min;進(jìn)樣量:10uL.紫外檢測波長:220nm。理論板數(shù)按白術(shù)內(nèi)酯I計(jì)不低于3000,主色譜峰與相鄰其它色譜峰的分離度不小于2,拖尾因子1.020。3方法和結(jié)果3.1試驗(yàn)溶液的制備3.1.1供試品溶液制備精密稱取白術(shù)粉末(過40目篩)1.000g,置于具塞三角瓶中,加提取溶劑10.0m1,超聲提30min,離心(3500r/min)1Omin,10m1容量瓶定容得供試品溶液,0.45um微孔濾膜過濾得待測液;回收溶劑后用甲醇于10m1容量瓶定容過濾后得供試品溶液。3.1.2供試品溶液的配制精密稱取粉碎過20目篩的干燥白術(shù)粉末100g,裝入1000ml的圓底燒瓶中,加蒸餾水400ml,浸泡過夜,安裝揮發(fā)油測定器和冷凝裝置,用電熱套加熱至沸,調(diào)溫度保持微沸6h停止加熱,冷卻后收集揮發(fā)油,用適量乙酸乙酯充分溶解并轉(zhuǎn)入50ml的容量瓶中,用適量甲醇定容制成供試品溶液。3.2測定樣品的測定按上述條件,對白術(shù)內(nèi)酯I、Ⅲ對照品和樣品進(jìn)行測定,樣品中與對照品的保留值處有相應(yīng)的色譜峰,且與雜質(zhì)得到較好的分離(色譜圖見圖1)。3.3加樣分析結(jié)果精密稱取白術(shù)內(nèi)酯I、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對照品適量,精密稱定,加甲醇制成含白術(shù)內(nèi)酯I、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ各10.6ug/ml的混合對照品溶液。精密吸取混合對照品2uL,5uL,10uL,15uL,20uL,進(jìn)樣分析,以進(jìn)樣量ng對AI、AⅢ作線性回歸,得兩個(gè)組分的回歸方程,白術(shù)內(nèi)酯I:YI=3.24014X-0.63026r=0.999056,線性范圍:48.47038~450.12244白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ:YⅢ=2.14063X+1.695000r=0.99966,線性范圍:68.22203~697.97000。結(jié)果表明兩組分均成良好的線性。3.4組患兒精密度的計(jì)算對同一對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次,每次10uL,以峰面積計(jì)算白術(shù)內(nèi)酯I和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的精密度,其RSD分別為1.067%和1.059%。3.5不同缺乏對配制ni、白兩水兩酯的水平反應(yīng)對同一樣品溶液每隔2h連續(xù)6次進(jìn)樣,結(jié)果表明樣品在12h內(nèi)穩(wěn)定,以峰面積計(jì)算白術(shù)內(nèi)酯I、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的RSD分別為1.45%及1.39%。3.6穩(wěn)定性測定精密稱取同批白術(shù)藥材粉1.000g,共6份按“供試品溶液的制備”下方法提取,測定,以峰面積計(jì)算白術(shù)內(nèi)酯I、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的RSD分別為1.14%和1.16%。3.7加樣回收率的測定精密稱取己知含量的平江白術(shù)飲片粉末約0.21g共6份,每份各精密加入上述混合對照品溶液53ug,63ug,74ug,按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下進(jìn)行處理并測定,計(jì)算回收率,得白術(shù)內(nèi)酯I的平均回收率為100.07%,RSD為1.49%白術(shù)內(nèi)酯III的平均回收率為98.64%,RSD為1.20%。3.8樣品測定4流動相的選擇由表1可知,用正己烷為溶劑提取時(shí)兩種白術(shù)內(nèi)酯含量均最低,用甲醇提取時(shí)白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ含量最高,用乙醚提取時(shí)白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量最高,考慮到白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ為白術(shù)的主要活性成分,也為白術(shù)質(zhì)量控制的主要指標(biāo),建議選取甲醇為白術(shù)內(nèi)酯超聲波提取溶劑。曾實(shí)驗(yàn)不同提取時(shí)間(15,30,45,60min)及不同提取次數(shù)(1,2,3次)對甲醇超聲波提取條件的影響,結(jié)果表明用甲醇超聲波提取一次,每次30min可提取完全。由表1可知,不同采收時(shí)期白術(shù)所含兩種白術(shù)內(nèi)酯的含量變化無明顯規(guī)律,龍門和長壽白術(shù)的白術(shù)內(nèi)酯I和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ均在10月11日達(dá)到最高值。且兩種白術(shù)內(nèi)酯的含量都較低,白術(shù)內(nèi)酯I在龍門和長壽兩地的平均含量分別為0.0398%和0.0209%,白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ在兩地的平均含量分別為0.0375%和0.0201%。從表六可看出白術(shù)飲片中兩種白術(shù)內(nèi)酯的含量普遍較原藥材高,表明白術(shù)經(jīng)凈制加工后質(zhì)量較原藥材優(yōu).在五個(gè)不同產(chǎn)地的比較實(shí)驗(yàn)研究中,湖南省平江縣產(chǎn)白術(shù)藥材的兩種白術(shù)內(nèi)酯含量均高于浙江省于潛縣的,而河北行唐產(chǎn)白術(shù)藥材的兩種白術(shù)內(nèi)酯含量均最低。湖南省平江縣和浙江省于潛縣是歷史上白術(shù)的道地藥材產(chǎn)區(qū),兩地所產(chǎn)藥材有效成分白術(shù)內(nèi)酯含量高。從內(nèi)在品質(zhì)上進(jìn)一步說明了道地藥材質(zhì)量的優(yōu)良性。為確保色譜定性的準(zhǔn)確性,除采用上述流動相外,曾以甲醇一水(60:40),(55:45),(54:46)等作為流動相,進(jìn)行了樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的定性比較,表明樣品中均有