丹參對失血性休克再灌注大鼠腎損傷的保護作用

丹參對失血性休克再灌注大鼠腎損傷的保護作用

對缺血和再灌注也很敏感。再灌注（h-r）通常會導致腎臟再灌注損傷和急性腎功能衰竭。近年來,氧自由基在缺血再灌注損傷的發(fā)生中起重要作用已達成共識。本實驗通過觀察HS-R大鼠腎損傷時腎臟組織自由基的變化以及復方丹參注射液對HS-R大鼠腎臟損傷的治療作用,探討HS-R大鼠腎損傷的機制及丹參的治療機制,以期為臨床治療休克提供實驗依據(jù)。1材料和方法1.1復方有效克氏原螯蝦sm組雄性SD大鼠30只,體重260~310g(溫州醫(yī)學院實驗動物中心提供,醫(yī)動字第220030002號),實驗前禁食12h,可自由飲水,隨機分為正常對照組(NC組)、失血性休克再灌注組(HS-R組)和丹參治療組(SM組,復方丹參注射液由上海第一生化藥業(yè)公司生產,批號:020137),每組10只。各組動物腹腔注射25%烏拉坦(5mg/100g體重),麻醉后氣管插管,保持氣管通暢,左頸總動脈插管以放血用,右側頸外靜脈插管供注入藥物及血液回輸。HS-R組和SM組動物頸動脈放血至平均動脈壓(MAP)40mmHg,維持90min后回輸全部失血和等量無菌生理鹽水(50滴/min),SM組按8g/kg體重在血液回輸前1min經頸靜脈緩慢注入復方丹參注射液,HS-R組以等量生理鹽水代替丹參?；剌斀Y束后2h,取血測定腎功能,取腎組織測定自由基指標,并作病理學檢測。1.2檢測方法1.2.1腎功能測試尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)在自動生化分析儀上測定。1.2.2抗氧化酶活性測定取腎組織制備勻漿(按照南京建成生物工程研究所提供的組織勻漿制備方法),檢測腎組織超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、黃嘌呤氧化酶(XOD)活性、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量,以上試劑盒均購自南京建成生物工程研究所,檢測方法按說明書操作。1.2.3組織病理學檢查取腎組織,4%多聚甲醛中固定,石蠟包埋切片,HE染色后光鏡下觀察。1.3a分析的檢驗組間比較用One-WayANOVA分析后,采用Student-Newman-Keuls檢驗,方差不齊時采用Levenetest檢驗。2結果2.1血漿bun和cr值HS-R組和SM組血漿BUN、Cr值與NC組比較,顯著升高(P<0.05),但SM組血漿BUN和Cr值均顯著低于HS-R組(P<0.05),見表1。2.2各組腎組織中da、mda和no含量的比較與NC組相比較,HS-R組和SM組腎組織的SOD、GSH-PX活性顯著下降,而XOD活性、MDA含量明顯增高,HS-R組腎組織的NO含量明顯增高;SM組的SOD活性比HS-R組明顯增高,MDA和NO含量明顯低于HS-R組,以上差異均有統(tǒng)計學意義。與HS-R組比較,SM組腎組織GSH-PX活性有增高趨勢,XOD活性有下降趨勢,但以上二個指標的差異沒有統(tǒng)計學意義,見表2。2.3各組大鼠肝腎的組織病理學和組織學檢查光鏡下可見,HS-R組大鼠腎組織病變明顯,腎小球皺縮,腎小囊腔擴張,腎小管上皮細胞有不同程度的細胞變性,壞死和脫落,腎間質有大量炎細胞浸潤,并出現(xiàn)水腫,SM組大鼠腎臟的病變明顯輕于HS-R組。3復方丹參對失血性休克再灌注損傷腎組織抗氧化活性的作用腎是一個高血流的器官,對缺血和再灌注均十分敏感,易出現(xiàn)失血性休克再灌注腎損傷(HS-RRI),甚至發(fā)展為再灌注腎功能衰竭。本研究發(fā)現(xiàn),失血性休克補液治療后2h,大鼠的腎功能明顯下降,腎臟出現(xiàn)嚴重的組織學病變。Glaumann等首先提出了腎缺血再灌注損傷(RIRI)的概念,包括2種類型:單純型RIRI,如夾閉腎動脈引起的腎損傷;全身型RIRI,如休克后微循環(huán)再通引起的腎損傷,對前者的研究較多,后者受全身因素影響較大,對其研究較少。大多數(shù)學者認為臟器的缺血再灌注損傷機制包括自由基生成增多、細胞內鈣超載及細胞粘附分子的作用等,其中對于自由基的作用研究得最為廣泛。在缺血再灌注損傷過程中,可通過多種途徑產生氧自由基,目前認為主要通過黃嘌呤氧化酶的形成增多、中性粒細胞的呼吸爆發(fā)、線粒體功能損傷和兒茶酚胺的自身氧化產生大量的氧自由基。自由基可與各種細胞成分,如膜磷脂、蛋白質、核酸等發(fā)生反應,造成細胞結構損傷和功能代謝障礙。本研究表明,失血性休克再灌注2h時,腎組織的SOD和GSH-PX活性顯著下降,而XOD活性、MDA和NO含量明顯增高。NO是一種潛在的舒血管物質,與腎缺血再灌注損傷的發(fā)生密切相關,腎臟基礎水平的NO對維持其血流及腎小球濾過率具有重要作用。腎組織NO含量在再灌注后會明顯增加,過量的NO會有損傷作用,因為再灌注后組織中大量產生的NO可與氧自由基產生迅速反應生成更具細胞毒性的自由基ONOO(過氧化亞硝基)等,從而造成細胞功能的進一步損害。本實驗提示失血性休克再灌注2h時,即發(fā)生腎組織氧自由基生成增加,清除能力下降,從而使腎臟有大量的氧自由基蓄積,脂質過氧化增強,造成腎臟結構損傷和功能明顯下降。近年來許多研究表明,丹參對重要器官的缺血再灌注損傷有保護作用,在于其具有很強的抗氧化活性,消除自由基,增強機體的抗氧化能力。丹參的二萜醌成分可解除血小板聚集,改善微循環(huán)灌注,減少ATP消耗;直接作用于細胞膜受體操縱性鈣通道,增強Ca2+泵主動轉運,增速Ca2+外排內攝,使細胞內游離鈣濃度降低,減少黃嘌呤脫氫酶向黃嘌呤氧化酶的轉化,因此減少了細胞