種子檢驗(yàn)學(xué)要點(diǎn)

種子檢驗(yàn)學(xué)要點(diǎn)種子檢驗(yàn)學(xué)要點(diǎn)四唑染色（1） 測定原理：有生活力的種子活細(xì)胞在呼吸過程中都會發(fā)生氧化還原反應(yīng)。四唑溶液（無色）被種子活組織吸收后，參與活細(xì)胞的還原反應(yīng)，從脫氫酶接受氫離子，被還原成紅色、穩(wěn)定、不擴(kuò)散、不溶于水的三苯基甲臜；DPNH2+TTC—DPN+TTCH+HCl（輔酶IH2）（四唑）（輔酶I）（甲臜）（氯化氫）（2） 測定方法<1>試驗(yàn)樣品從凈度分析后并經(jīng)充分混合的凈種子中，隨機(jī)數(shù)取100粒種子，4次重復(fù)。如果是測定發(fā)芽試驗(yàn)?zāi)┢谛菝叻N子的生活力，則單用發(fā)芽試驗(yàn)?zāi)┢谒l(fā)現(xiàn)的休眠種子。<2>染色前的種子準(zhǔn)備（預(yù)濕、預(yù)措）：1） 種子預(yù)濕（方法：①快速水浸預(yù)濕：適用于直接浸入水中不會造成組織破裂損傷，不會影響鑒定正確性的種子；②緩慢紙床預(yù)濕：適用于直接浸在水中容易破裂和損傷的種子，以及衰弱的種子或過分干燥的種子；③H2O2溶液浸種：為加快種子吸脹、促進(jìn)酶的活化，縮短預(yù)濕時間。）染色前的種子處理（預(yù)措）：（方法：①刺穿：對經(jīng)過預(yù)濕的種子或硬實(shí)種子，可利用解剖針或解剖刀，刺穿種子的非主要部位，適用于小粒牧草等種子。②縱切：通過胚中軸和胚乳，縱向切開，使胚的主要構(gòu)造暴露出來，適用于具有直立胚的大粒禾本科等種子。③橫切：用解剖刀、刀片、彎曲剪子或其他適當(dāng)?shù)姆椒?，沿種子非主要組織橫向切斷。）2） 染色程序：將準(zhǔn)備好的100x4種子放入適宜大小的培養(yǎng)皿或燒杯中。加入適宜濃度的四唑溶液，以淹沒種子為度，移置到一定溫度的（黑暗或弱光）恒溫箱內(nèi)進(jìn)行染色反應(yīng)。3） -般鑒定原則：<1>凡是胚的主要構(gòu)造及有關(guān)活營養(yǎng)組織染成有光澤的鮮紅色，且組織狀態(tài)正常的，為有生活力種子。<2>凡是胚的主要構(gòu)造局部不染色或染成異常的顏色和光澤，并且活營養(yǎng)組織不染色部分已超過1/2,或超過允許范圍以及組織軟化的，為不正常種子。<3>凡是完全不染色或染成無光澤的淡紅色或灰白色，且組織已軟腐或異常、蟲蛀、損傷、腐爛的為死種子。離體胚測定的原理：將離體胚在規(guī)定的條件下培養(yǎng)5~10d有生活力的胚仍然保持堅硬新鮮的狀態(tài)，或者吸水膨脹、子葉展開轉(zhuǎn)綠，或者胚根和側(cè)根伸長、長出上胚軸和第1葉；無生活力的胚，則呈現(xiàn)腐爛的癥狀染料染色法測定原理:活細(xì)胞原生質(zhì)膜具有選擇透性，染料大分子不能進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)，胚部等活組織不能被染料染色；死的種胚細(xì)胞因原生質(zhì)膜喪失選擇吸收能力，故可被染料染色種子活力：決定種子或種子批在發(fā)芽和出苗期間的活性水平和行為的那些種子特性的綜合表現(xiàn)。種子活力、種子生活力、種子發(fā)芽力三者之間的關(guān)系：（1） 高活力的種子一定具有高的發(fā)芽力和生活力（2） 具有高發(fā)芽力的種子也必定具有高的生活力（3） 具有生活力的種子不一定都具發(fā)芽力，能發(fā)芽的種子活力也不一定局。發(fā)芽測定法（3類）：（1）標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)（發(fā)芽速率測定）法（最古老和最為簡單的方法，適用于各種作物。）（2）幼苗生長量測定法：適用于具有直立胚芽或胚根的禾谷類和蔬菜種子，采用紙卷直立發(fā)芽法。（3）幼苗評定試驗(yàn)：對大粒豆類種子，細(xì)弱苗也可達(dá)到相當(dāng)?shù)拈L度，不能用幼苗長度表示活力，采用標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)方法，幼苗評定時分成不同等級。電導(dǎo)率測定：（1）測定原理：種子吸脹初期，細(xì)胞膜重建和修復(fù)能力影響電解質(zhì)（如氨基酸、有機(jī)酸、糖及其他離子）滲出程度，膜完整性修復(fù)速度越快，滲出物越少。高活力種子能夠更加快速地重建膜，且最大限度修復(fù)任何損傷；高活力種子浸泡液的電導(dǎo)率低于低活力種子。（2）測定方法：取50粒種子稱重（精確至2位小數(shù)）2個重復(fù)。取燒杯3個，用熱水和去離子水洗凈。將種子放入燒杯中，加入250ml去離子水，另一燒杯內(nèi)加去離子水作對照。所有燒杯于201條件下放置24h，用電導(dǎo)儀測定浸泡液和對照的電導(dǎo)率。種子真實(shí)性：指一批種子所屬品種、種或?qū)倥c文件描述（品種證書、標(biāo)簽等）是否相同。即種子樣品的真假。品種純度：品種個體之間在特征、特性方面典型一致的程度，用本品種的種子數(shù)占供檢樣品種子數(shù)的百分率表示。即品種一致性程度的高低。品種真實(shí)性和純度鑒定的方法分類（1）根據(jù)其所依據(jù)的原理不同主要可分為：1）形態(tài)鑒定：籽粒、種苗、植株形態(tài)測定；2）物理化學(xué)法鑒定：熒光鑒定法、煮沸法；苯酚染色法、碘化鉀染色法；3）生理生化法鑒定：愈創(chuàng)木酚染色法、電泳法、色譜法、免疫技術(shù)；4）分子生物學(xué)方法鑒定：分子標(biāo)記技術(shù)；5）細(xì)胞學(xué)鑒定：染色體數(shù)目（2）依據(jù)檢驗(yàn)的對象分：1）種子純度測定2）幼苗純度測定3）植株純度測定（3）根據(jù)檢驗(yàn)的場所分：1）田間純度檢驗(yàn)2）室內(nèi)純度檢驗(yàn)3）田間小區(qū)種植檢驗(yàn)苯酚（石炭酸）染色法（1）染色原理：由于每個品種皮殼內(nèi)酚酶活性不同，將苯酚氧化呈現(xiàn)深淺不同的褐色。（2）適用范圍：小麥、水稻和燕麥、大麥、黑麥草、早熟禾等牧草種子。愈創(chuàng)木酚法原理：大豆種皮內(nèi)具有過氧化物酶，能使過氧化氫分解而放出氧，使愈創(chuàng)木酚氧化而產(chǎn)生紅棕色的4-鄰甲氧基醍。應(yīng)用電泳鑒定品種的理論基礎(chǔ)：電泳基礎(chǔ)帶電顆粒在電場作用下向與其電性相反方向的電極移動的現(xiàn)象稱電泳。蛋白質(zhì)帶有電荷，因此在電場中能泳動。品種鑒定中，個體或群體間酶及蛋白質(zhì)成分的差異，反映基因表達(dá)的差異。電泳技術(shù)可非常準(zhǔn)確地分析種子蛋白質(zhì)或同工酶的差異，進(jìn)而區(qū)分不同品種種子純度電泳檢測的一般程序：（1）樣品的提取；（2）凝膠的制備（3）加樣電泳（4）染色（5）譜帶分析田間檢驗(yàn)：在種子生產(chǎn)過程中，在田間對品種真實(shí)性進(jìn)行驗(yàn)證，對品種純度進(jìn)行鑒定，對作物生長狀況、病蟲危害、異作物和雜草等情況進(jìn)行調(diào)查，并確定其與特定要求符合程度的活動（種子能否作為種用）。一般由地方種子檢驗(yàn)部門負(fù)責(zé)。田間檢驗(yàn)時期：種子田在生長季節(jié)可以檢查多次，通常為苗期、花期、成熟期，至少應(yīng)在品種特征、特性表現(xiàn)最充分、最明顯的時期檢查一次。常規(guī)作物通常在成熟期；雜交作物在花期或花藥開裂前；蔬菜作物則在食用器官成熟期17.田間檢驗(yàn)方法（程序）：（1） 取樣1）了解情況:＜1＞了解種子田基本情況＜2＞檢查隔離情況＜3＞檢查種子田總體狀況;2）劃分檢驗(yàn)區(qū);3）設(shè)點(diǎn)（2） 檢驗(yàn)：邊設(shè)點(diǎn)邊檢驗(yàn)，（根據(jù)品種特征特性）逐株觀察（3） 結(jié)果與報告種子水分（種子含水量）:指種子中所有自由水與束縛水的總量占種子總重量的百分率。種子水分測定的意義：（1）保證種子安全貯藏（2）種子水分是種子分級的主要（四大）指標(biāo)之一（3）節(jié)約貯運(yùn)費(fèi)用（體積、重量）種子水分測定的方法：（1） 標(biāo)準(zhǔn)測定方法：烘干減重法:樣品烘干后失去水分的重量計算種子水分百分率。（2） 其他方法：1）（卡爾-費(fèi)休）滴定法：適用于微量水份的測定。2）（甲苯）蒸餾法：適用于含揮發(fā)性物質(zhì)的樣品。3）快速法（電容式、電阻式和紅外線水分測定儀）。標(biāo)準(zhǔn)測定法：（1）低恒溫烘干法（標(biāo)準(zhǔn)：103偵8h，一次烘干）：適用種類--所有農(nóng)業(yè)、園藝和牧草種子。特別是油料作物種子（油分易于氧化而揮發(fā)而降低樣品重量）必須采用此法。蔥屬、花生、蕓苔屬、辣椒、大豆、棉屬、向日葵、蘿卜、蓖麻、芝麻、茄子、所有林木種類等。（2）高恒溫烘干法（標(biāo)準(zhǔn)：130C1h）:適用種類：除油料作物以夕卜的種子。禾谷類、豆類、禾本科牧草、豆科牧草、芹菜、胡蘿卜、茴蘺、石刁梢、甜菜、西瓜、黃瓜、萵苣、番茄、菠菜、大麻、煙草等。（3）（高水分種子）預(yù)先（二次）烘干法:適用種類--需要磨碎的高水分種子。禾谷類種子水分超過18%，豆類和油料作物水分超過16%時，必須采用預(yù)先烘干法。電阻式水分速測儀測定原理：在一閉合電路中，當(dāng)電壓一定時，電流強(qiáng)度與電阻成反比（歐姆定律I二U/R）。把種子作為電阻接入電路中，電流隨種子自由水含量的高彳氐而變化。把電表的刻度轉(zhuǎn)換成相應(yīng)水分的刻度。電容式水分速測儀測定原理。電容是表示導(dǎo)體容納電量的物理量。電容量的大小與物質(zhì)的介電常數(shù)（6）和兩極板對應(yīng)面積（s）成正比，與兩極間的距離（d）成反比。當(dāng)兩極板的距離一定，測試的樣品量一定（即兩極的對應(yīng)面積一定）時，電容量的變化只與介電常數(shù)變化有關(guān)。空氣的介電常數(shù)為1,種子干物質(zhì)為10，水為81，因此種子內(nèi)水分變化，就會引起介電常數(shù)的變化，從而引起電容的變化。若將種子放在電路中，作為電容的一個組成部分，測得電容的大小就可間接測得水分含量。甲苯蒸餾法測定原理：甲苯為有機(jī)溶劑，不溶于水，沸點(diǎn)為110.51，相對密度為0.867,當(dāng)其與樣品共沸時，水分首先蒸發(fā)，同時也伴有甲苯蒸發(fā)，經(jīng)冷凝滴入測量管中。由于甲苯不溶于水，且相對密度較水小，二者共存時有明顯的界面，蒸餾完畢，可測出水的體積。根據(jù)水分體積和樣品重量，計算樣品的含水量。種子健康檢驗(yàn)：對種子所攜帶病（真菌、細(xì)菌及病毒）蟲（線蟲及害蟲）害種類及數(shù)量進(jìn)行檢驗(yàn)。（表示方法：種子帶病率；種子蟲害率。）種子病原物的檢驗(yàn)方法：（1）肉眼檢驗(yàn)（2）過篩檢驗(yàn)（3）洗滌檢驗(yàn)（4）漏斗分離檢驗(yàn)（5）萌芽檢驗(yàn)（6）分離培養(yǎng)檢驗(yàn)（7）噬菌體檢驗(yàn)（8）接種指示植物法（9）血清學(xué)檢驗(yàn)（10）隔離種植檢驗(yàn)26.種子害蟲的檢驗(yàn)方法：（1）肉眼檢驗(yàn)（2）過篩檢驗(yàn)（3）剖粒檢驗(yàn)（4）染色檢驗(yàn)（5）相對密度檢驗(yàn)種子質(zhì)量評定：對種子的品種品質(zhì)和播種品質(zhì)檢驗(yàn)得到的結(jié)果與現(xiàn)行有效規(guī)定的最低標(biāo)準(zhǔn)或與標(biāo)簽（發(fā)票、合同、協(xié)議、檢驗(yàn)報告單、廣告目錄等）標(biāo)注進(jìn)行比較，并給出相應(yīng)結(jié)論的過程。種子質(zhì)量評定的依據(jù)和原則（1）種子質(zhì)量評定的依據(jù)：1）國家標(biāo)準(zhǔn)：2）行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：3）地方標(biāo)準(zhǔn)：4）企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：（2）種子質(zhì)量評定的原則：1）品種品質(zhì)評定的一般原則品種品質(zhì)的優(yōu)劣取決于品種的真實(shí)性和一致性。同一批種子當(dāng)田間和室內(nèi)純度檢驗(yàn)結(jié)果不一致時，應(yīng)以純度低的為準(zhǔn)。若田間品種純度過低，達(dá)不到國家分級標(biāo)準(zhǔn)的最低指標(biāo)時，應(yīng)嚴(yán)格去雜，經(jīng)檢驗(yàn)合格后作為種用，否則不能作為種用。若室內(nèi)純度低于國家分級標(biāo)準(zhǔn)最低指標(biāo)時，絕不能作種用。2）雜交種品種品質(zhì)的評定：察看親本純度、制種田的隔離條件是否符合制種要求。田間雜株（穗）率（父本雜株散粉率、母本雜株率及母本散粉率）在分級指標(biāo)內(nèi)國夕卜種子質(zhì)量分級標(biāo)準(zhǔn)的特點(diǎn)：（1） 品種純度的大多數(shù)指標(biāo)側(cè)重于過程控制的指標(biāo)，很少規(guī)定最終產(chǎn)品的指標(biāo)（因?yàn)樽罱K產(chǎn)品指標(biāo)在短期內(nèi)無法鑒定），標(biāo)準(zhǔn)容易實(shí)施。（2） 品種純度指標(biāo)與室內(nèi)檢測指標(biāo)（凈度、發(fā)芽率）分開（因?yàn)橄耦A(yù)基礎(chǔ)種子、基礎(chǔ)種子沒有發(fā)芽率規(guī)定的約束，可以較低）切合種子繁殖的實(shí)際情況。（3） 國際規(guī)定的品種純度的指標(biāo)都比較高，且與前作、隔離條件、親本種子質(zhì)量等結(jié)合起來使用。（4）種子的物理質(zhì)量（如凈度、發(fā)芽率等）（OECD）沒有規(guī)定具體的標(biāo)準(zhǔn)，只規(guī)定必須滿足進(jìn)口國的最低標(biāo)準(zhǔn)國際種子檢驗(yàn)證書包括種子批證書①橙色國際種子批證書②綠色國際種子批證書、種子樣品證書③藍(lán)色國際種子樣品證書、檢驗(yàn)報告種子標(biāo)簽：固定在種