枳實(shí)活性成分研究

枳實(shí)活性成分研究

通常，中藥茯苓種子屬于廣州植物，是一種干燥的幼果。枳實(shí)中主含3種類(lèi)型的有效成分,一類(lèi)是揮發(fā)油類(lèi)成分,另一類(lèi)為橙皮甙類(lèi),還有一類(lèi)重要的成分是生物堿類(lèi)成分。枳實(shí)靜脈注射給藥具有明顯的升血壓作用,70年代我國(guó)學(xué)者發(fā)現(xiàn)其升血壓成分是生物堿類(lèi)成分辛弗林及N-甲基酪胺,因此在“七五”及“八五”期間作為升血壓急救中藥進(jìn)行研究,南京中醫(yī)藥大學(xué)的國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“抗厥注射液”中的重要組成藥物之一就是枳實(shí)。我們以兔血管動(dòng)脈條的藥理活性為追蹤指標(biāo),對(duì)枳實(shí)的活性成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究,從中分離并鑒定出4種活性成分,它們是乙酰去甲辛弗林(Ⅰ,又名乙酰真蛸胺N-acetyloctopamine)、辛弗林(Ⅱ)、N-甲基酪胺(Ⅲ)及γ-氨基丁酸。γ-氨基丁酸為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn),乙酰去甲辛弗林首次在植物中分得。1實(shí)驗(yàn)材料1.1紅外光譜和質(zhì)譜熔點(diǎn)儀用PHMK79/2212型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀測(cè)定(溫度未校正);紅外光譜用NecoletIR-5DXFT型紅外光譜儀測(cè)定(KBr壓片)。核磁共振譜用Bruker公司ACF-300或ACF-500型核磁共振儀測(cè)定(TMS作內(nèi)標(biāo))。質(zhì)譜用NicoletFTMS-2000型質(zhì)譜儀測(cè)定。硅膠H及GF254由青島海洋化工廠生產(chǎn)。1.2特芬材料枳實(shí)購(gòu)自南京市藥材公司,品種經(jīng)本校中藥鑒定教研室吳啟南副教授鑒定。2實(shí)驗(yàn)方法2.1流份及其化合物檢測(cè)枳實(shí)粗粉5kg用75%的EtOH滲漉,回收EtOH得油狀提取物。提取物加酒精至濃度為90%,濾取清液,回收酒精,得浸膏50g,拌硅膠后上硅膠H(300g)柱,以石油醚-乙酸乙酯進(jìn)行梯度洗脫,每2000mL為一個(gè)流份,洗脫液回收后梯加5%的乙酸乙酯,50流份后再梯加5%的甲醇,共收集90流份。以硅膠GF254板作TLC檢查,先在紫燈外下254nm檢測(cè)暗斑,再?lài)娨?%茚三酮顯色。斑點(diǎn)相同的流份(4,13~14,23~35,41~43,45~47,58~64,79~87)為一個(gè)成分組,每組選一個(gè)樣品作活性試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)流份4、25、45、75等4個(gè)樣品具升血壓活性。其中流份主成分為暗斑,而另3個(gè)流份均主含茚三酮顯色成分。流份4再上硅膠柱,以乙酸乙酯—丙酮梯度洗脫,得結(jié)晶Ⅰ,流份25~31析出結(jié)晶Ⅱ,流份45~47再上硅膠柱,以乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫得結(jié)晶Ⅲ,流份79~87上硅膠柱,乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫得油狀物Ⅳ。2.2辛弗林基基結(jié)構(gòu)Ⅰ無(wú)色針晶,mp:165~166℃;1H-NMR(CD3COCD3):見(jiàn)表1,EIMS(m/z)∶195(M+),177(M+-H2O),136(M+-Ac),123(HOC6H4CHOH),95(123-CO)。硅膠GF254TLC檢查(氯仿-甲醇4∶1展開(kāi))在254nm下呈現(xiàn)暗斑,其Rf值為0.65(辛弗林Rf值0.2),茚三酮顯色不明顯,顯色后久置略呈暗紅色。EIMS顯示Ⅰ的分子離子峰為195,其分子量與辛弗林分子量相比多了28,紅外光譜中示有1713cm-1羰基特征,可能為羰基。其1H-NMR譜與辛弗林極為相似,見(jiàn)表1。根據(jù)其氫譜,δ6.71(2H,d)及δ7.15(2H,d)的AA′BB′系統(tǒng)特征為對(duì)位取代芳環(huán)特征,其中一個(gè)取代基為酚羥基。另一組δ3.39(1H,dd)、δ3.22(1H,dd)、δ4.60(1H,dd)ABX氫為-CH2-CHOH-,而X質(zhì)子不僅與氧相連,還與使之向低場(chǎng)移動(dòng)的基團(tuán)連接。還有一個(gè)甲基δ2.76(3H,s)的化學(xué)位移符合氮甲基或羰甲基特征。從質(zhì)譜給出的分子量減去以上片段結(jié)構(gòu),應(yīng)有一個(gè)羰基存在。從顯色反應(yīng)分析,結(jié)晶Ⅰ茚三酮顯色不明顯,說(shuō)明Ⅰ的NH化學(xué)環(huán)境與辛弗林中的NH明顯不同;同時(shí)其紅外光譜1713cm-1顯示羰基不與苯環(huán)共軛(否則在1690cm-1左右)。因此晶Ⅰ結(jié)構(gòu)所示,是乙酰去甲基辛弗林。Ⅱ無(wú)色針晶,mp:180~181℃;TLC檢查與標(biāo)準(zhǔn)品Rf值一致,1H-NMR(D2O):δ2.69(3H,s),3.20(2H,m),4.90(1H,m),7.13(2H,d,J=8Hz)。成分Ⅱ?yàn)樽笮?對(duì)羥基弗林(辛弗林)。Ⅲ無(wú)色針晶,mp:130~131℃;1H-NMR(D2O):δ2.62(3H,s),2.87(2H,t,J=7.5Hz),3.19(2H,t,J=7.5Hz),6.62(2H,d,J=8HZ),7.13(2H,d,J=8Hz)。成分Ⅲ為N-甲基酪胺。Ⅳ油狀物,1H-NMR(D2O):δ3.02(2H,t,J=6.9Hz),2.34(2H,t,J=6.9Hz),1.92(2H,m,J=6.9Hz),成分Ⅳ為γ-氨基丁酸。3-氨基丁酸屬枳實(shí)中提取出來(lái)的4種活性成分經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定分別為乙酰去甲辛弗林(Ⅰ,又名乙酰真蛸胺N-acetyloctopamine)、辛弗林(Ⅱ)、N-甲基酪胺(Ⅲ)及γ-氨基丁酸,其中乙酰去甲辛弗林首次在植物中分得,γ-氨基丁酸首次在該屬植物中發(fā)現(xiàn)。4乙酰去甲辛弗林枳實(shí)中提取出來(lái)的4種活性