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文檔簡介
薄層色譜法thinlayerchromatography,TLC2021/3/101第一節(jié)薄層色譜法的基本原理
定義:薄層色譜法是將被分離的試樣溶液點在薄層板的一端,再用溶劑把試樣展開,從而使試樣組分分離。分型:吸附薄層色譜、分配薄層色譜法、離子交換薄層色譜法、凝膠色譜等。2021/3/102(一)薄層色譜法的原理將一定粒度的吸附劑均勻地涂鋪在表面光潔的玻璃板或塑料平板上,制成薄層板。
2021/3/103把待分析試樣的溶液滴加在薄層板的起始線上(點樣)
薄層板試樣原點2021/3/104把薄層板放入層析缸中,底端浸入適當溶劑。
2021/3/105展開過程中,組分在兩相之間發(fā)生多次吸附—解吸平衡,吸附牢的組分隨展開劑移動慢,吸附弱的組分隨展開劑移動快,一段時后,組分被分離,各組分在薄層板上形成不同距離的斑點。前沿原點AB2021/3/106比移值Rf溶劑
前沿起始線ABabcABRf值相差越大,分離越好。一般要求分離后組分的Rf值在0.2~0.8之間,各組分的Rf值之差應大于0.05,以防斑點重疊。2021/3/107(二)固定相和流動相1、固定相(吸附劑)常用的吸附劑:硅膠、氧化鋁、聚酰胺、活性炭和大孔吸附樹脂等。吸附劑的選擇要合適,與流動相、被分離化合物不反應2021/3/1082、流動相(展開劑)薄層色譜法中采用單一溶劑或多元混合溶劑作流動相,稱為展開劑。與吸附柱色譜法中選擇流動相的一般規(guī)則相同,展開劑的選用要從被分離試樣組分極性、吸附劑活性和展開劑的極性三個因素綜合考慮。2021/3/109吸附劑和展開劑的選擇對于極性較小的被分離試樣組分,應選用活性較強的吸附劑,極性較小的展開劑;對于極性較大的被分離試樣組分,應選用活性較弱的吸附劑,極性較大的展開劑。2021/3/1010被分離試樣組分極性、吸附劑活性和展開劑極性之間的關系活潑吸附劑(固定相)展開劑(流動相)極性不活潑被分離物質BB’ACC’非極性非極性極性A’ⅤⅠ2021/3/1011展開劑成分的選擇:對于容易分離的化合物,用單一溶劑展開優(yōu)點:溶劑簡單,分離重現(xiàn)性好。對于難分離組分,則選用二元、三元、甚至多元溶劑Rf太小——加入強極性展開劑Rf過大——降低展開劑的極性2021/3/1012優(yōu)化1.占比例較大的溶劑為主要溶劑,可使試樣組分溶解并基本分離。占比例較小的溶劑可進一步調(diào)整各組分Rf值,改善分離效果。2.分離酸性或堿性組分時,往往在展開劑中加入少量酸或堿,以防這些組分離解,使這些組分的斑點更加集中和清晰,從而提高分離度。3.當展開劑的粘度太大時,可在展開劑中加入粘度小的溶劑,以降低展開劑粘度,從而提高展開速度。2021/3/1013謝謝thankyou2021/3/1014謝謝觀賞WPS
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