藥物分析第12章 甾體激素類藥物的分析

第十二章甾體激素類藥物的分析TheAnalysisofSteroidHormoneDrugs一、化學結構與性質（化學性質與分析方法間的關系）二、鑒別試驗三、特殊雜質檢查四、含量測定學習內容

1.掌握甾體激素類藥物的分類；結構特征與分析方法間的關系；鑒別試驗的化學鑒別法；有關物質的檢查方法；含量測定的方法；

2.熟悉其它特殊雜質及其檢查方法；

3.了解甾體激素類藥物中的其他分析內容。目的要求第一節(jié)結構與性質基本結構：環(huán)戊烷并多氫菲分類：甾體激素腎上腺皮質激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌性激素第一節(jié)結構與性質一、腎上腺皮質激素

性質：

1.A環(huán)：

4-3-酮結構（

,

-不飽和酮）

a.共軛體系：紫外吸收；b.羰基：與羰基試劑反應；

2.17位

-醇酮基，具有還原性；

3.C21羥基成酯，水解成羧酸；

4.9

鹵素取代，可轉化為無機鹵素離子后進行分析。第一節(jié)結構與性質二、雄性激素及蛋白同化激素性質：

1.A環(huán)：

4-3-酮結構（

,

-不飽和酮）

a.共軛體系：紫外吸收；b.羰基：與羰基試劑反應；

2.C21羥基成酯，水解成羧酸。第一節(jié)結構與性質三、孕激素性質：

1.A環(huán)：

4-3-酮結構（

,

-不飽和酮）

a.共軛體系：紫外吸收；b.羰基：與羰基試劑反應；

2.C17甲酮基：顯色反應；

3.C17羥基成酯，水解成羧酸。第一節(jié)結構與性質四、雌激素性質：

1.A環(huán)為苯環(huán)：紫外吸收；

2.酚羥基取代：三氯化鐵反應

3.C17乙炔基：與硝酸銀反應。第二節(jié)鑒別實驗1.

與強酸的呈色反應文獻報道其反應機制為：酮基先質子化，形成碳正離子后與HSO4-作用呈色。以硫酸的呈色反應應用最為廣泛。一、化學鑒別法★第二節(jié)鑒別試驗第二節(jié)鑒別實驗第二節(jié)鑒別試驗2.

官能團的反應

1）C17

-醇酮基的反應（還原性）（腎上腺皮質激素）

腎上腺皮質激素類藥物，能與多種氧化劑（如堿性酒石酸銅試液、氨制硝酸銀試液、四氮唑鹽試液等）反應。第二節(jié)鑒別試驗2.

官能團的反應

2）酮基的呈色反應（腎上腺皮質激素、孕激素）

C3-酮基和C20-酮基可與2,4-二硝基苯肼、硫酸苯肼、異煙肼等羰基試劑反應，形成黃色的腙。3）酚羥基的呈色反應（雌激素）雌激素A環(huán)上的酚羥基，可與三氯化鐵反應呈色。第二節(jié)鑒別實驗第二節(jié)鑒別試驗2.

官能團的反應4）甲酮基的呈色反應（黃體酮的專屬性鑒別反應）含有甲酮基或活潑亞甲基，能與亞硝基鐵氰化鈉反應呈色。黃體酮藍紫色亞硝基鐵氰化鈉其他甾體淡橙色或不顯色第二節(jié)鑒別試驗2.

官能團的反應5）炔基的沉淀反應乙炔基的活潑氫與硝酸銀作用，生成白色的炔銀沉淀。

6）鹵素的反應氟：氧瓶燃燒破壞后的茜素氟藍比色法，生成藍紫色的水溶性配位化合物。

第二節(jié)鑒別實驗第二節(jié)鑒別試驗2.

官能團的反應7）水解產物的反應具有酯鍵的藥物，可根據(jù)水解生成的羧酸的性質進行鑒別。

8）鈉鹽或磷酸鹽的反應參照“一般鑒別試驗”中“鈉鹽”或“磷酸鹽”的鑒別反應進行鑒別。

第二節(jié)鑒別實驗1.

熔點2.比旋度3.吸收系數(shù)二、物理常數(shù)的測定第二節(jié)鑒別試驗三、制備衍生物測定熔點四、光譜法

紫外分光光度法：最大吸收波長處的吸光度、某兩個波長處吸光度的比值紅外分光光度法：譜圖的一致性五、色譜法（保留時間或Rf值一致）第二節(jié)鑒別實驗第三節(jié)特殊雜質檢查一、其它甾體的檢查1.定義：與標示藥物結構不同的甾體化合物都稱為“其他甾體”。2.來源：原料、中間體、異構體、降解產物3.特點：（1）可能存在多個甾體雜質（2）結構類似4.方法（具有一定分離能力）：（1）TLC法（高低濃度對比法）（2）HPLC法（類似高低濃度對比法）第二節(jié)鑒別實驗第三節(jié)特殊雜質檢查一、其它甾體的檢查4.方法（具有一定分離能力）：（1）TLC法（自身稀釋對照法）

判定方法：

★規(guī)定雜質斑點數(shù)目

★規(guī)定雜質斑點顏色（2）HPLC法（不加校正因子的主成分自身對照法）

判定方法：

★規(guī)定雜質峰數(shù)目

★規(guī)定雜質峰面積第三節(jié)特殊雜質檢查二、游離磷酸鹽的檢查三、殘留溶劑的檢查（GC）四、硒的檢查

“硒檢查法”（二氨基萘比色法）五、乙炔基的檢查

硝酸銀與乙炔基的活潑氫作用，生成一份子硝酸，可用氫氧化鈉滴定。六、氟的檢查

氧瓶燃燒破壞后的茜素氟藍比色法。第三節(jié)特殊雜質檢查

《中國藥典》凡例指出：檢查項下包括安全性、有效性、均一性和純度要求四個方面。安全性：無菌、熱源、細菌內毒素、異常毒性、升壓或降壓物質等方面的檢查；有效性：與療效相關，但在鑒別、純度檢查和含量測定中不能有效控制的項目，如不同構型或晶型療效差異較大的原料藥中無效（或低效）構型或晶型的檢查；難溶性藥物制劑溶出度或釋放度的測定；均一性：對制劑均勻度的檢查，如重量差異、含量均勻度等；純度：對藥物中的雜質進行檢查，是檢查項下的主要內容。一、比色法（一）四氮唑比色法

1.四氮唑鹽的種類

（1）氯化三苯氮唑（TTC）：還原產物為不溶于水的深紅色三苯甲臜，又稱為紅四氮唑（RT），λmax在480~490nm。（2）藍四氮唑（BT）：還原產物為暗紅色的雙甲臜，λmax在525nm左右。第四節(jié)含量測定（一）四氮唑比色法

2.原理

腎上腺皮質激素類藥物的C17

-醇酮基具有還原性，在強堿性溶液中能將四氮唑鹽定量地還原為有色甲臜（fromazan)。甲臜在一定波長下具有最大吸收，可用比色法進行含量測定。生成的顏色隨所用的試劑和條件的不同而不同。第四節(jié)含量測定（一）四氮唑比色法

2.原理第四節(jié)含量測定

反應機理：①

-醇酮基失去2個電子被氧化為C20-酮基-C21-醛基，在堿催化下，分子內部進行重排，有部分形成C20-羥基-C21-羥基衍生物；②C20-C21鍵斷裂形成甾基甲酸衍生物和甲醛。四氮唑鹽得到2個電子，開環(huán)形成甲瓚而呈色。（一）四氮唑比色法

3.方法第四節(jié)含量測定

精密量取對照品溶液及供試品溶液各1ml，分別置干燥具塞試管中，各精密加無水乙醇9ml與氯化三苯四氮唑試液1ml，搖勻，各再精密加氫氧化四甲基銨試液1ml，搖勻，在25℃的暗處放置40~50min，在485nm的波長處分別測定吸收度，計算，即得。4.

討論

a.

基團的影響C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯C16無論何種取代基ν↓簡單酯＞復雜酯（一）四氮唑比色法

4.討論

b.溶劑和水分的影響

第四節(jié)含量測定含水量＞5%→ν↓含水30%→幾無反應

無水乙醇含水10%→A↓10%無醛無水乙醇醛→A↑（一）四氮唑比色法

4.討論

c.堿的種類及加入順序的影響

第四節(jié)含量測定

反應應在強堿性（pH13.75）條件下進行，以氫氧化四甲基銨的結果最佳。加入順序：（一）四氮唑比色法

4.討論

d.空氣中氧及光線的影響第四節(jié)含量測定反應過程反應產物怕光→避光、快速O2影響顏色強度和穩(wěn)定性→隔絕空氣、快速測定、充N2e.溫度與時間的影響t℃↑→ν↑→甲瓚分解↑ChP25℃40～45′（一）四氮唑比色法

5.特點

缺點影響因素太多優(yōu)點測定結果能指示藥品的穩(wěn)定性（氧化及降解產物無此反應）

第四節(jié)含量測定一、比色法（二）異煙肼比色法

原理

C3-酮基及某些其它位置上的酮基能在酸性條件下與羰基試劑異煙肼縮合，生成黃色的異煙腙，在一定波長處具有最大吸收。第四節(jié)含量測定一、比色法（三）Kober反應比色法

原理

雌激素與硫酸-乙醇反應呈色，用水或稀硫酸稀釋后，重新加熱，顏色發(fā)生改變，在515nm附近有最大吸收。第四節(jié)含量測定λmax=465λmax=515二、HPLC第四節(jié)含量測定三、紫外分光光度法四、硝酸銀-氫氧化鈉滴定法1.甾體激素類藥物的結構中能和四氮唑鹽發(fā)生顯色反應的基團()A.酚羥基B.活潑次甲基C.甲酮基

D.C17-α-醇酮基E.酮基2.用異煙肼比色法測定甾體激素藥物含量時，其溶液的環(huán)境是()A．強酸性B．中性C．強堿性

D．弱堿性E．以上都不對3.異煙肼比色法()4.硫色素反應()5.紫外分光光度法()6.羥肟酸鐵反應()A．維生素B1B．醋酸地塞米松C．兩者皆是D．兩者皆不是練習7.可用于氫化可的松鑒別的試劑有()A．氨制硝酸銀B．異煙肼C．紅四氮唑

D．硫酸E．重氮苯磺酸8.可用于甾體激體類藥物的測定方法有

A．高效液相色譜法B．四氮唑鹽法C．紫外分光光度法D．異煙肼比色法E．Kober反應比色法9.能與亞硝基鐵氰化鈉反應生成蘭紫色的藥物是

A．雌二醇B．黃體酮C．醋酸可的松

D．苯丙酸諾龍E．以上都不對練習10.異煙肼比色法測定甾體激素類藥物時，藥物的呈色基團是

A.酮基B.酚羥基C.活潑次甲基

D.炔基E.甾體母核11.四氮唑比色法可用于下列哪個藥物的含量測定

A.可的松B.睪丸素C.雌二醇

D.炔雌醇E.黃體酮[12-16]可適用的藥物：A.可的松B.雌二醇C.兩者均可D.兩者均不可12.亞硝酸鈉滴定法（）13.高效液相色譜法（）14.能與羰基試劑縮合（）