《組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱

《組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱

課程代碼：10271815課程名稱：組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)英文名稱：HistochemistryandImmunohistochemistry課程類別：學(xué)科基礎(chǔ)課課程性質(zhì)：選修課授課對(duì)象：白求恩醫(yī)學(xué)班開(kāi)課學(xué)期：第3短學(xué)期課程學(xué)時(shí)：20學(xué)時(shí)選用教材：《組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)》（第1版）

李

和、周莉主編

人民衛(wèi)生出版社

2008年8月授課地點(diǎn)：形態(tài)學(xué)教學(xué)中心一、實(shí)驗(yàn)教學(xué)目標(biāo)組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)是應(yīng)用免疫學(xué)及組織化學(xué)原理，對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些多肽和蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)進(jìn)行原位定性、定位或定量研究的技術(shù)，此技術(shù)已成為醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)研究中重要的研究手段之一。學(xué)生通過(guò)本課程掌握石蠟、冰凍組織切片標(biāo)本制作和HE染色、堿性磷酸酶染色和免疫組織化學(xué)SP法染色技術(shù)，同時(shí)，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，分析問(wèn)題和解決問(wèn)題。通過(guò)本課程的基本技能訓(xùn)練，掌握醫(yī)學(xué)形態(tài)學(xué)研究思維方式和基本方法，并在實(shí)際工作中觸類旁通，靈活運(yùn)用。

二、實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)分配序號(hào)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱實(shí)驗(yàn)教學(xué)類型實(shí)驗(yàn)性質(zhì)實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)1組織標(biāo)本石蠟切片制備與HE染色綜合性實(shí)驗(yàn)必修82堿性磷酸酶染色綜合性實(shí)驗(yàn)必修43免疫組織化學(xué)染色SP法綜合性實(shí)驗(yàn)必修54實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)自講、自評(píng)設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)必修3總計(jì)

20

三、實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容

實(shí)驗(yàn)一

組織標(biāo)本石蠟切片制備與HE染色（8學(xué)時(shí)）PreparationandHEstainingofparaffintissuesections【實(shí)驗(yàn)要求】掌握：組織標(biāo)本石蠟切片制作技術(shù)；組織切片HE染色技術(shù)。了解：組織標(biāo)本冰凍切片制作技術(shù)?！緦?shí)驗(yàn)內(nèi)容】1．組織標(biāo)本石蠟切片和HE染色實(shí)驗(yàn)步驟原理2．組織取材、固定、脫水和透明、浸蠟、包埋、修塊、切片。3．示教：組織取材、冰凍切片。4．HE染色：烤片、脫蠟、梯度乙醇水化、蘇木精染色，伊紅染色、分色、上行梯度乙醇脫水、透明、封片。5．光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果并拍照

實(shí)驗(yàn)二

堿性磷酸酶染色（4學(xué)時(shí)）Alkalinephosphatasestaining【實(shí)驗(yàn)要求】掌握：組織化學(xué)常用的堿性磷酸酶顯示方法?！緦?shí)驗(yàn)內(nèi)容】1．堿性磷酸酶顯示法實(shí)驗(yàn)步驟原理2．使用含有氯化鈣的孵育液孵育組織切片3．硝酸鈷置換4．硫化銨處理5．顯色和封片6．光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果并拍照

實(shí)驗(yàn)三

免疫組織化學(xué)染色SP法

（5學(xué)時(shí)）Immunohistochemistrystaining:SPmethod【實(shí)驗(yàn)要求】掌握：免疫組織化學(xué)SP法的基本原理、實(shí)驗(yàn)步驟和注意事項(xiàng)；了解：免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)的基本原理、實(shí)驗(yàn)步驟和注意事項(xiàng)?！緦?shí)驗(yàn)內(nèi)容】1．免疫組織化學(xué)SP法實(shí)驗(yàn)步驟原理和注意事項(xiàng)2．免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)步驟原理和注意事項(xiàng)3．示教：免疫熒光組織化學(xué)染色4．烤片、脫水和水化5．抗原修復(fù)、細(xì)胞膜打孔6．封閉非特異性反應(yīng)7．第一抗和第二抗體孵育；顯色劑顯色8．復(fù)染和封片9．光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果并拍照

實(shí)驗(yàn)四

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)—課堂討論（3學(xué)時(shí)）Experimentdesign—discussion【討論要求】掌握：通過(guò)設(shè)計(jì)自己感興趣的小實(shí)驗(yàn)（全文不少于2000字），掌握實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本思路和方法。熟悉：如何在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)。了解：醫(yī)學(xué)形態(tài)學(xué)的多種研究方法?！居懻搩?nèi)容】1．引言（研究背景）：包括該研究領(lǐng)域國(guó)內(nèi)、外主要研究進(jìn)展概要，本實(shí)驗(yàn)的目的和意義，約500字。2．實(shí)驗(yàn)材料與方法：包括實(shí)驗(yàn)對(duì)象（人或動(dòng)物）；主要試劑和儀器設(shè)備；實(shí)驗(yàn)方法中免疫組織化學(xué)或免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)需有詳細(xì)的操作流程）。3．

預(yù)期結(jié)果與結(jié)果分析。4．

學(xué)生分小組進(jìn)行自講、自評(píng)，最后教師總結(jié)和點(diǎn)評(píng)。

四、實(shí)驗(yàn)成績(jī)考核與評(píng)定方式本課程實(shí)驗(yàn)教學(xué)考核占總成績(jī)的50%。1．

標(biāo)本制備和染色：占總成績(jī)30%，包括

HE染色標(biāo)本、堿性磷酸酶染色和免疫組織化學(xué)染色各占10分。每位學(xué)生的三張染色切片標(biāo)本經(jīng)顯微攝影后提供照片，成績(jī)?cè)u(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)如下：照片顯示的陽(yáng)性結(jié)果與預(yù)期結(jié)果相符為4分；照片清晰為3分；照片顏色純正、構(gòu)圖美觀大方為3分。2．

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：占總成績(jī)的20%，成績(jī)?cè)u(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)如下：（1）（2）實(shí)驗(yàn)材料和方法（6分）：所用方法能達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康?分；在免疫組織化學(xué)或免疫熒光組織化學(xué)方法中抗體選擇正確2分；受試對(duì)象