毒理學(xué)研究現(xiàn)狀與展望

毒理學(xué)研究現(xiàn)狀與展望

近20年來，藥理學(xué)領(lǐng)域取得了前所未有的巨大進(jìn)步?？茖W(xué)和新思想的滲透及其運(yùn)用極大地促進(jìn)了新技術(shù)的發(fā)展。特別是細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)理論和技術(shù)的飛速發(fā)展,賦予毒理學(xué)工作者新的啟迪和工具,從而改變了毒理學(xué)研究的基本格局,真正實(shí)現(xiàn)了從整體和器官水平向細(xì)胞和分子水平的飛躍。1993年3月,美國著名的科學(xué)專欄評論家Marshall在“Science”雜志上以顯要的位置發(fā)表了題為“毒理學(xué)進(jìn)入分子水平”(Toxicologygoesmolecular)的專論,指出“一批新的毒理學(xué)家正在應(yīng)用超敏感的探針檢測細(xì)胞水平的毒效應(yīng),并制訂出預(yù)防接觸這些毒物的措施”(Anewbreadoftoxicologistsisusingultrasensitiveprobestodiscerntoxiceffectsatthecellularlevelandworkingonpreventivemeasuresforthoseexposed)。中國毒理學(xué)會(huì)理事長吳德昌院士在中國毒理學(xué)會(huì)第二屆學(xué)術(shù)會(huì)議(1997,5,西安)所作的“迎接21世紀(jì)的中國毒理學(xué)”報(bào)告中強(qiáng)調(diào),隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)的發(fā)展,毒理學(xué)也已經(jīng)和正在發(fā)生著巨大的進(jìn)展和變化,其中最重要的變化是“分子生物學(xué)理論和技術(shù)的引入,由于癌基因、抑癌基因、外源物受體刪除模型及其他相關(guān)領(lǐng)域的重大發(fā)現(xiàn)與進(jìn)展,使得人們對外源物致癌機(jī)理及生物學(xué)的理解有很大的提高,在研究方法中基因引入技術(shù)令人矚目,可以此來深入研究DNA所引起的毒理學(xué)作用”?？v觀我國毒理學(xué)的發(fā)展歷程,一些常用的細(xì)胞與分子生物學(xué)技術(shù),如:基因重組和克隆技術(shù)、核酸雜交技術(shù)、PCR技術(shù)、DNA測序技術(shù)以及一系列突變檢測技術(shù)已廣泛應(yīng)用于外來化學(xué)物和環(huán)境致癌物引起的DNA損害、基因突變、加合物形成、基因多態(tài)、癌基因和抑癌基因的檢測,數(shù)量逐年增加。特別是近年來,一些新的細(xì)胞與分子生物學(xué)技術(shù)的引進(jìn)與建立,大大提高了毒理學(xué)研究的整體水平?，F(xiàn)著重對我國近年來新開展的幾項(xiàng)細(xì)胞與分子生物學(xué)技術(shù)的原理及其在毒理學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)行評述。1基于差異顯示的基因pcr分子生物學(xué)的許多技術(shù)如Southern和Northern印跡技術(shù)、PCR技術(shù)和原位雜交技術(shù)等,都賴以應(yīng)用特定的探針或引物才可測知基因的改變和表達(dá)的情況,而某一基因的探針或引物常須在該基因已被克隆和了解之后才能獲得。由于各種化學(xué)毒物和環(huán)境危害因素引起的基因改變或新基因的出現(xiàn)大多是未知的。未知新基因的探查、分離和克隆是一項(xiàng)非常重要和具有創(chuàng)造性的工作,常用方法有差減雜交法(Subtractionhybridization),差異顯示法(Differentialdisplay)和染色體步移法(Cromosomewalking)。這些方法各有其優(yōu)缺點(diǎn),要求條件難易程度不同。在我國現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)條件下,不少單位已可開展前兩種技術(shù)。差減雜交法可有效地富集未知目的基因的表達(dá)片段,但它是一項(xiàng)十分耗時(shí)費(fèi)力的工作,而且存在著諸如需要大量的RNA為出發(fā)材料,實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣以及難以檢測低豐度的mRNA等缺點(diǎn),因此難以推廣。1992年LiangPeng與Pardee在差減雜交基礎(chǔ)上建立的差異顯示技術(shù),以RNA用量少、操作簡便快捷和靈敏度高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),使以上問題的解決有了突破性進(jìn)展,隨即被廣泛應(yīng)用。差異顯示技術(shù)是在轉(zhuǎn)錄水平上研究基因表達(dá)差異的有效方法。它通過一系列的錨定引物與隨機(jī)引物組合把不同種細(xì)胞(如正常和轉(zhuǎn)化細(xì)胞)的mRNA進(jìn)行分組反轉(zhuǎn)錄,用PCR方法擴(kuò)增cDNA,用序列凝膠電泳法顯示出擴(kuò)增結(jié)果,比較正常的和異常的cDNA帶,從而找出差異表達(dá)的基因。差異顯示技術(shù)建立至今僅6年時(shí)間,便在分析基因表達(dá)差異、繪制遺傳圖譜、分離特異性表達(dá)基因、臨床遺傳疾病的診斷等方面得到廣泛的應(yīng)用,并不斷得到改正和完善。我國學(xué)者在最近開始將這一技術(shù)應(yīng)用于毒理學(xué)和環(huán)境醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,取得了一定進(jìn)展。軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院李剛、吳德昌等利用mRNA差異顯示技術(shù)比較了原代大鼠氣管上皮細(xì)胞(RTE)與α-粒子誘發(fā)的惡性轉(zhuǎn)化RTE細(xì)胞之間基因表達(dá)的差異狀況,共觀察到近80個(gè)差異表達(dá)基因片段,排除假陽性片段后,對15個(gè)差異表達(dá)基因片段進(jìn)行了克隆、測序。共向GeneBank登錄7條新基因序列,為探討α-粒子輻射致癌機(jī)理和危險(xiǎn)度評估提供了重要資料;北京醫(yī)科大學(xué)魯民風(fēng)、劉霜等對黑色氧化鎳(Ni2O3)染毒后形態(tài)轉(zhuǎn)化的人胚肺細(xì)胞用mRNA差異顯示技術(shù)進(jìn)行測序和同源性分析,表明差異片段與Cyclophilin(一種與程序性細(xì)胞死亡時(shí)大片段DNA斷裂有關(guān)的基因)mRNA的329-795堿基序列同源;浙江醫(yī)科大學(xué)胡文蔚等也應(yīng)用這一技術(shù)觀察了烷化劑N-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍(MNNG)處理的猴腎Vero細(xì)胞的差異表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)MNNG單獨(dú)或合并環(huán)已亞胺(CHM)處理可誘導(dǎo)參與信號傳導(dǎo)的基因表達(dá)發(fā)生改變而影響信息傳遞。預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院劉秉慈目前正在進(jìn)行著“粉塵誘導(dǎo)的肺纖維化及癌變的基因差異顯示研究”的國家自然科學(xué)基金課題,這將為闡明粉塵誘癌機(jī)理和我國差異顯示技術(shù)的發(fā)展起推進(jìn)作用。2交聯(lián)電泳檢測細(xì)胞的研究進(jìn)展單細(xì)胞凝膠電泳(singlecellgelelectrophoresisSCGE)又稱彗星試驗(yàn)(Cometassay),是近年來廣泛開展的一項(xiàng)新的有核細(xì)胞DNA損害的檢測方法。1984年首先由Ostling和Johanson建立,最初是在中性電泳條件下檢測DNA雙鏈斷,隨后Sigh等(1988年)對實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了改良,利用堿性條件溶解分散于瓊脂糖凝膠中的細(xì)胞然后進(jìn)行電泳,使DNA雙螺旋變性解鏈后釋放出斷裂的碎片在電場中向陽極泳動(dòng),形成頭向陽極尾向陰極的彗星樣影像,大大提高了檢測DNA損害的敏感性,從而使該方法展示出強(qiáng)大生命力。由于該方法具有敏感,簡便,快速、低耗,重復(fù)性好等獨(dú)特優(yōu)點(diǎn),并可直接觀察單個(gè)細(xì)胞內(nèi)的DNA損害,因而迅速成為近年最流行的DNA損害檢測方法而應(yīng)用于遺傳毒理學(xué)、輻射生物學(xué)、腫瘤學(xué)、老年學(xué)、病理學(xué)、環(huán)境生態(tài)學(xué)以及環(huán)境與職業(yè)人群的生物監(jiān)測。迄今全世界共約300余篇論文發(fā)表,內(nèi)容涉及各種物理(UV、X射線、γ輻射等),化學(xué)因素(環(huán)境污染物、致癌物、化學(xué)藥物、職業(yè)中毒等)和生物學(xué)因素共50種;所研究的細(xì)胞類型30余種。國內(nèi)從1995年開始有文獻(xiàn)報(bào)告,迄今已發(fā)表近40余篇文獻(xiàn)。筆者所在實(shí)驗(yàn)室近3年來陸續(xù)利用單細(xì)胞電泳技術(shù)觀察了鎳、鉻、鎘、石棉、三氯乙烯、苯、甲基叔丁醚、甲醛、H2O2對人外周血淋巴細(xì)胞和人胚肺成纖維細(xì)胞DNA損害,并對石棉、三氯乙烯和苯作業(yè)工人進(jìn)行監(jiān)測。最近,又在此基礎(chǔ)上建立了檢測DNA交聯(lián)和DNA蛋白交聯(lián)的方法,該方法的原理是基于DNA與DNA分子或DNA與蛋白質(zhì)分子的交互聯(lián)結(jié),在電泳過程中必將阻止DNA的泳動(dòng)。通過使用標(biāo)準(zhǔn)化的隨機(jī)分布的DNA斷裂劑如甲基甲磺酸(MMS)、X-射線或γ-射線處理的細(xì)胞使之產(chǎn)生特異的DNA鏈斷裂,則可產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)化的特定長度的彗星影像,在交聯(lián)劑存在時(shí),由這些標(biāo)準(zhǔn)斷裂劑形成的彗星長度將大大縮短。為了進(jìn)一步確定DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)的形成,還可以加入高濃度的蛋白酶K到凝膠上以去除與DNA交聯(lián)著的蛋白質(zhì)。通過與不加蛋白酶K的凝膠比較,從而確定這種交聯(lián)對DNA遷移率的影響。我們實(shí)驗(yàn)室最近已利用改良的單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)觀察了甲醛、鎘、鎳和順鉑引起的人外周血淋巴細(xì)胞DNA交聯(lián)和DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián),并與堿洗脫方法進(jìn)行比較,證實(shí)了這種方法是檢測交聯(lián)劑對DNA損害作用的有效方法,并進(jìn)一步開展了整體動(dòng)物和人群的研究,使單細(xì)胞凝膠電泳成為可檢測多類型DNA損害的有效方法。同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)勞動(dòng)衛(wèi)生教研室和環(huán)境衛(wèi)生教研室分別開展了高溫、CO和粉塵聯(lián)合作用和硒、苯引起DNA損傷的檢測;北京醫(yī)科大學(xué)勞動(dòng)衛(wèi)生教研室觀察了吸煙與溫石棉聯(lián)合作用對人胚肺細(xì)胞和人造礦物纖維對A549細(xì)胞DNA的斷裂效應(yīng)。華西醫(yī)科大學(xué)衡正昌、張遵真等開展了二氯胺基酚對V79細(xì)胞DNA損傷效應(yīng)的研究。山西大學(xué)、西安醫(yī)科大學(xué)和上海醫(yī)科大學(xué)等單位也陸續(xù)在毒理學(xué)領(lǐng)域引進(jìn)單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)。3擊穿質(zhì)粒的誘變作用穿梭質(zhì)粒是一類既可在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中復(fù)制,又可在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)增殖的特殊的復(fù)合型質(zhì)粒,由病毒基因組的部分序列(啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、復(fù)制與轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)等),質(zhì)粒的部分序列(復(fù)制起始點(diǎn)及抗性基因等)、靶基因和選擇基因構(gòu)建而成。近幾年來,以SV40病毒為基礎(chǔ),以大腸桿菌tRNA琥珀突變抑制基因SupF為突變靶基因的短暫復(fù)制型穿梭質(zhì)粒已廣泛應(yīng)用各種誘變劑在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的突變研究,其中最有代表性的是美國學(xué)者Seidman構(gòu)建的PZ189質(zhì)粒。將誘變劑處理的穿梭質(zhì)粒轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞,或先轉(zhuǎn)染后再用誘變劑處理,經(jīng)復(fù)制形成突變后,從細(xì)胞提取質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化宿主菌,在X-Gal和IPTG瓊脂平板上篩選突變子,正常菌落為藍(lán)色,若靶基因SupF由于誘變制作用而失活,則呈白色,并可進(jìn)一步對靶基因直接測序以了解突變的位點(diǎn)、類型、序列特異性等信息。最近作者又進(jìn)一步對該質(zhì)粒進(jìn)行了改進(jìn),在靶基因下游緊鄰處加一個(gè)8bp的標(biāo)識序列(SignatureSequence),構(gòu)建了PSP189質(zhì)粒。誘變劑處理后,同時(shí)測定靶基因和標(biāo)識序列,根據(jù)標(biāo)識序列的改變情況可判斷并區(qū)分獨(dú)立突變或同胞突變,能更精確地在DNA分子水平上評價(jià)突變的性質(zhì)和熱點(diǎn)。由于穿梭質(zhì)粒能夠在細(xì)胞與哺乳動(dòng)物細(xì)胞中間“穿梭”,靶基因的突變又是在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)發(fā)生,因而能夠較真實(shí)反映高等哺乳動(dòng)物的突變機(jī)理。同時(shí)SupF靶基因的突變很容易在細(xì)菌中通過顯色反應(yīng)篩選突變子并進(jìn)行序列分析,使表型改變在DNA分子水平上得到證明,且其任何一位置發(fā)生單堿基置換都能從表型改變檢測出來,敏感性極高。利用穿梭質(zhì)粒研究基因突變始于80年代,迄今全世界已有數(shù)百篇文獻(xiàn)報(bào)告,包括了放射線、重金屬、環(huán)境誘變劑和致癌物引起的基因突變。我國最近開始引進(jìn)了PZ189和PS189兩種質(zhì)粒,如浙江醫(yī)學(xué)大學(xué)馮朝輝、張小山等利用PZ189質(zhì)粒觀察了烷化劑N-甲基-N-硝基-亞硝基胍(MNNG)引起的細(xì)胞定標(biāo)性和非定標(biāo)性突變;華西醫(yī)科大學(xué)范奇元等研究了乙基甲磺酸對PZ189穿梭質(zhì)粒的誘變作用;衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所談幸之等利用PSP189研究了黃曲霉毒素致突變機(jī)理;北京市勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病研究所崔明珍等觀察了稀土化合物對MNNG致穿梭質(zhì)粒PSP189突變的影響,我們最近也觀察了在核蛋白對鎳致PZ189質(zhì)粒突變的影響,表明核蛋白對鎳引起的突變有促進(jìn)作用。4突變檢測動(dòng)物轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是當(dāng)今生物高科技中的一個(gè)研究熱點(diǎn),隨著重組DNA技術(shù)的迅速發(fā)展,轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)的研究與應(yīng)用都得到許多開創(chuàng)性的進(jìn)展。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是指通過基因重組和導(dǎo)入等各種手段,使體內(nèi)基因組中整合有外源性基因的動(dòng)物,這些外源基因可以是標(biāo)志基因(如neo基因、TK基因),也可以是某些疾病相關(guān)的基因或代表毒性終點(diǎn)的基因。在毒理學(xué)領(lǐng)域,轉(zhuǎn)基因動(dòng)物主要用于化學(xué)毒物致突變和出生缺陷的機(jī)理的研究,其主要特點(diǎn)是:可從整體水平比較不同器官突變的組織特異性,從而確定敏感的靶器官,并在同一動(dòng)物進(jìn)行多種突變終點(diǎn)的比較研究;易于從動(dòng)物基因組中回收導(dǎo)入的基因以進(jìn)行突變的精細(xì)研究(如測序、測定突變譜、研究突變熱點(diǎn)等);敏感性高,可在低劑量下檢測,特別適宜于觀察慢性低水平接觸時(shí)的DNA損傷。近年來,國外已陸續(xù)發(fā)展了多種用于突變檢測的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物,其中三種已投入商品化生產(chǎn),MutaTM小鼠;BigBlueTM大鼠和Xenomouse小鼠,它們分別采用大腸桿菌乳糖操縱子的lacZ和/或lacI作為誘變的靶基因。國外已開展對丙烯酰胺、1.3-丁二烯、環(huán)磷酰胺、乙基亞硝基脲等數(shù)十種遺傳毒物基因突變的分析,表明該試驗(yàn)重現(xiàn)性好,與內(nèi)源性基因一致。1995年第七屆國際毒理學(xué)術(shù)會(huì)議提出:轉(zhuǎn)基因小鼠的致突變試驗(yàn)有可能取代兩年的長期動(dòng)物致癌試驗(yàn)。我國轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究起步較晚,最近,第二軍醫(yī)大學(xué)黃建等建立了以穿梭質(zhì)粒pEsnx為目的質(zhì)粒,攜帶xylE基因?yàn)檎T變靶基因的轉(zhuǎn)基因小鼠,并證明了目的質(zhì)粒已完整整合于小鼠染色體上,可穩(wěn)定遺傳給后代。隨后,又進(jìn)行了體內(nèi)基因突變的檢測。作者用致突變劑n-甲基-n′-硝基-n-亞硝基胍(MNNG)對轉(zhuǎn)基因小鼠(ip10mg/kg)連續(xù)染毒4天發(fā)現(xiàn),MNNG使外周血NCE的微核率從(2.20±1.48)‰上升為(6.80±2.28)‰,xylE基因突變率從小于1/22843增至3/18641,序列分析顯示這種突變主要是單個(gè)堿基缺失,其中以A/C缺失最多見。表明xylE轉(zhuǎn)基因小鼠是檢測體內(nèi)基因突變的有效模型。我國旅美學(xué)者劉杰和康裕建等分別利用金屬硫蛋白轉(zhuǎn)基因和基因刪除動(dòng)物研究鎘毒性和阿霉素的心臟毒性,均獲得滿意的結(jié)果。轉(zhuǎn)基因細(xì)胞可以看成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的縮影,美國紐約大學(xué)Klein通過遺傳工程方法,將大腸桿菌(E.Coli)的黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因(gpt)插入到V79細(xì)胞染色體而建立了G12轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,該細(xì)胞株已經(jīng)由林慰慈教授引進(jìn)我國,并陸續(xù)開展了一些工作,用于觀察細(xì)胞基因突變,姐妹染色單體交換和微核。北京醫(yī)科大學(xué)賈光等用G12細(xì)胞研究六價(jià)鉻對gpt位點(diǎn)的影響,結(jié)果表明在細(xì)胞中毒不明顯的情況下,即可誘發(fā)gpt位點(diǎn)的突變。上海勞研所顧祖維用這種細(xì)胞對柴油機(jī)廢氣顆粒進(jìn)行多種遺傳毒性的終點(diǎn)檢測,認(rèn)為其敏感性高。浙江醫(yī)科大學(xué)病理生理教研室近年來陸續(xù)建立了穩(wěn)定表達(dá)CytP450的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株CHL-1A1,2B6和好3A4,對前誘變物/致癌物具有代謝活化能力,因此在體外試驗(yàn)中可免加外源性代謝活化系統(tǒng),具有重要應(yīng)用價(jià)值。第二軍醫(yī)大學(xué)徐唯等觀察了亞硝基胍對含xylE基因的pESnx/FL穿梭質(zhì)?？寺〖?xì)胞的致突變作用。5長時(shí)空間期染色體畸變檢測熒光原位雜交(Fluorescenceinsituhybridization,FISH)是80年代在原位雜交基礎(chǔ)上建立起來的一種分子雜交技術(shù)。是一種高度靈敏和特異性以及分辨率強(qiáng)的染色體和基因分析技術(shù),它通過熒光標(biāo)記的各類DNA和RNA探針與細(xì)胞或組織在玻片上進(jìn)行雜交,在不改變其結(jié)構(gòu)和分布格局的情況下,進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA某特定序列的相互位置關(guān)系的拷貝數(shù)的測定,用于染色體識別,基因定位和基因診斷、染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目畸變分析。FISH方法的優(yōu)點(diǎn)在于:①熒光試劑和探針標(biāo)記經(jīng)濟(jì),相對安全,同時(shí)在特異性、速度、探針的穩(wěn)定性方面優(yōu)于放射性探針雜交;②可分析中期和間期核,靈敏度高,目前,可用FISH定位的DNA序列從1kd發(fā)展到整條染色體范圍;③所用的探針,對基因組不同部分可用不同顏色標(biāo)記,特別是90年代發(fā)展起來的多色FISH技術(shù),可在同一細(xì)胞核或中期染色體中顯示出不同的顏色,從而可同時(shí)檢測兩種以上DNA的三維結(jié)構(gòu),制備出染色體的光譜核型,使全染色體的自動(dòng)化分析真正得以實(shí)現(xiàn)。FISH主要用于以下幾個(gè)方面:①通過全染色體圖譜測定中期相染色體畸變;②用亞染色體區(qū)帶探針進(jìn)行間期染色體斷裂和非整倍體分析;③用著絲點(diǎn)探針或抗著絲點(diǎn)抗體進(jìn)行微核試驗(yàn);④非整倍體和異常數(shù)量的特定染色體分析。中山醫(yī)科大學(xué)鄭履康等用生物素標(biāo)記的α-衛(wèi)星X染色體特異的DNA探針對接觸CS2工人的精子DNA進(jìn)行FISH分析,發(fā)現(xiàn)接觸工人X染色體雙體率明顯高于正常人,隨后,劉勝勤等又利用生物素標(biāo)記的X染色體特異性DNA探針DXZ1和地高辛標(biāo)記的Y染色體特異的DNA探針DYZ3進(jìn)行雙色FISH,以檢測苯接觸工人精子染色體的畸變率,發(fā)現(xiàn)接觸組XX率明顯高于對照組。第三軍醫(yī)大學(xué)曹佳等和胡斌等用小鼠著絲粒衛(wèi)星DNA探針FISH和抗著絲?？贵w間接免疫熒光染色技術(shù)(又稱CREST染色),研究了丙烯酰胺,昆明山海棠,甲基丙烯酸,環(huán)氧丙酯和氫醌等幾種物質(zhì)誘導(dǎo)小鼠NIH3T3成纖維細(xì)胞微核和著絲粒組成比例,以對微核來源進(jìn)行判斷,證明了這兩種方法均可用于微核的染色體組成的鑒定。華西醫(yī)科大學(xué)張立富等使用小鼠11號染色體和3號染色體特異性DNA探針,分析了自發(fā)和化學(xué)物誘導(dǎo)的三氟胸苷抗性L5178Y突變細(xì)胞集落。結(jié)果表明,突變集落有明顯的11號染色體異常,主要涉及遠(yuǎn)端胸苷激酶(TK)基因定位區(qū)域。上海醫(yī)科大學(xué)邵建華等用兩種不同染色體特異性DNA探針研究苯代謝產(chǎn)物氫醌、苯三酚及二者聯(lián)合作用誘發(fā)人淋巴細(xì)胞多倍體形成。6流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的增殖和分子反應(yīng)流式細(xì)胞計(jì)技術(shù)(flowcytometry)是對單個(gè)細(xì)胞或其他生物