石榴鞣花酸-羥丙基-環(huán)糊精包合物的制備及表征

石榴鞣花酸-羥丙基--環(huán)糊精包合物的制備及表征

石榴提取物是一種天然存在的多酚類化合物，具有抗炎、腫脹、抗炎、抗菌、皮膚白皙等功效。包合技術是利用包合材料主分子較大空穴將客分子難溶性藥物包嵌,從而形成分子膠囊包合物的技術,可提高難溶性藥物的溶解度和穩(wěn)定性1材料表面1.1通明經(jīng)典石榴鞣花酸(自制,批號20151230,含有量≥90%)。石榴購自安徽省蚌埠市藥材公司,經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學藥學院彭華勝教授鑒定為正品。石榴鞣花酸對照品(批號2075083,含有量≥95%,美國Sigma公司);羥丙基-β-環(huán)糊精對照品(上海伯奧生物科技有限公司)。甲醇、乙腈為色譜純;其他試劑均為分析純。1.2純水一體化系統(tǒng)Thermo-U3000UHPLC色譜儀(配置TCC-3000RS紫外檢測器、DAD-3000二極管陣列檢測器)、Nicolet6700傅里葉變換紅外光譜儀(賽默飛世爾科技公司);明澈-D24UV純水/超純水一體化系統(tǒng)[默克化工技術(上海)有限公司];SU8020場發(fā)射掃描電子顯微鏡(日本日立公司);X'PertPROMPD射線衍射儀(荷蘭帕納科公司);KQ2200E超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);V-1700紫外可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司);RE-52AA旋轉蒸發(fā)儀(上海楚柏實驗室設備有限公司);HH-2電熱恒溫水浴鍋(浙江力辰儀器科技有限公司);SHB-III循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科教儀器有限公司);FD-1冷凍干燥機(北京得天佑科技發(fā)展有限公司);ZYW-100H恒溫培養(yǎng)振蕩器(上海智誠分析儀器制造有限公司);FA1004電子天平(天津天馬衡基儀器有限公司)。2方法2.1對照溶液的制備2.2超聲過濾法取石榴鞣花酸-羥丙基-β-環(huán)糊精適量,置于10mL量瓶中,甲醇超聲30min后定容,搖勻,0.45μm微孔濾膜過濾,即得。2.3儀器性能及穩(wěn)定性試驗精密吸取對照品溶液適量,稀釋成0.1512、0.756、1.512、3.024、6.048、12.09、24.18μg/mL,在文獻[8]色譜條件下進樣測定,以峰面積為橫坐標(X)、溶液質量濃度為縱坐標(Y)進行線性回歸,得回歸方程為Y=0.7513X+0.2878(r=0.9997),線性范圍0.1512~24.18μg/mL。精密度試驗測得石榴鞣花酸峰面積RSD為0.32%,表明儀器精密度良好。穩(wěn)定性試驗測得在0~24h內石榴鞣花酸-羥丙基-β-環(huán)糊精峰面積RSD為0.41%,表明溶液在24h內穩(wěn)定性良好。重復性試驗測得石榴鞣花酸峰面積RSD為1.01%,表明該方法重復性良好。加樣回收率試驗測得,石榴鞣花酸-羥丙基-β-環(huán)糊精平均加樣回收率為99.51%,RSD為1.28%。色譜圖見圖1。2.4包組分制備2.4.1研成糊狀物取適量羥丙基-β-環(huán)糊精置于乳缽中,加少量水溶解,研成糊狀物。另取適量石榴鞣花酸用乙醇溶解,加入上述糊狀物中,充分研磨1h后減壓抽濾,濾餅在60℃烘箱中干燥至恒重,即得。2.4.2花酸溶液的制備取適量羥丙基-β-環(huán)糊精溶于水中,300W、40kHz條件下超聲。同時,精密稱取石榴鞣花酸適量,用少量乙醇溶解后逐滴緩慢加入上述溶液中,室溫下繼續(xù)超聲30min,將反應母液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾,續(xù)濾液濃縮至約10mL,冷凍干燥,即得。2.4.3超聲法制備法精密稱取石榴鞣花酸適量,少量乙醇溶解,攪拌下緩慢滴入羥丙基-β-環(huán)糊精水溶液中,300W、40kHz條件下超聲20min后,室溫振蕩攪拌(149r/min)18h,0.45μm微孔濾膜過濾,濃縮至10mL左右,濃縮液真空干燥,即得。2.4.4石榴鞣花酸包合率的測定精密稱取石榴鞣花酸、羥丙基-β-環(huán)糊精各3份,兩者比例1∶2,取研磨法、超聲法、攪拌-超聲法制備的石榴鞣花酸-羥丙基-β-環(huán)糊精適量,置于10mL量瓶中,甲醇超聲20min后稀釋至刻度,搖勻,在文獻[8]色譜條件下進樣測定,外標法計算石榴鞣花酸含有量,計算包合率,公式為包合率=(包合物中石榴鞣花酸含有量/石榴鞣花酸加入量)×100%。結果,上述3種方法所得包合物中石榴鞣花酸包合率分別為(55.14±0.85)%、(40.08±1.22)%、(83.64±0.21)%,即攪拌-超聲法包合率最高,故選擇該方法制備包合物。2.5正交試驗2.6統(tǒng)計分析3結果3.1正交試驗結果見表1,方差分析見表2。由表1可知,各因素影響程度依次為A>B>C>D,最優(yōu)工藝為A3.2包組分驗證3.2.1加樣研磨nd-mbr法取石榴鞣花酸、羥丙基-β-環(huán)糊精、物理混合物、包合物干粉各1.0mg,置于研缽中,加入適量KBr研磨均勻,壓片后掃描,掃描范圍為4000~500cm3.2.2x-輻射衍射3.2.3羥丙基--環(huán)糊精的物理混合物采用支持膜分散粉末法,加速電壓5.0kV,結果見圖4。由圖可知,石榴鞣花酸形態(tài)呈不規(guī)則的絮狀球形晶體微粒;羥丙基-β-環(huán)糊精呈帶孔洞的球狀;物理混合物呈石榴鞣花酸簡單填充于羥丙基-β-環(huán)糊精空洞的實心球狀,也有少部分黏附于后者表面上的晶形微粒;包合物已無石榴鞣花酸與羥丙基-β-環(huán)糊精的典型結構,表明包合物已形成。3.3表觀溶解度測定取過量石榴鞣花酸及包合物,置于10mL量瓶中,加水至刻度,室溫下充分振搖溶解,離心后取上清液,經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾,續(xù)濾液加水稀釋適當倍數(shù)后于254nm波長處測定吸光度,計算表觀溶解度。結果,石榴鞣花酸在水中的表觀溶解度為(0.015±0.04)mg/mL,而包合物為(0.149±0.03)mg/mL。4石榴鞣花酸包合物的篩選本實驗通過攪拌-超聲法制備石榴鞣花酸-羥丙基-β-環(huán)糊精包合物,其中超聲波頻率、時間、溫度對包合物形成有較大影響。超聲過程中會產(chǎn)生空化效應研究表明,利用磷脂復合體技術將鞣花酸制成鞣花酸-磷脂復合體納米乳時,可有效提高其溶解度和滲透性,但在水中溶解度的增加量僅2倍左右精密稱取石榴鞣花酸對照品15.12mg,甲醇溶解并定容至10mL,即得(0.1512mg/mL)。根據(jù)文獻[8-12]及預試驗考察,發(fā)現(xiàn)石榴鞣花酸與羥丙基-β-環(huán)糊精比例(A