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文檔簡介

Novoprotein專業(yè)實踐報告報告人：學號：2014.1.18

熟悉、了解、掌握質(zhì)粒EGFP和LGALS1分別作為模板，設計引物擴增EGFP基因和LGALS1基因，通過Novorec的方法將兩個片段同時重組到pET21a載體上的相關理論知識。綠色熒光蛋白-人LGALS1融合蛋白大腸桿菌的表達載體的構建及純化理論學習抽提質(zhì)粒作為模板，擴增EGFP基因和LGALS1基因，重組到pET21a載體上，表達篩選，蛋白檢測，蛋白純化。實驗操作A接菌抽提、PCR反應、電泳檢測

BC重組、轉化、陽性鑒定D酶切過夜、電泳檢測、產(chǎn)物回收

質(zhì)粒抽提、電泳檢測

SDS電泳檢測EWesternBlot免疫印跡

FG帶His標簽的人重組蛋白的純化

一、接菌抽提、PCR反應、電泳檢測

Kit抽提↓

PCR反應

↓電泳上樣檢測

質(zhì)粒抽提檢測PCR反應檢測

二、

酶切過夜、電泳檢測、產(chǎn)物回收PCR反應產(chǎn)物酶切↓37℃恒溫水浴鍋過夜↓配膠↓電泳檢測↓割膠回收酶切產(chǎn)物電泳檢測三、

重組、轉化、陽性鑒定目的基因、載體重組↓轉化↓挑菌、37℃培養(yǎng)↓PCR陽性鑒定↓電泳檢測四、質(zhì)粒抽提、電泳檢測堿法抽提質(zhì)?！娪緳z測

五、SDS電泳檢測LaneA:誘前LaneB

:G-2-1LaneC:G-2-2LaneD:MarkerLaneE:G-2-3LaneF:G-2-4LaneG:G-4-1LaneH:G-4-2LaneI:G-4-3LaneJ:G-4-4AB

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