2023年研究生類(lèi)研究生入學(xué)考試專(zhuān)業(yè)課現(xiàn)代分子生物學(xué)歷年高頻考題帶答案難題附詳解

2023年研究生類(lèi)研究生入學(xué)考試專(zhuān)業(yè)課現(xiàn)代分子生物學(xué)歷年高頻考題帶答案難題附詳解（圖片大小可自由調(diào)整）第1卷一.歷年考點(diǎn)試題黑鉆版(共25題)1.tRNA是如何轉(zhuǎn)運(yùn)活化的氨基酸至mRNA模板上的?2.乳糖操縱子的安慰誘導(dǎo)物是______。A.乳糖B.半乳糖C.異構(gòu)乳糖D.異丙基巰基半乳糖苷3.什么是FISH技術(shù)?如何利用它來(lái)構(gòu)建基因組的物理圖譜?4.簡(jiǎn)述人類(lèi)基因組計(jì)劃的科學(xué)意義。5.說(shuō)出經(jīng)典遺傳學(xué)(forwardgenetics)與現(xiàn)代遺傳學(xué)(reversegenetics)的異同。6.試述基因克隆載體進(jìn)化過(guò)程。7.什么是應(yīng)急調(diào)控(strigent：response)?何時(shí)會(huì)有這種現(xiàn)象發(fā)生?應(yīng)急調(diào)控過(guò)程中的兩個(gè)重要信號(hào)分子是什么?應(yīng)急調(diào)控會(huì)調(diào)控哪些生化過(guò)程，上調(diào)還是下調(diào)?8.哪些種類(lèi)抗生素只能特異性地作用于原核生物核糖體?哪些只作用于真核生物核糖體?哪些既能抑制原核生物核糖體，也能抑制真核生物核糖體?9.什么是完全基因敲除和條件基因敲除?10.舉例說(shuō)明蛋白質(zhì)磷酸化如何影響基因表達(dá)。11.假設(shè)某哺乳動(dòng)物基因可能編碼了脂肪酸脫氫酶，請(qǐng)?jiān)诮湍讣?xì)胞中設(shè)計(jì)試驗(yàn)研究該基因的功能。12.有幾種終止密碼子?它們的序列和別名是什么?13.什么是增強(qiáng)子?有哪些特點(diǎn)?試述它的作用機(jī)制。14.什么是信號(hào)肽?它在序列組成上有哪些特點(diǎn)?有什么功能?15.生物體存在大量的mRNA前體的選擇性剪接過(guò)程。什么是選擇性剪接，有幾種方式?16.什么是完全基因敲除和條件基因敲除?17.什么是蛋白質(zhì)免疫印跡?闡述其作用原理及操作步驟。18.什么是蛋白質(zhì)免疫印跡?闡述其作用原理及操作步驟。19.早期主要由哪些實(shí)驗(yàn)證實(shí)DNA是遺傳物質(zhì)?寫(xiě)出這些實(shí)驗(yàn)的主要步驟。20.原核生物DNA聚合酶Ⅰ不同于聚合酶Ⅲ的酶活性是什么?21.真核生物mRNA的轉(zhuǎn)錄后加工主要包括______、______、______等方面。22.說(shuō)說(shuō)基因圖位克隆法的原理和過(guò)程。23.測(cè)定蛋白質(zhì)在DNA上的結(jié)合部位的常見(jiàn)方法是______。A.Western印跡B.PCRC.限制性圖譜分析D.DNaseⅠ保護(hù)足印分析24.Alternativesplicing25.細(xì)菌細(xì)胞用一種RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄所有的RNA，而真核細(xì)胞則有三種不同的RNA聚合酶。第1卷參考答案一.歷年考點(diǎn)試題黑鉆版1.參考答案：tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)活化的氨基酸至mRNA模板上的過(guò)程包括：

(1)氨酰-tRNA合成酶識(shí)別tRNA的氨基酸臂上特定的密碼子，將相應(yīng)的氨基酸活化，形成氨酰-tRNA。反應(yīng)式為：AA+tRNA+ATP→AA-tRNA+AMP+PPi。

(2)氨酰-tRNA結(jié)合GTP的起始因子IF-2·GTP(或延伸因子EF-Tu·GTP)形成三元復(fù)合物。

(3)氨酰-tRNA上的反密碼子通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則識(shí)別mRNA上相應(yīng)的密碼子，與起始復(fù)合物的P(A)位點(diǎn)結(jié)合(只有第一個(gè)活化的氨基酸進(jìn)入P位點(diǎn)，肽鏈延伸過(guò)程中，氨酰-tRNA都進(jìn)入A位點(diǎn))，從而將活化的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)至mRNA模板上。2.參考答案：D[解析]安慰誘導(dǎo)物是指一類(lèi)高效誘導(dǎo)酶的合成，但又不被分解的分子。異丙基巰基半乳糖苷(IPTG)、巰基半乳糖苷(TMG)和O-硝基半乳糖苷(ONPG)都不是半乳糖苷酶的底物，不會(huì)被β-半乳糖苷酶所降解，但能誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶的合成，因此實(shí)驗(yàn)室里常用它們作為乳糖操縱子的安慰誘導(dǎo)物。3.參考答案：FISH技術(shù)即熒光原位雜交技術(shù)(fluorescenceinsituhybridization)是一種非放射性原位雜交方法，用特殊的熒光素標(biāo)記DNA探針，在染色體、細(xì)胞或組織切片標(biāo)本上進(jìn)行DNA雜交，以檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA特定序列存在與否。

FISH技術(shù)和RFLE結(jié)合，可以精確地描述染色體長(zhǎng)，短臂等結(jié)構(gòu)改變和染色體核型或復(fù)雜片段的性質(zhì)。在基因圖譜繪制中，F(xiàn)ISH和linkagemapping結(jié)合起來(lái)即使對(duì)具有高度多形態(tài)的基因位點(diǎn)也能較精確地確定下來(lái)。4.參考答案：社會(huì)意義：(1)極大地促進(jìn)生命科學(xué)領(lǐng)域一系列基礎(chǔ)研究的發(fā)展，闡明基因的結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系、生命的起源和進(jìn)化、細(xì)胞發(fā)育、生產(chǎn)、分化的分子機(jī)理，疾病發(fā)生的機(jī)理等，為人類(lèi)自身疾病的診斷和治療提供依據(jù)，為醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)帶來(lái)翻天覆地的變化；(2)促進(jìn)生命科學(xué)與信息科學(xué)、材料科學(xué)和與高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)相結(jié)合，刺激相關(guān)學(xué)科與技術(shù)領(lǐng)域的發(fā)展，帶動(dòng)起一批新興的高技術(shù)產(chǎn)業(yè)；(3)基因組研究中發(fā)展起來(lái)的技術(shù)、數(shù)據(jù)庫(kù)及生物學(xué)資源，還將推動(dòng)對(duì)農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)(轉(zhuǎn)基因動(dòng)、植物)、能源、環(huán)境等相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，改變?nèi)祟?lèi)社會(huì)生產(chǎn)、生活和環(huán)境的面貌，把人類(lèi)帶入更佳的生存狀態(tài)。

科學(xué)意義：(1)確定人類(lèi)基因組中約5萬(wàn)個(gè)編碼基因的序列基因在基因組中的物理位置，研究基因的產(chǎn)物及其功能；(2)了解轉(zhuǎn)錄和剪接調(diào)控元件的結(jié)構(gòu)和位置，從整個(gè)基因組結(jié)構(gòu)的宏觀(guān)水平上了解基因轉(zhuǎn)錄與轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)；(3)從總體上了解染色體結(jié)構(gòu)，了解各種不同序列在形成染色體結(jié)構(gòu)、DNA復(fù)制、基因轉(zhuǎn)錄及表達(dá)調(diào)控中的影響與作用；(4)研究空間結(jié)構(gòu)對(duì)基因調(diào)節(jié)的作用；(5)發(fā)現(xiàn)與DNA復(fù)制、重組等有關(guān)的序列；(6)研究DNA突變、重排和染色體斷裂等，了解疾病的分子機(jī)制，為疾病的診斷、預(yù)防和治療提供理論依據(jù)；(7)確定人類(lèi)基因組中轉(zhuǎn)座子，逆轉(zhuǎn)座子和病毒殘余序列，研究其周?chē)蛄械男再|(zhì)；(8)研究染色體和個(gè)體之間的多態(tài)性。5.參考答案：兩者都是探討基因結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。經(jīng)典遺傳學(xué)是從一個(gè)突變體的表型出發(fā)，研究其基因型，進(jìn)而找出該基因的編碼序列；而現(xiàn)代遺傳學(xué)首先從基因序列出發(fā)，推測(cè)其表型，進(jìn)而推導(dǎo)出該基因的功能。6.參考答案：克隆載體的進(jìn)化過(guò)程劃分為三個(gè)階段：

(1)第一階段包括天然質(zhì)粒和重組質(zhì)粒的應(yīng)用?？寺≥d體是以質(zhì)粒、λ噬菌體、柯斯質(zhì)粒(又稱(chēng)粘粒)為主，包括pSC101(第一代分子克隆載體)、ColE1質(zhì)粒載體、pBR322質(zhì)粒載體等，主要特點(diǎn)是載體在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定遺傳、易分離、轉(zhuǎn)化效率高，但是克隆容量有限，一般小于45kb。

(2)第二階段的克隆載體主要包括酵母人工染色體(YAC)、細(xì)菌人工染色體(BAC)、噬菌體P1克隆系統(tǒng)、由P1發(fā)展的PAC載體。通過(guò)降低載體的長(zhǎng)度使載體的容量增大(可達(dá)100～350kb)，并建立多克隆位點(diǎn)和新的遺傳標(biāo)記基因。

(3)第三階段的克隆載體以雙元細(xì)菌人工染色體(BIBAC)和可轉(zhuǎn)化人工染色體(TAC)為主，這些載體不僅具有較大的克隆容量，而且具備了直接轉(zhuǎn)化植物進(jìn)行功能互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)的功能，推動(dòng)了結(jié)構(gòu)基因組學(xué)和功能基因組學(xué)研究。7.參考答案：(1)應(yīng)急調(diào)控是指細(xì)菌碰到緊急狀況，如氨基酸饑餓時(shí)，為了緊縮開(kāi)支，渡過(guò)難關(guān)，細(xì)菌將會(huì)停止包括生產(chǎn)各種RNA、糖、脂肪和蛋白質(zhì)在內(nèi)的幾乎全部生物化學(xué)反應(yīng)過(guò)程的自救措施。應(yīng)急調(diào)控是細(xì)菌抵御不良條件，保存自己的一種機(jī)制。

(2)當(dāng)細(xì)菌處于貧瘠的生長(zhǎng)環(huán)境如氨基酸饑餓時(shí)會(huì)產(chǎn)生應(yīng)急調(diào)控。

(3)應(yīng)急調(diào)控過(guò)程中有兩種重要的信號(hào)分子：鳥(niǎo)苷四磷酸(ppGpp)和鳥(niǎo)苷五磷酸(pppG-pp)。ppGpp和pppGpp能與其目標(biāo)蛋白結(jié)合，改變其活性，進(jìn)而抑制轉(zhuǎn)錄。

(4)當(dāng)氨基酸饑餓時(shí)，細(xì)胞中便存在大量的不帶氨基酸的tRNA，這種空載的tRNA會(huì)激活焦磷酸轉(zhuǎn)移酶，使ppGpp大量合成。ppGpp會(huì)關(guān)閉許多基因，同時(shí)打開(kāi)一些合成氨基酸的基因。應(yīng)急調(diào)控會(huì)使rRNA和tRNA的合成下降，同時(shí)蛋白質(zhì)的降解加速，糖、脂類(lèi)及核苷酸的合成下降，即下調(diào)生化反應(yīng)。8.參考答案：抗生素對(duì)蛋白質(zhì)合成的抑制作用可能是阻止mRNA與核糖體的結(jié)合，或阻止AA-tRNA與核糖體結(jié)合，或干擾AA-tRNA與核糖體結(jié)合而產(chǎn)生錯(cuò)讀等。但不同的抗生素作用的對(duì)象并不完全相同：卡那霉素、青霉素、四環(huán)素和紅霉素只與原核細(xì)胞核糖體發(fā)生作用，從而阻遏原核生物蛋白質(zhì)的合成，抑制細(xì)菌生長(zhǎng)；放線(xiàn)菌酮?jiǎng)t只作用于真核生物核糖體；而氯霉素、鏈霉素、蓖麻霉素和嘌呤霉素既能與原核細(xì)胞核糖體結(jié)合，又能與真核生物核糖體結(jié)合，妨礙細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成，影響細(xì)胞生長(zhǎng)。9.參考答案：(1)完全基因敲除

完全基因敲除是指通過(guò)同源重組法完全消除細(xì)胞或者動(dòng)物個(gè)體中的靶基因活性的基因敲除。一般采用取代型或插入型載體在ES細(xì)胞中根據(jù)正一負(fù)篩選原理進(jìn)行完全基因敲除實(shí)驗(yàn)。完全基因敲除常導(dǎo)致胚胎死亡，許多有重要生理功能的基因的功能研究因此無(wú)法開(kāi)展。

(2)條件基因敲除

條件基因敲除是指通過(guò)定位重組系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)特定時(shí)間和空間的基因敲除。條件基因敲除主要是通過(guò)Cre/LoxP和FLP/FRT系統(tǒng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。應(yīng)用Cre/LoxP和FLP/FRT系統(tǒng)，可以使靶基因的表達(dá)或缺失發(fā)生在動(dòng)物發(fā)育的某一階段或某一特定的組織器官。10.參考答案：蛋白質(zhì)的磷酸化就是在蛋白質(zhì)激酶的催化下，把ATP或GTP上γ位的磷酸基轉(zhuǎn)移到蛋白質(zhì)氨基酸殘基上的過(guò)程，其逆過(guò)程則為去磷酸化。蛋白質(zhì)的磷酸化與去磷酸化過(guò)程是生物體內(nèi)普遍存在的信息傳導(dǎo)調(diào)節(jié)方式，幾乎涉及所有的生理及病理過(guò)程，如糖原代謝時(shí)，激素與其受體在肌肉細(xì)胞外表面相結(jié)合，誘發(fā)細(xì)胞質(zhì)。AMP的合成并活化A激酶，后者再將活化磷酸基團(tuán)傳遞給無(wú)活性的磷酸化酶激酶，活化糖原磷酸化酶，最終將糖原磷酸化，進(jìn)入糖酵解過(guò)程并提供ATP。11.參考答案：(1)試驗(yàn)設(shè)計(jì)如下：

①PCR擴(kuò)增該哺乳動(dòng)物可能編碼脂肪酸脫氫酶的基因，獲得克隆的全長(zhǎng)基因；

②將克隆完成的目的基因片段插入到酵母表達(dá)載體上；

③把構(gòu)建好的攜帶目的基因的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到酵母脂肪酸脫氫酶突變體中，觀(guān)察酵母細(xì)胞中的變化；

④對(duì)照組為未經(jīng)過(guò)處理的酵母脂肪酸脫氫酶突變體。

(2)結(jié)果分析：

①對(duì)照組：脂肪酸脫氫酶突變體中，代謝活動(dòng)異常，脂肪酸脫氫酶涉及的代謝反應(yīng)終止。

②試驗(yàn)組：含該基因的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化突變體中，相應(yīng)代謝途徑的生化反應(yīng)恢復(fù)正常。

說(shuō)明該基因編碼了脂肪酸脫氫酶，并執(zhí)行了相應(yīng)的功能。12.參考答案：有三種，即UAA、UGA和UAG。UAA叫赭石密碼，UAG叫琥珀密碼，UGA叫蛋白石密碼。13.參考答案：(1)增強(qiáng)子的定義

增強(qiáng)子是指能夠提高轉(zhuǎn)錄起始效率的DNA序列，它是基因表達(dá)的重要調(diào)控元件，可位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的5'或3'端，而且一般與所調(diào)控的靶基因的距離無(wú)關(guān)。

(2)增強(qiáng)子的特點(diǎn)

①遠(yuǎn)距離效應(yīng)：一般位于上游-200bp處，但可增強(qiáng)遠(yuǎn)處啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄。

②無(wú)方向性：無(wú)論位于靶基因的上游、下游或內(nèi)部都可發(fā)揮增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄的作用。

③順式調(diào)節(jié)：只調(diào)節(jié)位于同一染色體上的靶基因，對(duì)其他染色體上的基因沒(méi)有作用。

④無(wú)物種和基因的特異性：可以連接到異源基因上發(fā)揮作用。

⑤具有組織特異性：增強(qiáng)子的效應(yīng)需特定的蛋白質(zhì)因子參與。

⑥有相位性：其作用和DNA的構(gòu)象有關(guān)。

⑦某些增強(qiáng)子可以對(duì)外部信號(hào)產(chǎn)生反應(yīng)：如熱休克基因在高溫下才表達(dá)，金屬硫蛋白基因在鎘和鋅的存在下才表達(dá)。

(3)增強(qiáng)子的作用機(jī)制

①影響模板附近的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致DNA雙螺旋彎折或在反式作用因子的參與下，以蛋白質(zhì)之間的相互作用為媒介形成增強(qiáng)子與啟動(dòng)子之間“成環(huán)”連接，活化基因轉(zhuǎn)錄。

②將模板固定在細(xì)胞核內(nèi)特定位置，如連接在核基質(zhì)上，有利于DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶改變DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的張力，促進(jìn)RNA聚合酶Ⅱ在DNA鏈上的結(jié)合和滑動(dòng)。

③增強(qiáng)子區(qū)可作為反式作用因子或RNA聚合酶Ⅱ進(jìn)入染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的“入口”。14.參考答案：在起始密碼子后，有一段編碼疏水性氨基酸序列的RNA區(qū)域，被稱(chēng)為信號(hào)肽序列。該序列常常位于蛋白質(zhì)的氨基末端，長(zhǎng)度一般在13～36個(gè)殘基之間，它在序列組成上的特點(diǎn)有：(1)一般帶有10～15個(gè)疏水氨基酸；(2)常常在靠近該序列N-端疏水氨基酸區(qū)上游帶有1個(gè)或數(shù)個(gè)帶正電荷的氨基酸；(3)在其C-末端靠近蛋白酶切割位點(diǎn)處常常帶有數(shù)個(gè)極性氨基酸，離切割位點(diǎn)最近的那個(gè)氨基酸往往帶有很短的側(cè)鏈(Ala或Glr)。其功能是負(fù)責(zé)把蛋白質(zhì)引導(dǎo)到細(xì)胞內(nèi)不同膜結(jié)構(gòu)的亞細(xì)胞器內(nèi)。15.參考答案：(1)選擇性剪接的定義

選擇性剪接又稱(chēng)可變剪接或變位剪接，是指在mRNA前體的剪接過(guò)程中可以有選擇性地越過(guò)某些外顯子或某個(gè)剪接點(diǎn)進(jìn)行變位剪接，從而產(chǎn)生出組織或發(fā)育階段特異性mRNA的一種剪接方式。此外，不同的啟動(dòng)子或不同的poly(A)加尾位點(diǎn)的選擇，也可看作選擇性剪接。

(2)選擇性剪接的方式

①拼接產(chǎn)物缺失一個(gè)或幾個(gè)外顯子；

②拼接產(chǎn)物保留一個(gè)或幾個(gè)內(nèi)含子作為外顯子的編碼序列；

③外顯子中存在5'拼接點(diǎn)或3'拼接點(diǎn)，從而部分缺失該外顯子；

④內(nèi)含子中存在5'拼接點(diǎn)或3'拼接點(diǎn)，從而使部分內(nèi)含子變?yōu)榫幋a序列。16.參考答案：完全基因敲除是指通過(guò)同源重組法完全消除細(xì)胞或者動(dòng)物個(gè)體中的靶基因活性；條件型基因敲除是指通過(guò)定位重組系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)特定時(shí)間和空間的基因敲除。17.參考答案：(1)蛋白質(zhì)免疫印跡的概念

蛋白質(zhì)免疫印跡又稱(chēng)免疫印跡，是在蛋白質(zhì)凝膠電泳和固相免疫測(cè)定基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中某種蛋白質(zhì)的技術(shù)。該技術(shù)的靈敏度很高，是分子生物學(xué)中最常用的蛋白質(zhì)研究技術(shù)，為檢測(cè)樣品中是否存在蛋白抗原提供了一種可靠的方法。

(2)蛋白質(zhì)免疫印跡的作用原理

被測(cè)蛋白只能與標(biāo)記的特異性抗體相結(jié)合，而這種結(jié)合不改變?cè)摰鞍自谀z電泳中的相對(duì)分子質(zhì)量。經(jīng)SDS分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體上，封閉固相載體未反應(yīng)的位點(diǎn)。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影檢測(cè)被測(cè)蛋白。

(3)蛋白質(zhì)免疫印跡的操作步驟

①蛋白樣品的制備：提取細(xì)胞或組織蛋白，測(cè)定蛋白濃度，將蛋白變性。

②SDS電泳分離樣品。

③轉(zhuǎn)膜與封閉：將已分離的蛋白轉(zhuǎn)移到尼龍或其他膜上，轉(zhuǎn)移后首先將膜上未反應(yīng)的位點(diǎn)封閉起來(lái)以抑制抗體的非特異性吸附。

④與一抗雜交：用固定在膜上的蛋白質(zhì)作為抗原，與對(duì)應(yīng)的非標(biāo)記抗體(一抗)結(jié)合。

⑤與二抗雜交：洗去未結(jié)合的一抗，加入酶偶聯(lián)或放射性同位素標(biāo)記的二抗。

⑥顯色：通過(guò)顯色或放射自顯影法檢測(cè)凝膠中的蛋白成分。18.參考答案：(1)蛋白質(zhì)免疫印跡的概念

蛋白質(zhì)免疫印跡又稱(chēng)免疫印跡，是在蛋白質(zhì)凝膠電泳和固相免疫測(cè)定基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中某種蛋白質(zhì)的技術(shù)。該技術(shù)的靈敏度很高，是分子生物學(xué)中最常用的蛋白質(zhì)研究技術(shù)，為檢測(cè)樣品中是否存在蛋白抗原提供了一種可靠的方法。

(2)蛋白質(zhì)免疫印跡的作用原理

被測(cè)蛋白只能與標(biāo)記的特異性抗體相結(jié)合，而這種結(jié)合不改變?cè)摰鞍自谀z電泳中的相對(duì)分子質(zhì)量。經(jīng)SDS分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體上，封閉固相載體未反應(yīng)的位點(diǎn)。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影檢測(cè)被測(cè)蛋白。

(3)蛋白質(zhì)免疫印跡的操作步驟

①蛋白樣品的制備：提取細(xì)胞或組織蛋白，測(cè)定蛋白濃度，將蛋白變性。

②SDS電泳分離樣品。

③轉(zhuǎn)膜與封閉：將已分離的蛋白轉(zhuǎn)移到尼龍或其他膜上，轉(zhuǎn)移后首先將膜上未反應(yīng)的位點(diǎn)封閉起來(lái)以抑制抗體的非特異性吸附。

④與一抗雜交：用固定在膜上的蛋白質(zhì)作為抗原，與對(duì)應(yīng)的非標(biāo)記抗體(一抗)結(jié)合。

⑤與二抗雜交：洗去未結(jié)合的一抗，加入酶偶聯(lián)或放射性同位素標(biāo)記的二抗。

⑥顯色：通過(guò)顯色或放射自顯影法檢測(cè)凝膠中的蛋白成分。19.參考答案：早期主要是Avery的肺炎球菌在老鼠體內(nèi)的毒性實(shí)驗(yàn)以及Hershey和Chase的T2噬菌體感染大腸桿菌實(shí)驗(yàn)證實(shí)了DNA是遺傳物質(zhì)。20.參考答案：原核生物DNA聚合酶Ⅰ不同于聚合酶Ⅲ的酶活性包括：

(1)DNA聚合酶Ⅰ的生物學(xué)活性低；而DNA聚合酶Ⅲ的生物學(xué)活性較高，為DNA聚合酶Ⅰ的15倍。

(2)DNA聚合酶Ⅰ的N端具有5'→3'核酸外切酶功能，可作用于雙鏈DNA，又可水解5'末端核苷酸處的磷酸二酯鍵；而DNA聚合酶Ⅲ沒(méi)有該功能。

(3)DNA聚合酶Ⅰ的C端同時(shí)具有DNA聚合酶活性和3'→4'核酸外切酶活性，既可合成DNA鏈，又能降解DNA，從而保證了DNA復(fù)制的準(zhǔn)確性；而DNA聚合酶Ⅲ主要負(fù)責(zé)DNA復(fù)制中鏈的延長(zhǎng)反應(yīng)。21.參考答案：5'末端加帽；3'端加尾；內(nèi)含子的剪接[解析]真核生物轉(zhuǎn)錄生成的mRNA要經(jīng)過(guò)較復(fù)雜的加工過(guò)程。包括：①5'末端加帽；②3'端加尾；③剪接去除內(nèi)含子并連接外顯子；④核苷酸編輯；⑤甲基化修飾等。22.參考答案：基因圖位克隆法是分離未知性狀目的基因的一種方法，理論上認(rèn)為所有具有某種表現(xiàn)型的基因都可以通過(guò)基因圖位克隆法克隆得到。

(1)基因圖位克隆法的原理

根據(jù)功能基因在基因組中都有相對(duì)穩(wěn)定的基因座，利用分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行精確定位，用與