鹽酸多奈哌齊口腔崩解片的生物等效性研究

鹽酸多奈哌齊口腔崩解片的生物等效性研究

鹽酸多吉是一種高選擇性乙酰膽堿酯酶抑制劑。抑制乙酰膽堿酯酶對乙酰膽堿的分解，激活中間膽堿能系統(tǒng)，減少膽堿能傳輸損失引起的細(xì)胞退行性變，保護(hù)和改善與學(xué)習(xí)和記憶相關(guān)的神經(jīng)系統(tǒng)功能。它用于改善阿爾茨海默病的大腦膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)功能，緩解癥狀，達(dá)到治療的目的。1數(shù)據(jù)和方法1.17歲,體長為2632共納入健康男性受試志愿者22例,年齡20~27歲,平均23.3歲;身高166~181cm,平均172.0cm;體質(zhì)量指數(shù)19.0~24.0kg/m1.2試驗組和樣品采集采用2×2交叉設(shè)計,將受試志愿者隨機(jī)分為兩組,每組11例,分別交叉口服鹽酸多奈哌齊試驗制劑和參比制劑5mg,清洗期為21d。受試者于試驗日前晚進(jìn)食低脂清淡飲食并入住Ⅰ期臨床試驗病房,次日晨于一側(cè)前臂靜脈安置留置針,抽取空白血樣3mL;受試者空腹用200mL溫開水口服試驗制劑或參比制劑,并于給藥后20、40min,1、2、3、4、6、8、12、24、48、96、144、192、240、288h取靜脈血3mL,置肝素抗凝試管,立即離心分離血漿,置-30℃冰箱儲存待測。1.3鹽酸多奈哌齊片試驗制劑為鹽酸多奈哌齊口腔崩解片,由四川升和制藥有限公司提供,規(guī)格5mg/片,批號081101;參比制劑為鹽酸多奈哌齊片(商品名:安理申),購自日本衛(wèi)材公司,規(guī)格5mg/片,批號080315A。鹽酸多奈哌齊對照品購自中國藥品生物制品檢定所,內(nèi)標(biāo)氫溴酸西酞普蘭對照品購自成都市科倫藥物研究所,純度99.5%。甲醇、甲酸、二氯甲烷為色譜純,購自美國TEDIA公司;醋酸銨和氫氧化鈉為分析純;去離子水由美國Millipore公司Rois1.4重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀采用SIL-HTc型高效液相色譜儀(日本島津公司),API3000三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國AB公司)。色譜柱為ShisheidoC1.5低溫離心+低溫離心取受試者血漿0.5mL,加入0.05mL內(nèi)標(biāo)工作液(西酞普蘭10ng/mL)及0.1mL2mol/L氫氧化鈉溶液,混勻后,加入3.5mL二氯甲烷渦旋混合7min,再低溫離心7min(離心半徑18cm,轉(zhuǎn)速3300r/min),抽取上層水層,轉(zhuǎn)下層有機(jī)相于尖底管中,水浴45℃,空氣流揮干,0.1mL流動相復(fù)溶,進(jìn)樣0.03mL。1.6評估指標(biāo)1.6.1建立專屬性的考察方案將多奈哌齊和內(nèi)標(biāo)對照品的混合溶液、經(jīng)樣品預(yù)處理后的空白血漿樣品、經(jīng)樣品預(yù)處理后的空白血漿加多奈哌齊和內(nèi)標(biāo)對照品及經(jīng)預(yù)處理后的受試者血漿樣品按“1.5”項方法進(jìn)樣,考察所建立方法的專屬性。1.6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸法取空白血漿0.5mL,分別加入0.05mL各濃度多奈哌齊標(biāo)準(zhǔn)系列工作液,使其濃度分別為15、12、4、1、0.5、0.1和0.05ng/mL,按“1.5”項方法操作,記錄多奈哌齊及內(nèi)標(biāo)峰面積,以其峰面積比值y對應(yīng)其濃度x進(jìn)行線性回歸。1.6.3方法回收率和精密度配制含多奈哌齊0.1、1.0和12.0ng/mL濃度血漿樣品各6份,于同日內(nèi)測定,計算日內(nèi)精密度和方法回收率;連續(xù)測定3d,計算日間精密度。精密度以變異系數(shù)(CV)表示,CV越小,精密度越高。1.6.4基質(zhì)效應(yīng)測定在經(jīng)過預(yù)處理的空白血漿基質(zhì)中加入0.1、1.0和12.0ng/mL濃度的多奈哌齊對照品溶液,記錄進(jìn)樣得到的峰面積作為分子,以相應(yīng)對照品溶液直接進(jìn)樣得到峰面積作為分母,二者相比得基質(zhì)效應(yīng);配制上述3個濃度的血漿樣品,經(jīng)樣品預(yù)處理后進(jìn)樣所得峰面積作為分子,以預(yù)處理后的空白血漿基質(zhì)加入3個相應(yīng)濃度對照品溶液進(jìn)樣所得峰面積作為分母,二者之比得萃取回收率。1.6.5血藥濃度-時間曲線采用建立的HPLC-MS/MS法測定受試者口服試驗制劑與參比制劑后的不同采血時間點(diǎn)血漿樣品濃度,以時間為橫坐標(biāo),濃度為縱坐標(biāo),繪制血藥濃度-時間曲線。1.6.6血藥濃度計算用中國藥理學(xué)會編制的實用藥代動力學(xué)計算程序DAS2.0擬合受試者單次口服鹽酸多奈哌齊試驗制劑與參比制劑的經(jīng)時血藥濃度數(shù)據(jù),峰濃度(C2結(jié)果2.1測定產(chǎn)物的保留時間多奈哌齊和內(nèi)標(biāo)對照品、空白血漿、空白血漿加多奈哌齊、內(nèi)標(biāo)對照品及受試者血漿樣品色譜圖見圖1。多奈哌齊保留時間為4.8min;內(nèi)標(biāo)(西酞普蘭)的保留時間為5.0min。血漿雜質(zhì)不干擾藥物及內(nèi)標(biāo)色譜峰。2.2線性域多奈哌齊血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=0.0056x+0.5120(r=0.9972,權(quán)重為1/x2.3方法的精度和回收率3個濃度的日內(nèi)和日間CV均<8%,方法回收率均>95%,結(jié)果良好,見表1。2.4回收率與基本效果之間的關(guān)系3個濃度的基質(zhì)效應(yīng)均>80%,萃取回收率>45%,結(jié)果良好,見表1。2.5血藥濃度曲線22例受試者交叉口服鹽酸多奈哌齊試驗制劑和參比制劑各5mg后,均值血藥濃度-時間曲線見圖2。2.6藥代動力學(xué)與生物等效的分析22例受試者交叉口服鹽酸多奈哌齊試驗制劑和參比制劑各5mg后,主要藥動學(xué)參數(shù)見表2。試驗制劑和參比制劑的AUC2.7腸道反應(yīng)受試者單次口服鹽酸多奈哌齊試驗制劑后,3例(13.6%)出現(xiàn)輕度頭暈頭痛,4例(18.2%)出現(xiàn)胃腸道反應(yīng),1例(4.5%)出現(xiàn)手臂肌肉輕微跳動,10例(45.4%)出現(xiàn)竇性心動過緩;受試者單次口服鹽酸多奈哌齊參比制劑后,1例(4.5%)出現(xiàn)雙下肢皮膚瘙癢,8例(38.1%)出現(xiàn)竇性心動過緩。上述不良反應(yīng)與實驗室檢查異常未處理均自行緩解,所有不良反應(yīng)均在參比制劑說明書所述范圍內(nèi),判斷與藥物可能有關(guān)。3不良反應(yīng)的消除目前已報道的人血漿中多奈哌齊濃度的方法有高效液相色譜法目前罕見鹽酸多奈哌齊口腔崩解片的藥動學(xué)研究的相關(guān)報道。已有的報道鹽酸多奈哌齊普