he-ne激光誘變紅曲霉m9x菌株的選育

he-ne激光誘變紅曲霉m9x菌株的選育

原生質體是指微生物通過一定的酶反應去除必要的中央委員會結構。由于原生質體失去細胞壁的保護作用而成球形,只能在高滲透壓培養(yǎng)基中存活,并在合適的培養(yǎng)基中恢復細胞壁而再生。對環(huán)境、誘變劑等更為敏感,因此用原生質體作為誘變材料,誘變效果較傳統(tǒng)方法更為理想MonacolinK(洛伐他汀)為人體膽固醇合成中的關鍵酶羥戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原酶的抑制劑,因其療效好,副作用低,是世界上最暢銷的降血脂藥物之一1材料和方法1.1病毒1.2主要培養(yǎng)基1.2.1表面活性劑麥芽汁12～14°BX、瓊脂1.8%～2.0%、pH5.0。1.2.2蘑菇生長培養(yǎng)基1.2.3再生培養(yǎng)基麥芽汁12～14°BX、上層瓊脂0.8%、下層瓊脂2%、均用0.6mol/L的MgSO1.2.4液體種子培養(yǎng)部位%葡萄糖7、蛋白胨7.5、豆粉0.5、MgSO1.2.5液體發(fā)酵培養(yǎng)基%甘油7、葡萄糖3、牛肉膏3、蛋白胨0.8、NaNO1.3牛酶、纖維素酶及用銅納米薄膜MonacolinK對照品美國Sigma公司;蝸牛酶北京鼎國生物制品有限公司;纖維素酶陜西科學院酶制劑研究所;薄層層析硅膠GF254青島海洋化工有限公司;丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺北京鼎國生物制品有限公司。1.4儀器、設備和試藥He-Ne激光發(fā)生器西北大學光電廠;DYY-Ⅲ5型電泳儀北京市六一儀器廠;ZFQ81-1型旋轉蒸發(fā)器上海醫(yī)械專機廠;高速冷凍離心機日本HitachiR22G;ZX-1型旋片式真空泵沈陽市真空泵廠。1.5方法1.5.1原生質系統(tǒng)的準備和再生以豆芽汁培養(yǎng)液為菌絲培養(yǎng)基,采用60h菌齡的菌絲體,以0.6mol/LMgSO1.5.2激光輻射時間對原生質體相對再生率的影響用制備的原生質體稀釋成約101.5.3原生質體培養(yǎng)選取激光最佳照射劑量,經(jīng)誘變后,將原生質體懸液梯度稀釋涂布麥芽汁再生平板,培養(yǎng)后,挑出形態(tài)、大小、顏色等發(fā)生變化的單菌落,斜面保藏備用。1.5.4由he-ne激光誘導的引導變量組成的高產(chǎn)誘導變量布局對激光誘變后的菌株搖瓶發(fā)酵后,進行TLC法初篩和HPLC法復篩1.5.5原始提取m將紅曲霉M1.5.6原始提取m取二者點接于麥芽汁平板中央,30℃培養(yǎng)90h,比較二者形態(tài)特征,并用相機拍下其菌落形態(tài)。1.5.7誘導變量m將誘變株M2結果與分析2.1紅曲霉原生質體m以豆芽汁培養(yǎng)液為菌絲培養(yǎng)基,采用60h菌齡的菌絲體,以0.6mol/LMgSO2.2原生質體相對再生率的變化激光照射時間對誘變株M由圖1中可見,隨著激光照射時間的延長,原生質體的相對再生率逐步下降,在17min時,已有92.5%的原生質體致死。為了獲得較大的突變率,故選用17min作為誘變時間。2.3紅曲霉美果酒多菌株菌株的篩選經(jīng)He-Ne激光照射原生質體,稀釋后倒雙層平板,挑取菌落形態(tài)發(fā)生變化再生菌落,斜面保存,搖瓶發(fā)酵后,測其MonacolinK產(chǎn)量,經(jīng)反復篩選后,得到一株MonacolinK產(chǎn)量最高的紅曲霉M2.4誘導變量m由圖3、圖4可以看出,經(jīng)激光誘變處理紅曲霉菌株M2.5誘導變量m由圖5可知,紅曲霉M2.6案例明并確定動力學固pa,方法誘變株M由表1可知:斜面連續(xù)傳代8次,MonacolinK產(chǎn)量平均值為102.36μg/ml,標準偏差為1.06,