雙氯芬酸鈉緩釋片相對生物利用度的研究

雙氯芬酸鈉緩釋片相對生物利用度的研究

二氯芬酸鈉（二氯芬丙烯酸）的化學名字叫相鄰-（2,6-二氯丁基）-苯乙酸鈉。這是一種非體抗炎劑。其主要作用機制是抑制環(huán)氧化酶的活性，防止花四烯酸轉化為前列腺素。材料、對象和方法1雙氯芬酸鈉對照品、地西材料、藥品檢定所受試制劑:雙氯芬酸鈉緩釋片,規(guī)格:每片100mg,批號:061001,山西亞寶藥業(yè)集團股份有限公司研制;參比制劑:雙氯芬酸鈉緩釋片(商品名:奧貝),規(guī)格:每片100mg,批號:GZ8303,進口商品注冊證號:H20020541,加拿大奧貝泰克制藥有限公司生產;雙氯芬酸鈉對照品,含量為99.8%,批號:100334-200302,由中國藥品生物制品檢定所提供;內標:地西泮對照品,含量為99.8%,批號:171225-200302,由中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇、乙腈為色譜純,由山東禹王實業(yè)有限公司禹城化工廠生產;水為Millipore去離子水;所用其他試劑均為優(yōu)級分析純。高效液相色譜儀,包括:510液相色譜輸液泵、2487雙波長紫外檢測器,美國Waters公司產品;N2000雙通道色譜工作站,浙江大學智達信息工程有限公司產品;AR1140電子分析天平,美國奧豪斯公司產品;TG16-WS臺式高速離心機,長沙湘儀儀器有限公司產品;MVS-1渦旋混合器,北京金北德工貿有限公司產品;KQ5200E超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司產品。2知情同意書試驗18名男性健康受試者,年齡:(21.06±1.00)歲,體質量:(67.86±3.61)kg,身高:(172.10±7.05)cm。受試者試驗前經病史詢問無藥物過敏史、無精神病史及其他慢性病史;受試者經臨床體檢和實驗室檢查符合試驗要求,試驗前14天內未服用任何藥物。在充分了解本試驗的試驗目的與方法以及可能出現(xiàn)的藥物不良反應后,志愿接受試驗并簽署知情同意書。本試驗方案經本校第一附屬醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。3分組、給藥與吸藥18名健康志愿者隨機分成2組,每組9人。第1組先服用受試制劑,后服用參比制劑;第2組先服用參比制劑,后服用受試制劑;2次給藥間隔時間(清洗期)為1周。受試者試驗前禁食12h,試驗當日晨空腹用溫開水250mL送服藥物;服藥后4h統(tǒng)一進低蛋白、低脂肪標準餐;試驗期間,禁止任何劇烈活動、吸煙、飲酒等。3.1外周血靜脈血采集2組受試者分別服用受試或參比試劑100mg,每組于給藥前及給藥后0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、3.5、4.0、5.0、8.0、12.0和24.0h采集上肢靜脈血5mL,并立即移至經肝素處理的離心管中,混勻,3500r·min-1離心10min,分離血漿,于-20℃保存待測。3.2多次給藥后多次給藥后靜脈血樣的檢測2組受試者分別服用受試或參比試劑,每次100mg,1次/天,連續(xù)4天,分別在第2、3、4天,晨7:00服藥前采血1次,每次5mL,供測谷濃度用,以確證是否達到穩(wěn)態(tài)。在多次給藥達穩(wěn)態(tài)試驗的第4天,晨7:00服藥后0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、3.5、4.0、5.0、8.0、12.0和24.0h采集上肢靜脈血5mL,處理同上。色譜柱:DiamonsilC18(200mm×4.6mm,5μm,迪馬公司產品);流動相:甲醇-0.025mol·L-1醋酸鈉緩沖液(70:30,冰醋酸調節(jié)pH7.0);檢測波長:276nm;流量:1.2mL·min-1;進樣量:20μL;柱溫:室溫;檢測靈敏度:5×10-3AUFS。4.2乙腈用量的測定精密吸取血漿400μL,加入內標地西泮溶液20μL(20mg·L-1),加入乙腈400μL,渦旋振蕩1min,12000r·min-1離心10min,取上清液20μL進樣。4.3樣品測定結果在本試驗分析方法條件下,測得空白人血漿、空白血漿加標準品、受試者血漿的色譜圖,見圖1。試驗結果表明,雙氯芬酸鈉和內標(地西泮)的保留時間分別為9.50、7.00min。雙氯芬酸鈉分離基線良好,血漿中內源性組分對藥物測定無干擾,可確保分析方法的專一性。4.4標準曲線和定量下限精密吸取空白血漿200μL,加入內標溶液20μL,分別加入一系列不同濃度的雙氯芬酸鈉標準溶液200μL,制成相當于雙氯芬酸鈉濃度分別為15.63、31.25、62.50、125.00、250.00、500.00、1000.00、2000.00μg·L-1的標準系列血漿樣品,按血漿樣品處理項下方法處理后進樣,記錄峰面積,以雙氯芬酸鈉濃度為橫坐標,雙氯芬酸鈉與內標物地西泮的峰面積比值為縱坐標,用最小二乘法進行線性回歸,所得的直線回歸方程為y=1.7×10-3x+1.45×10-2,γ=0.9997,雙氯芬酸鈉的線性范圍為15.63～2000.00μg·L-1,定量下限(lowerlimitofquantitation,LLOQ)為15.63μg·L-1。4.5精密度和回收率按標準曲線與最低檢測限項下的方法,配制低、中、高3個濃度(雙氯芬酸鈉濃度分別為31.25、250.00和1000.00μg·L-1)的質量控制(qualitycontrol,QC)樣品,每一濃度日內平行測定5次,連續(xù)測定3天,根據(jù)當日的標準曲線,計算QC樣品中雙氯芬酸鈉的實測濃度,計算日內、日間精密度和相對回收率。低、中、高3個濃度的雙氯芬酸鈉血漿樣品的日內、日間精密度均<15%,相對回收率為101.59%～110.03%。另用流動相配制相應濃度的雙氯芬酸鈉溶液,不經處理直接進樣,記錄雙氯芬酸鈉的峰面積,比較血漿樣品和流動相樣品的峰面積,計算雙氯芬酸鈉在血漿中的絕對回收率。低、中、高3個濃度的雙氯芬酸鈉血漿樣品絕對回收率為73.70%～90.40%,結果見表1。按上述方法配制低、中、高3個濃度(雙氯芬酸鈉濃度分別為31.25、250.00和1000.00μg·L-1)的QC樣品,分別對室溫放置穩(wěn)定性(室溫放置8、16、24h)、長期冷凍穩(wěn)定性(-20℃條件下7、14、45d)、凍融穩(wěn)定性(反復凍融3次)進行考察。結果表明,雙氯芬酸鈉標準血漿樣品,在室溫放置24h內穩(wěn)定;在-20℃放置45天內穩(wěn)定;經過3次凍融循環(huán)后穩(wěn)定。5統(tǒng)計處理將血藥濃度數(shù)據(jù)輸入計算機,用3P97程序分別進行各項藥代動力學參數(shù)的計算,并對生物等效性進行評價。結果1平均血藥濃度曲線18名健康受試者單次、多次口服雙氯芬酸鈉緩釋片受試制劑與參比制劑后的平均血藥濃度-時間曲線,見圖2。2藥房動態(tài)參數(shù)18名健康受試者單次、多次口服雙氯芬酸鈉緩釋片受試制劑與參比制劑后的主要藥代動力學參數(shù),見表2。3auc0-t、auc0-和cmx的置信區(qū)差異AUC0＿t、AUC0-∞和Cmax經對數(shù)轉換后,進行方差分析和雙單側t檢驗,tmax經Wilcoxon檢驗,結果表明均無顯著性差異。AUC0-t、AUC0-∞和Cmax的90%置信區(qū)間分別為(93.2～101.8)%,(91.9～99.5)%,(93.3～103.5)%。根據(jù)AUC0-t計算相對生物利用度為(98.0±11.2)%,該結果表明,單次給藥時,受試制劑與參比制劑具有生物等效性。3.2aucss,三/三因素型AUCss、Cssmax經對數(shù)轉換后,進行方差分析和雙單側t檢驗,tmax經Wilcoxon檢驗,結果表明均無顯著性差異。AUCss、Cssmax的90%置信區(qū)間分別為95.70%～100.50%,98.50%～107.60%。Cssmin采用實測值,Cssav=AUCss/τ,DF=(Cssmax-Cssmin)/Cssav×100%,根據(jù)AUCss計算F為(98.25±5.82)%,該結果表明,多次給藥時,受試制劑與參比制劑具有生物等效性。4安全評估在試驗期間,18名健康受試者均未發(fā)生藥物不良反應,各項檢查指標均正常。流動相及制劑的生物等效性研究高效液相色譜法具有靈敏度高、分析速度快、分離效能好、重現(xiàn)性好、應用范圍廣等諸多優(yōu)點在方法學考察過程中,曾考慮用甲醇-水作為流動相;但雙氯芬酸鈉和內標的分離度差,且2者的保留時間均較長,改用甲醇-0.025mol·L-1醋酸鈉緩沖液(70:30,冰醋酸調節(jié)pH7.0)作為流動相,獲得了較好的分離度和較短的保留時間。在血漿樣品處理過程中,曾采用萃取法,但雜峰較多,干擾待測物質檢測,故改用乙腈蛋白沉淀法處理血漿樣品雙氯芬酸鈉的多種劑型均有研究報道;但是目前研究的熱點是對雙氯芬酸鈉緩(控)釋制劑的研究。緩(控)釋制劑由于采用了新技術,改變了其體內釋放吸收過程,因此有必要進行體內生物利用度比較研究,以證實其緩(控)釋特征,并證實其與參比制劑