生物化學(xué)制藥專家講座

第七章生物化學(xué)制藥一、概述二、生化藥品制備技術(shù)三、生化藥品制備實(shí)例生物化學(xué)制藥專家講座第1頁生化藥品所謂生化藥品是指以天然動物、植物、微生物等生物體組織和器官為原料，經(jīng)過化學(xué)方法進(jìn)行提取、精制或者用化工合成方法制成內(nèi)源性生理生化物質(zhì)，用于預(yù)防、治療、診療疾病。包含由上述這些已知藥品加以結(jié)構(gòu)改造或人工合成創(chuàng)造出自然界所沒有新藥品。因?yàn)榧s定俗成，生化藥品不包含抗生素（抗生素早已自成體系）；也不包含用微生物(細(xì)菌，病毒，主克次體)、微生物和動物毒素、人和動物血液及組織等制成供預(yù)防、治療和診療特定傳染病或其它相關(guān)疾病生物制品；習(xí)慣上也不包含中藥制成中藥制劑。生物化學(xué)制藥主要采取化學(xué)提取法。生物化學(xué)制藥專家講座第2頁

3.中國三大藥源化學(xué)藥品生物藥品中草藥生化藥品生物制品當(dāng)代生物技術(shù)藥品中國藥典年分為1部、2部和3部藥典1部收載藥材及飲片，植物油脂和提取物、成方制劑和單方制劑等；藥典2部收載化學(xué)藥品、抗生素、生化藥品、放射性藥品及藥品輔料等；藥典3部收載生物制品，首次將《生物制品規(guī)程》并入藥典生物化學(xué)制藥專家講座第3頁生化藥品分類（一）：按藥品化學(xué)本質(zhì)來分類（二）：按藥品起源來分類

生物化學(xué)制藥專家講座第4頁（一）：按藥品化學(xué)本質(zhì)來分類1：氨基酸及其衍生物類藥品2：多肽和蛋白質(zhì)類藥品-----蛋白質(zhì)類藥品有白蛋白、丙種球蛋白、胰島素，多肽類有催產(chǎn)素、降鈣素、胰高血糖素。3：酶與輔酶類藥品----消化酶、氧化還原酶、抗腫瘤酶。4：核酸及其衍生物類藥品----DNA、RNA、單核苷酸、堿基。5：糖類藥品----以粘多糖為主6：脂類藥品---脂肪酸類、磷脂類、膽酸類、固醇類、卟啉類。生物化學(xué)制藥專家講座第5頁國內(nèi)主要生化藥品種類和廠家一覽表

藥品類別主要慣用具種主要生產(chǎn)廠家氨基酸類賴氨酸沖劑、組氨酸、半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸及其鹽類；L－半胱氨酸；水解蛋白；思美泰；阿波莫斯以及氨基酸大輸液湖北省八峰藥業(yè)、上海味之素氨基酸有限企業(yè)、武漢久安藥業(yè)（武漢第二制藥廠）、廣州僑光藥廠、深圳萬和制藥、華瑞制藥酶類鏈激酶、尿激酶、凝血酶、降纖酶、抑肽酶、胰激肽釋放酶、彈性酶、立止血、糜蛋白酶、菠蘿酶、沙雷肽酶、門冬酰胺酶、透明質(zhì)酸酶、細(xì)胞色素C、達(dá)吉、得每通上海生物化學(xué)制藥廠、廣東天普藥業(yè)企業(yè)、南京大學(xué)制藥廠

核酸類聚肌胞、阿昔洛韋、病毒唑、萬乃洛韋、泛昔洛韋、更昔洛韋、胞二磷膽堿、硫唑嘌呤、甲基硫氧嘧啶、阿糖胞苷、ATP、CTP、CAMP、轉(zhuǎn)移因子麗珠醫(yī)藥集團(tuán)股份有限企業(yè)、岳陽生化制藥廠、金花企業(yè)（集團(tuán)）股份有限企業(yè)生物化學(xué)制藥專家講座第6頁藥品類別主要慣用具種主要生產(chǎn)廠家糖類甘露醇、葡萄糖、肌醇、右旋糖酐、豬苓多糖、透明質(zhì)酸、肝素、低分子肝素、果糖、乳果糖、甘油果糖等珠海生化、杭州賽諾菲民生制藥有限企業(yè)、蘇威制藥有限企業(yè)脂質(zhì)類角鯊烯、膽固醇類激素、輔酶Q10、脈適寶、熊去氧膽酸、前列腺素、神經(jīng)節(jié)苷脂等廣州明興制藥廠、廣州星群藥業(yè)（股份）有限企業(yè)、佛山康寶順?biāo)帢I(yè)有限企業(yè)多肽及蛋白質(zhì)類加壓素及其衍生物、催產(chǎn)素及其衍生物、促皮質(zhì)素及其衍生物、下丘腦垂體肽激素、消化道激素、胸腺素、降鈣素、谷胱甘肽、施他寧、蛋白質(zhì)激素

生物化學(xué)制藥專家講座第7頁（二）：按藥品起源來分類1：人體起源生物藥品----人血液制品、胎盤制品、尿制品。

2：動物起源生物藥品----蛇毒、蜂毒。

3：植物起源生物藥品----是中草藥主要成份。

4：微生物起源生物藥品------氨基酸、維生素、酶。

5：海洋生物起源生物藥品------種類繁多、成份復(fù)雜。生物化學(xué)制藥專家講座第8頁人體起源藥品人體起源藥品特點(diǎn)人體起源藥品種類人體起源藥品前景和問題

生物化學(xué)制藥專家講座第9頁人體起源藥品特點(diǎn)1：安全性好，藥品與人體含有同源性，不會發(fā)生排斥反應(yīng)2：效價高、療效可靠。純化血漿因子制劑，要比原血漿高出10-1000倍。3：穩(wěn)定性好，提純產(chǎn)品均可制成凍干制劑，有利于貯存、運(yùn)輸、使用。生物化學(xué)制藥專家講座第10頁人體起源藥品種類人血液制品人細(xì)胞因子人體起源其它原料物質(zhì)人體激素

生物化學(xué)制藥專家講座第11頁血液成份制品又可為：（1）紅細(xì)胞(RBC)

（2）白細(xì)胞(WBC)

（3）血小板

（4）血漿在使有輸入全血治療辦法中，有50%以上患者只要輸入紅細(xì)胞就已經(jīng)足夠了，另30%則只須輸入血液中其它成份就能到達(dá)滿意療效，所以，利用血液單一成份進(jìn)行治療，已經(jīng)成為當(dāng)前一個趨勢。分離血液成份技術(shù)有--離心法、過濾法。生物化學(xué)制藥專家講座第12頁人血液制品全血制品血細(xì)胞制品血漿制品生物化學(xué)制藥專家講座第13頁紅細(xì)胞制劑用紅細(xì)胞代替全血，在國內(nèi)已經(jīng)逐步推廣應(yīng)用。是心臟病、慢性腎病、肝病患者補(bǔ)充血紅蛋白首選品種。全血和紅細(xì)胞保留于4±2℃內(nèi)可保留35天冰凍貯藏紅細(xì)胞，是長久保留紅細(xì)胞有效方法，是指地-80℃到-196℃之間低溫進(jìn)行保留，其優(yōu)點(diǎn)是能夠貯備多年，重融之后性能很好。缺點(diǎn)是貯藏費(fèi)用太高。生物化學(xué)制藥專家講座第14頁白細(xì)胞濃縮液白細(xì)胞是生產(chǎn)干擾素（INFa）主要原料。所采集到人體白細(xì)胞含有組織相容HLA位點(diǎn)。不一樣人體之間白細(xì)胞存在著抗原—抗體凝聚反應(yīng)、和細(xì)胞毒性作用。這是制約白細(xì)胞制劑應(yīng)用原因之一。另外，當(dāng)前白細(xì)胞體外保留技術(shù)還未處理，這是制約白細(xì)胞制劑應(yīng)用原因之二。生物化學(xué)制藥專家講座第15頁100,000-300,000/mm34-6million/mm3生物化學(xué)制藥專家講座第16頁嗜中性粒細(xì)胞Neutrophil嗜中性粒細(xì)胞Neutrophil嗜中性粒細(xì)胞Neutrophil嗜中性粒細(xì)胞Neutrophil嗜中性粒細(xì)胞Neutrophil嗜酸性粒細(xì)胞Eosinophil嗜酸性粒細(xì)胞Eosinophil嗜酸性粒細(xì)胞Eosinophil嗜酸性粒細(xì)胞Eosinophil嗜堿性粒細(xì)胞Eosinophil嗜堿性粒細(xì)胞Eosinophil嗜堿性粒細(xì)胞Eosinophil單核細(xì)胞Monocyte嗜堿性粒細(xì)胞Eosinophil嗜堿性粒細(xì)胞Eosinophil淋巴細(xì)胞Lymphocyte生物化學(xué)制藥專家講座第17頁血小板制劑血小板制劑分離和使用在國外已經(jīng)比較普遍，而在國內(nèi)還未推廣應(yīng)用。血小板制劑適應(yīng)癥為白血病、淋巴瘤、再生障礙性貧血等等疾病。血小板保留于特制袋內(nèi)，在22±2℃內(nèi)并不停振蕩，可保留5天血小板制劑輸入人體之后，經(jīng)常很快會產(chǎn)生抗體，從而使輸入血小板制劑遭到破壞。所以，最好輸入那種HLA相容血小板制劑。生物化學(xué)制藥專家講座第18頁新鮮冰凍血漿（FFP）新鮮冰凍血漿是指剛采集到新鮮血液，在-30℃溫度下，保留時間不超出1年血漿。新鮮冰凍血漿能夠有效地保留血漿中各種生物活性成份功效?？稍谠S多臨床疾病治療中使用。生物化學(xué)制藥專家講座第19頁組成人體血漿成份血漿占人體體重量=8%

血漿占全血量=50%

血漿中水分占血漿量=92%

血漿中蛋白質(zhì)占血漿量=6--7%白蛋白（Alb）+免疫球蛋白（IgG）=65%免疫球蛋白（IgG+IgM）+纖維蛋白原（Fg）+補(bǔ)體（C3）+轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tr）+巨球蛋白（a2M）+觸珠蛋白（Hp）+a1抗胰蛋白酶（a1AT）+血色素結(jié)合蛋白（Hpx）+a1-酸性糖蛋白G（a1AG）=25%其它百作種微量蛋白質(zhì)和多肽成份=10%生物化學(xué)制藥專家講座第20頁血漿成份制品轉(zhuǎn)輸?shù)鞍最惷庖咔虻鞍啄到y(tǒng)蛋白補(bǔ)體系統(tǒng)蛋白蛋白酶抑制物類生物化學(xué)制藥專家講座第21頁轉(zhuǎn)輸?shù)鞍最愞D(zhuǎn)輸?shù)鞍资侵改軌驅(qū)C(jī)體營養(yǎng)物質(zhì)、代謝產(chǎn)物、激素、藥品進(jìn)行轉(zhuǎn)輸血漿蛋白。詳細(xì)有：（1）白蛋白-----轉(zhuǎn)輸脂肪酸、色素、陽離子、藥品、VC（2）前白蛋白---轉(zhuǎn)輸甲狀腺素結(jié)合蛋白、視黃醇結(jié)合蛋白（3）α-類脂蛋白-----轉(zhuǎn)輸脂質(zhì)、膽固醇、激素（4）β-類脂蛋白-----轉(zhuǎn)輸脂質(zhì)、膽固醇、激素（5）觸珠蛋白------轉(zhuǎn)輸游離血紅蛋白（6）血紅蛋白結(jié)合蛋白------轉(zhuǎn)輸游離血紅蛋白（7）轉(zhuǎn)鐵蛋白------將鐵轉(zhuǎn)輸給網(wǎng)織紅細(xì)胞和其它組織（8）銅藍(lán)蛋白-----轉(zhuǎn)輸銅，調(diào)整銅吸收形成酶（9）轉(zhuǎn)鈷胺蛋白-----轉(zhuǎn)輸VB12（10）GC球蛋白------轉(zhuǎn)輸維生素B族生物化學(xué)制藥專家講座第22頁免疫球蛋白免疫球蛋白組成機(jī)體防御感染體液免疫系統(tǒng)。免疫球蛋白種類：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。生物化學(xué)制藥專家講座第23頁凝血系統(tǒng)蛋白凝血系統(tǒng)蛋白維持機(jī)體正常凝血機(jī)制。分為：（1）凝血因子。凝血系統(tǒng)共有13種凝血因子（2）抗凝血因子?？鼓蜃佑欣w溶酶原（Pg），當(dāng)它被尿激酶激活之后，就含有溶解血栓作用。

生物化學(xué)制藥專家講座第24頁內(nèi)源性凝血外源性凝血接觸異面組織損傷ⅫⅫaⅪⅪaⅨⅨaⅧCa2+血小板磷脂

ⅩⅩaⅤCa2+血小板磷脂凝血酶原激活物

ⅩaⅩⅤCa2+血小板磷脂Ⅲ凝血酶原(Ⅱ)凝血酶(Ⅱa)

纖維蛋白原(Ⅰ)

纖維蛋白單體纖維蛋白多聚體ⅩⅢaⅩⅢCa2+(接觸因子)ⅦCa2+血小板磷脂凝血酶原激活物

Ca2+在凝血過程中作用血小板磷脂作用血凝過程正反饋纖維蛋白對血小板聚集凝血酶對血小板聚集促進(jìn)作用凝血酶對本身形成促進(jìn)作用生物化學(xué)制藥專家講座第25頁13種凝血因子因子1-----纖維蛋白原（Fg）

因子2-----凝血酶原（FII）

因子3-----組織因子（FIII）

因子4-----鈣離子

因子5-----前加速素，易變因子（FV）

因子6-----

因子7-----前轉(zhuǎn)化素，穩(wěn)定因子（FVII）

因子8-----抗血友病因子（AHF）

因子9-----血漿凝血激酶成份（PTC）

因子10----Stuart因子（FX）

因子11----血漿凝血激酶前質(zhì)

因子12----接觸因子（FXII）

因子13----纖維蛋白穩(wěn)定因子（FSF）、激肽酶原（pK）、高分子量激肽酶原（HMW）、纖溶酶原（Pg）、蛋白C（PC）。生物化學(xué)制藥專家講座第26頁纖溶酶原纖溶酶血管內(nèi)皮纖維溶酶原激活物組織纖維溶酶原激活物血漿纖維溶酶原激活物血漿纖維溶酶原激活物原Ⅻa纖維蛋白降解物血漿中抗纖溶酶(-)生物化學(xué)制藥專家講座第27頁補(bǔ)體系統(tǒng)蛋白補(bǔ)體系統(tǒng)是機(jī)體主要防御系統(tǒng)之一。（1）補(bǔ)體系統(tǒng)在細(xì)胞吞噬、調(diào)理、趨化性、細(xì)胞凋亡過程中起主要作用。（2）補(bǔ)體系統(tǒng)在本身性免疫疾病中，起著損傷機(jī)體作用。生物化學(xué)制藥專家講座第28頁補(bǔ)體作用方式分為三種路徑（1）補(bǔ)體傳統(tǒng)活化路徑------9種補(bǔ)體成份（C1q、C1r、C1s、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9）。其中C1q、C1r、C1s為識別單位，C2、C3、C4為活性單位，C5、C6、C7、C8、C9為膜攻擊單位。（2）補(bǔ)體旁路活化路徑------B因子、D因子、P因子。（3）補(bǔ)體旁路活化過程中調(diào)整因子-----C36-INA、βIH。生物化學(xué)制藥專家講座第29頁蛋白酶抑制物類a1-抗胰蛋白酶（a1-AT）-----能夠保護(hù)機(jī)體正常細(xì)胞不受蛋白酶破壞和損傷，能幫助控制感染和炎癥。a1抗糜蛋白酶（a1X）-----能夠保護(hù)機(jī)體正常細(xì)胞不受蛋白酶破壞和損傷，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境恒定。a間胰酶抑制劑（IaI）----含有制約、中和、去除一些蛋白酶作用，能預(yù)防凝血系統(tǒng)蛋白酶本身消化?？鼓窱II（ATIII）------在肝素促進(jìn)下，與凝血酶形成復(fù)合物，使得凝血酶失活，預(yù)防血栓形成。Ci脂酶抑制劑（Ci-INH）------a2巨球蛋白（a2M）----含有制約、中和、去除一些蛋白酶作用，能預(yù)防凝血系統(tǒng)蛋白酶本身消化。a2抗纖溶酶（a2AP）--------生物化學(xué)制藥專家講座第30頁人細(xì)胞因子（1）骨骼生長因子（BGF）-------起源于人骨。

（2）骨形成蛋白（BMP）-------起源于人骨

（3）干擾素（IFN）

IFN-α---起源于白細(xì)胞----調(diào)整免疫活性

IFN-β---起源于成纖維細(xì)胞----調(diào)整免疫活性

IFN-γ---起源于淋巴細(xì)胞----調(diào)整免疫活性。

（4）血小板衍化生長因子（PDGF）----起源于血小板

（5）結(jié)締組織活性肽-III（CATP-III）----起源于血小板

（6）白細(xì)胞介素-1（IL-1）-------起源于人血、巨噬細(xì)胞

（7）白細(xì)胞介素-2（IL-2）-------起源于人T淋巴細(xì)胞

（8）B細(xì)胞生長因子（BCGF）----起源于人末梢血管淋巴細(xì)胞（9）骨肉瘤衍化生長因子（ODGF）------起源于人骨肉瘤細(xì)胞株

（10）紅細(xì)胞生長因子（EPO）-------起源于胎兒腎（11）集落刺激因子（CSF）-------起源于人組織、血、尿

（12）促生長因子，生長調(diào)整素（SM）-------起源于人血漿

（13）巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）-------起源于人巨噬細(xì)胞人細(xì)胞因子因?yàn)閿?shù)量十分稀少，當(dāng)前已經(jīng)被基因工程產(chǎn)品所代替，如干擾素a、白細(xì)胞介素-2（IL-2）生產(chǎn)生物化學(xué)制藥專家講座第31頁人體起源其它原料物質(zhì)1、人胎盤2、人尿底蛻膜叢密絨毛膜絨毛膜生物化學(xué)制藥專家講座第32頁人胎盤從人胎盤中提取蛋白主要有：

（1）人胎盤丙種球蛋白，

（2）人胎盤白蛋白，

（3）人胎盤RNA抑制劑。從人胎盤中提取激素有：

（1）絨毛膜促性腺激素（HCG），

（2）絨毛膜促乳激素（HCS）。生物化學(xué)制藥專家講座第33頁人尿從健康男性人尿能夠制備：

（1）尿激酶

（2）激肽釋放酶

（3）尿抑胃素

（4）蛋白酶抑制劑

（5）睡眠因子

（6）集落刺激因子（CSF）

（7）表皮生長因子（EGF）從妊娠婦女和絕經(jīng)期婦女尿液中能夠提?。?/p>

（1）絨毛膜促性腺激素（HCG）生物化學(xué)制藥專家講座第34頁人體激素人體激素主要有：

（1）蛋白質(zhì)類激素

（2）多肽類激素

（3）氨基酸衍生物類激素

（4）脂類激素人體激素極少是大分子蛋白質(zhì)，所以極少出現(xiàn)免疫反應(yīng)。生物化學(xué)制藥專家講座第35頁1、血液深入開發(fā)血漿蛋白質(zhì)總共能夠分為五個組分。當(dāng)前僅僅利用了其中第1組分（纖維蛋白原）、第2組分（免疫球蛋白）、第5組分（白蛋白），而對于第3組分和第4組分中所含有大量血漿蛋白成份，基本上沒有加以利用。其原因是因?yàn)檫@些物質(zhì)含量較低，提純難度較大。第3組分中含有IgA、IgM，凝血因子II、VII、IX、X，蛋白C，纖溶酶原、α2-巨球蛋白，β-微球蛋白，補(bǔ)體成份C3、C4、C5、C8，α-球蛋白，β-球蛋白。第4組分中含有抗凝血酶III，α1抗胰蛋白酶、銅藍(lán)蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白，觸珠蛋白，補(bǔ)體Ci脂酶抑制物，前白蛋白。人體起源藥品前景和問題生物化學(xué)制藥專家講座第36頁2：其它原料深入開發(fā)----對于胎盤、尿液提取技術(shù)也在不停發(fā)展之中。3：當(dāng)代生物技術(shù)深入應(yīng)用----基因工程，蛋白質(zhì)工程，細(xì)胞工程，酶工程在血液制品生產(chǎn)中有了較大發(fā)展和應(yīng)用。4：人體組織器管制藥法律問題和倫理問題----國際上禁止利用人器官和組織來生產(chǎn)藥品。生物化學(xué)制藥專家講座第37頁動物起源藥品利用動物組織器官生產(chǎn)藥品。在我國于1950年代開始生產(chǎn)，當(dāng)初被稱為“臟器制藥”。1980年之后被稱為“生化藥品”。當(dāng)前我國國內(nèi)已經(jīng)能夠生產(chǎn)200各種起源于動物機(jī)體生化藥品動物起源藥品種類和用途動物起源藥品前景和問題生物化學(xué)制藥專家講座第38頁動物起源藥品種類和用途1：動物多肽類藥品

2：動物蛋白質(zhì)類藥品

3：動物酶與輔酶類藥品

4：動物核苷酸類藥品

5：動物糖類藥品

6：動物脂類藥品

7：動物細(xì)胞因子乳汁中分泌人凝血因子IX轉(zhuǎn)基因山羊生物化學(xué)制藥專家講座第39頁1：動物多肽類藥品（1）多肽激素（2）多肽類細(xì)胞因子生物化學(xué)制藥專家講座第40頁（1）多肽激素下丘腦激素----促甲狀腺激素釋放激素（TRH）、生長激素抑制激素（GRIF）、促性腺激素釋放激素（LHRH）。垂體多肽激素----促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、促黑激素（MSH）、脂肪水解激素（LPH）、催產(chǎn)素（OT）、加壓素（AVP）。甲狀腺所分泌激素----甲狀腺素（T4）、甲狀旁腺素（PTH）、降鈣素（CT）。胰腺所分泌激素----胰島素、胰高血糖素、胰解痙多肽。胃腸道激素----胃泌素、膽囊收縮—促胰酶素（CCK--PZ）、腸泌素、腸血管活性肽（VIP）、抑胃肽（GIP）、緩激肽、P物質(zhì)。胸腺所分泌激素----胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子。生物化學(xué)制藥專家講座第41頁（2）多肽類細(xì)胞因子腦氨肽蛇毒胎盤提取物脾水解物肝水解物心臟激素轉(zhuǎn)移因子抗癌肽生物化學(xué)制藥專家講座第42頁2：動物蛋白質(zhì)類藥品（1）蛋白質(zhì)類激素-------生長素（GH）、催乳激素（PRL）、促甲狀腺素（TSH）、促黃體生成素（LH）、促卵泡激素（FSH）。人絨毛膜促性腺激素（HCG）、絕經(jīng)尿促性腺激素（HMG）、血清性促性腺激素（SGH）。胰島素、胰抗脂肝素、松馳素、尿抑胃素。（2）血漿蛋白質(zhì)-------動物血漿蛋白質(zhì)與人體血漿蛋白質(zhì)有差異，動物血漿蛋白質(zhì)制品不能直接應(yīng)用于人體。（3）蛋白質(zhì)類細(xì)胞因子--------（4）粘蛋白-------胃膜素、硫酸糖肽、內(nèi)在因子、血型物質(zhì)A、血型物質(zhì)B。（5）膠原蛋白-------明膠、阿膠、氧化聚合明膠。（6）其它蛋白-------硫酸魚精蛋白、胰蛋白酶抑制劑生物化學(xué)制藥專家講座第43頁3：動物酶與輔酶類藥品（1）促消化酶類-------胰酶、淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶、纖維素酶、木瓜蛋白酶、黑曲霉酶、胃蛋白酶。（2）消炎酶類-------蛋白酶、溶菌酶、菠蘿蛋白酶、a-胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、明膠肽酶、酶RNA酶。（3）治療心血管疾病相關(guān)酶------纖溶酶、尿激酶、蚓激酶、鏈激酶、凝血酶。激肽釋放酶、彈性蛋白酶。（4）抗腫瘤酶-----L-門冬氨酸酶、谷氨酰胺酶、蛋氨酸酶、組氨酸酶、酪氨酸氧化酶。（5）與生物氧化過程電子傳遞相關(guān)治療酶-------細(xì)胞色素C、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶。（6）其它藥用酶----有機(jī)磷解毒酶、青霉素酶。透明質(zhì)酸酶。（7）動物輔酶類藥品-------輔酶Q10、輔酶A。生物化學(xué)制藥專家講座第44頁4：動物核苷酸類藥品（1）核糖核酸（RNA）----用于治療精神遲緩、記憶衰退、動脈硬化性疾呆。靜注治療慢性肝炎、肝硬化、早期肝癌。（2）脫氧核糖核酸（DNA）----含有抗放射性作用，能夠改進(jìn)機(jī)體虛弱疲勞。（3）免疫核糖核酸（iRNA）----可用于治療乙肝、肺癌。（4）轉(zhuǎn)移因子（TF）----治療惡性腫瘤。（5）聚肌胞苷酸（聚肌胞、poly：C）----是干擾素誘導(dǎo)物，含有廣譜抗病毒作用。生物化學(xué)制藥專家講座第45頁（6）核酸-氨基酸混合物---用于氣管炎、神經(jīng)衰弱。（7）輔酶A（CoA）---用于動脈硬化、白細(xì)胞降低、血小板降低、肝病、腎病。（8）脫氧核苷酸鈉---用于放療化療引發(fā)急性白細(xì)胞降低癥。（9）一磷酸腺苷（AMP）---對外周血管含有擴(kuò)張作用，治療靜脈曲張性潰瘍。（10）三磷酸鳥苷（GTP）---用于慢性肝炎、進(jìn)行性肌肉萎縮。（11）輔酶I（NAD）---用于白細(xì)胞降低、冠狀動脈硬化。（12）輔酶II（NADP）---促進(jìn)體內(nèi)物質(zhì)生物氧化。生物化學(xué)制藥專家講座第46頁5：動物糖類藥品動物糖類藥品以粘多糖為主。（1）粘多糖種類（2）粘多糖藥用價值（3）粘多糖制備方法

生物化學(xué)制藥專家講座第47頁（1）粘多糖種類廣義粘多糖包含----（1）粘多糖、（2）粘蛋白、（3）糖蛋白、（4）糖脂。

粘多糖主要分布于動物骨、軟骨、皮、角、血管、腸、滑膜液、腦、角膜、肺、肝、心、尿等等原料之中。生物化學(xué)制藥專家講座第48頁（2）粘多糖藥用價值甲殼質(zhì)（幾丁質(zhì)）----用作人造皮膚、人造血管、手術(shù)線。含有消炎、止酸作用。硫酸軟骨素（CS）----治療關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)痛、腰痛、眼病。含有抗血栓作用，用于治療各種心臟疾病。肝素----抗凝血藥品，治療血栓疾病。透明質(zhì)酸（HA）----用于眼科手術(shù)、燒傷、化裝品生物化學(xué)制藥專家講座第49頁（3）粘多糖制備方法（1）原料處理（2）提?。?）去除非粘多糖（4）脫色（5）脫蛋白（6）純化（7）乙醇分級沉淀（8）季銨鹽絡(luò)合沉淀（9）離子交換柱層析分離（10）分子篩分離（11）親和層析生物化學(xué)制藥專家講座第50頁6：動物脂類藥品動物脂類藥品主要包含----（1）脂肪酸及其衍生物，（2）磷脂類，（3）膽酸類，（4）固醇類，（5）卟啉及其衍生物類。動物脂類藥品主要分布在脂肪組織、肝臟，磷脂類物質(zhì)主要分布在腦、脊髓之中。（1）動物脂類藥品種類和分布（2）動物脂類藥品制備方法生物化學(xué)制藥專家講座第51頁（1）動物脂類藥品種類和分布腦磷脂----分布在腦、酵母之中----用于止血，預(yù)防動脈硬化以及神經(jīng)衰弱。磷脂酰膽堿（卵磷脂）----分布于腦、大豆、卵黃之中----預(yù)防動脈硬化以及神經(jīng)衰弱、肝病。花生四烯酸----分布于動物腎上腺----降血脂，用于合成前列腺素E2。魚肝油脂肪酸鈉----分布在魚肝油中----止血、治療靜脈曲張。前列腺素E1、E2----分布于羊精囊之中----降血壓、中期引產(chǎn)、催產(chǎn)。生物化學(xué)制藥專家講座第52頁原卟啉----分布于動物血紅蛋白之中----治療急、慢性肝炎。血卟啉衍生物----腫瘤放療輔助劑。膽紅素----從膽汁中來----消炎、抗氧化膽酸鈉----從膽汁中來----治療膽酸缺乏癥。膽酸----從膽汁中來----合成人工牛黃原料。豬去氧膽酸--從膽汁中---降膽固醇、治療氣管炎。人工牛黃----配制----消炎、解毒。膽固醇----于腦、脊髓----合成人工牛黃原料。輔酶Q10---分布心肌----治療高血壓、急性肝壞死。生物化學(xué)制藥專家講座第53頁（2）動物脂類藥品制備方法提取法（索氏提取法）----可用于提取腦磷脂、）磷脂酰膽堿（卵磷脂）、脂肪酸。水解法----經(jīng)過水解血紅素，能夠制得原卟啉。生物轉(zhuǎn)化法----花生四烯酸經(jīng)過生物轉(zhuǎn)化，可變成前列腺素E1、E2?；瘜W(xué)合成和半合成法-----不慣用。生物化學(xué)制藥專家講座第54頁7：動物細(xì)胞因子（1）骨髓生長因子（BGF）（2）骨髓衍化生長因子（BDGF）（3）軟骨衍化生長因子（CDGF）（4）軟骨衍化因子（CDF）（5）骨形成蛋白（BMP）（6）細(xì)胞分裂因子（CDF）（7）內(nèi)皮細(xì)胞衍化生長因子（ECDGF）（8）內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（ECGF）生物化學(xué)制藥專家講座第55頁（9）表皮生長因子（EGF）（10）成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）（11）酸性成纖維細(xì)胞生長因子（AFGF）（12）腦成纖維細(xì)胞生長因子（BFGF）（13）胰島素樣生長因子（IGF）（14）神經(jīng)生長因子（NGF）（15）多功效集落刺激因子（Multi-CSF）（16）乳腺刺激因子（MSF）（17）睪丸衍化生長因子生物化學(xué)制藥專家講座第56頁動物起源藥品前景和所要注意問題1：發(fā)展前景2：問題

生物化學(xué)制藥專家講座第57頁1：發(fā)展前景（1）動物起源藥品原料十分豐富，能夠從中制備出人體所需要各種生物活性物質(zhì)。（2）動物起源藥品活性成份深入研究，尤其是動物毒素研究。（3）利用生物技術(shù)+化學(xué)技術(shù)進(jìn)行合成和半合成。（4）當(dāng)代生物技術(shù)在動物起源藥品制造上應(yīng)用。生物化學(xué)制藥專家講座第58頁2：所應(yīng)該注意問題組織相容性問題----是動物起源藥品關(guān)鍵難題，動物起源藥品蛋白質(zhì)注射到人體內(nèi)，會產(chǎn)生抗原反應(yīng)，嚴(yán)重者會危及生命。生物化學(xué)制藥專家講座第59頁植物起源藥品植物起源藥品種類和用途植物起源藥品研究前景

生物化學(xué)制藥專家講座第60頁植物起源藥品種類和用途植物起源藥品是我國中草藥主要起源，經(jīng)過詳細(xì)記載就有5000種。分類1：依據(jù)藥用價值來分類2：依據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)來分類種類1：植物蛋白質(zhì)、多肽、酶類以及藥理作用2：植物糖類生物活性物質(zhì)以及藥理作用3：植物脂類生物活性物質(zhì)以及藥理作用

生物化學(xué)制藥專家講座第61頁1：依據(jù)藥用價值來分（1）抗腫瘤藥品----喜樹堿、秋水仙堿、硫酸長春堿、硫酸長春新堿、靛玉紅。

（2）強(qiáng)心藥----鈴蘭毒苷、去乙酰毛花洋地黃苷、洋地黃毒苷、地高辛。

（3）抗菌消炎藥----魚腥草素、秦皮乙素、黃苓苷、穿心蓮內(nèi)脂，鹽酸小檗堿。

（4）抗凝血藥----雙豆香素。

（5）鎮(zhèn)痛藥----鹽酸嗎啡、顱痛定、延胡索已素、桉油。

（6）作用于神經(jīng)系統(tǒng)藥品----咖啡因、鹽酸可卡因，刺烏頭堿、天麻素。

（7）搞瘧藥品----鹽酯奎寧、青蒿素。

（8）止咳平喘藥品----磷酸可待因、茶堿、艾葉油、牡荊油、蕓香草油，滿山紅油。生物化學(xué)制藥專家講座第62頁2：依據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)來分（1）：糖和糖苷類（2）：苯丙素類----苯丙烯、苯丙酸、香豆素（3）：醌類----輔酶Q10、紫草素。（4）：黃酮類----黃酮醇、花色素、黃苓苷（5）：鞣質(zhì)----奎寧酸、槲皮素（6）：萜類物質(zhì)----青蒿素、齊墩果酸（7）：甾體類物質(zhì)----烏沙苷原、毛地黃毒苷（8）：生物堿----咖啡因、喜樹堿生物化學(xué)制藥專家講座第63頁1：植物蛋白質(zhì)、多肽、酶類以及藥理作用（1）天花粉蛋白----用于引產(chǎn)，能夠水解糖苷鍵。

（2）蓖麻毒蛋白----抗癌。

（3）植物凝集素（PHA）----凝集紅細(xì)胞、白細(xì)胞。

（4）胰蛋白酶抑制劑---抑制胰蛋白酶、治療胰腺炎、燒傷。

（5）相思豆毒蛋白----抗癌。

（6）苦瓜胰蛋白----降血糖。

（7）菠蘿蛋白酶----消炎、水解蛋白質(zhì)、促消化。

（8）木瓜蛋白酶----促消化、消炎。

（9）無花果蛋白酶----驅(qū)蟲劑。

（10）木瓜凝乳蛋白酶----促消腫、消炎。

（11）辣根過氧化物酶（HRP）----診療試劑。

（12）麥芽淀粉酶----助消化。

（13）脲酶----分解尿素。（14）植物SOD酶----抗氧化。（15）辣根過氧化物酶提取生物化學(xué)制藥專家講座第64頁2：植物糖類生物活性物質(zhì)以及藥理作用（1）單糖類----葡萄糖、果糖、核糖、脫氧核糖、木糖、（2）單糖酸類----維生素C。（3）單糖醇類----木糖醇、山梨醇、肌醇、甘露醇。（4）低聚糖類----蔗糖、麥芽糖、棉籽糖。（5）多聚糖類----淀粉、纖維素、人參多糖、黃芪多糖、海藻酸。（6）糖衍生物類----葡萄糖—6—磷酸、果糖—1，6—二磷酸，磷酸肌醇，氨基葡萄糖。生物化學(xué)制藥專家講座第65頁植物糖類藥用成份舉例植酸鈣----是營養(yǎng)劑，含有促進(jìn)生長發(fā)育作用。肌醇----治療肝硬化、血管硬化、降血脂。葡萄糖----大輸液，補(bǔ)充營養(yǎng)。葡萄糖醛酸內(nèi)酯----治療肝炎、肝中毒、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。葡萄糖酸鈣----補(bǔ)鈣劑。甘露醇----抗腦水腫、降顱壓。山梨醇----抗腦水腫、降顱壓。海藻酸----增加血容量，抗休克。人參多糖----增強(qiáng)免疫機(jī)能。生物化學(xué)制藥專家講座第66頁5：植物脂類生物活性物質(zhì)以及藥理作用天然藥品化學(xué)中（1）醌類，（2）黃酮類，（3）萜類，（4）甾體類，（5）苯丙酸類，（6）鞣質(zhì)，等等均屬于植物脂類藥品。（1）脂肪和脂肪酸類----亞油酸、亞麻酸、花生四烯酸等不飽和脂肪酸。（2）磷脂類----大豆磷脂（含卵磷脂）。（3）固醇類----β-谷甾醇，大豆固醇。（4）黃酮類----茶葉中提取茶多酚生物化學(xué)制藥專家講座第67頁植物起源藥品研究前景1：植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

因?yàn)橹参锛?xì)胞體型大、接種量大、培養(yǎng)周期長、易污染雜菌等等缺點(diǎn)，當(dāng)前仍存在著較大困難。尤其是沒有理想培養(yǎng)設(shè)備和裝置。2：植物組織培養(yǎng)技術(shù)

經(jīng)過組織培養(yǎng)生產(chǎn)植物藥有效成份，有利于處理生藥資源斷缺難題，如從紅豆杉中提取紫杉醇，已經(jīng)給紅豆杉這一珍稀樹種帶來了滅頂之災(zāi)。3：天然植物起源藥品分離純化、功效結(jié)構(gòu)測定生物化學(xué)制藥專家講座第68頁微生物起源藥品1：細(xì)菌----抗生素、氨基酸、維生素、酶制劑2：真菌類

（1）冬蟲夏草 （2）靈芝多糖

（3）藻類多糖 （4）香菇多糖生物化學(xué)制藥專家講座第69頁海洋生物技術(shù)海洋生物技術(shù)是指以海洋生物為對象，綜合應(yīng)用基因工程、細(xì)胞操作技術(shù)和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)等伎倆，提取海洋生物中天然藥品因?yàn)楹Ｑ笏幤分刑烊换钚猿煞莺康?、分離提純生產(chǎn)成本較高。所以，人們研究了海洋微生物培養(yǎng)和發(fā)酵技術(shù)，以期提升產(chǎn)量。近10年中，已經(jīng)有5000種新海洋天然藥品被發(fā)覺。生物化學(xué)制藥專家講座第70頁海洋生物起源藥品海洋生物藥品種類和用途

海洋生物藥品研究前景

生物化學(xué)制藥專家講座第71頁海洋生物藥品種類和用途1：海藻類------分為綠藻門、褐藻門、藍(lán)藻門、紅藻門等10個門類。當(dāng)前已經(jīng)生產(chǎn)出褐藻酸鈉、煙酸甘露醇脂，用于抗腫瘤和治療心血管疾病。2：腔腸動物類------從柳珊瑚中提取出前裂腺素A2、萜類藥品用于抗菌。從海葵中已經(jīng)分離出含有抗癌作用Polytoxin。3：軟體動物類-------軟體動物有8萬種，如螺類、蛤類、烏賊。從軟體動物中分離出物質(zhì)有多糖、多肽、毒素、酶、凝聚素等等物質(zhì)，含有抗病毒、抗菌、抗腫瘤、降血壓、止血、平喘等作用。4：節(jié)肢動物類-------從蝦、蟹殼中提取出甲殼素，能夠用作丸片賦形劑、緩釋藥品載體、醫(yī)用膜材料、另外，甲殼素還含有抗血栓功效。生物化學(xué)制藥專家講座第72頁5：棘皮動物類------有6000各種，包含海星、海膽、海參等。海膽毒最少含有溶血作用，海膽中還含有二十碳五烯酸（EPA），用于防治冠心病。海參素含有抗癌作用。6：魚類--------有0各種，用于制造藥品有：魚肝油、魚軟骨素、魚細(xì)胞色素C、卵磷脂、腦磷脂。魚類中抗癌藥品有：（1）鯊魚抗問號蛋白、（2）河豚魚肝油等。7：海洋爬行動物類------主要有蛇毒，蛇毒中含有蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、轉(zhuǎn)氨酶、膽堿脂酶、RNA酶、DNA酶、磷脂酰膽堿酶等等，含有鎮(zhèn)痛作用。8：海洋哺乳動物類-------海洋哺乳動物臟器和腺體已經(jīng)制成了各種藥品，如鯨魚肝臟抗貧血劑、海狗骨骼肌17肽含有擴(kuò)張血管、降低血壓等作用。9：其它海洋動物-------有海綿動物、步驟動物、兩棲動物等等。生物化學(xué)制藥專家講座第73頁含有藥用價值海洋藥品（1）鯊魚抗癌蛋白-----抗Lewis肺癌（2）棘皮動物抗癌肽------抗白血?。?）軟體動物抗癌肽（蛤素）------抑制非病毒性腫瘤（4）海扇抗癌糖蛋白-------抑制肉瘤P180結(jié)節(jié)性腫瘤（5）海兔卵抗癌肽------抑制P180淋巴白血病細(xì)胞（6）沙群?？?------抑制P388淋巴白血病細(xì)胞和K細(xì)胞、B細(xì)胞生長（7）降鈣素-------降低血鈣、血磷、抑制骨鈣流失（8）海蛇毒素-------鎮(zhèn)痛（9）?？舅?------強(qiáng)心作用生物化學(xué)制藥專家講座第74頁（10）海綿抗生肽------抗真菌、抗細(xì)菌（11）軟體動物抗生肽-------抗病毒、抗細(xì)菌（12）抗炎肽-------風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（13）硫酸軟骨素-------降血脂、抗動脈硬化、抗凝血、治療冠心?。?4）刺參酸性粘多糖-------廣譜抗腫瘤、抗凝血（15）甲殼質(zhì)------藥用賦形劑（16）海參苷--------抗腫瘤、抗真菌、抗輻射（17）海星皂苷-------抗腫瘤、抗真菌、抗輻射（18）海綿毒素-------溶血活性生物化學(xué)制藥專家講座第75頁（19）肽類藥品-------含有免疫、抗腫瘤、抗病毒作用（20）鮑魚多糖-------含有抗腫瘤生長作用。（21）紫菜多糖-------含有抗腫瘤、預(yù)防心血管疾病作用。（22）芋螺毒素-------是理想不會成癮麻醉鎮(zhèn)痛劑。（23）由海綿中分離出多環(huán)胍生物堿--------含有抗病毒、抗癌、抗真菌作用。（24）膜海鞘素--------含有抗病毒、抗癌、免疫抑制作用。（25）從紅海海綿中分離AvaroneAvarol--------對艾滋病病毒有抑制作用。（26）從海洋細(xì)菌中分離出大環(huán)內(nèi)酯化合物------含有抗病毒、抗癌、抗菌作用。生物化學(xué)制藥專家講座第76頁海洋生物藥品研究前景1：當(dāng)前已經(jīng)取得進(jìn)展相關(guān)領(lǐng)域2：海洋藥品研究主攻方向生物化學(xué)制藥專家講座第77頁1：當(dāng)前已經(jīng)取得進(jìn)展相關(guān)領(lǐng)域（1）含有抗癌活性海洋藥品----當(dāng)前進(jìn)入臨床有：從群體?？腥√巇idemnin，從截尾海兔中提取dolastatin10，從多室草苔蟲中提取bryostatin1，bryostatin4，從海洋細(xì)菌中提取marinactan，從海綿中提取manoalide。（2）含有抗菌活性海洋藥品----日本從海洋細(xì)菌中提取出廣譜抗菌素----伊他霉素。（3）含有抗心血管疾病活性海洋藥品----從海洋藥品中提取喹啉酮類含有增強(qiáng)心肌收縮力、抗心率失常作用。生物化學(xué)制藥專家講座第78頁（4）含有抗放射性活性海洋藥品----日本已經(jīng)從海洋藻類中提取出SOD。（5）海洋前列腺素----從珊瑚中提取前列腺素。（6）從海洋生物中提取保健品----這類產(chǎn)品有螺旋藻、藍(lán)藻、二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA）。（7）從海洋生物中提取醫(yī)用生物材料----鱟試劑、河豚毒素試劑、甲殼素、珊瑚骨科材料。生物化學(xué)制藥專家講座第79頁2：海洋藥品研究主攻方向（1）海洋生物活性物質(zhì)研究（2）促進(jìn)生物技術(shù)在海洋藥品研究上應(yīng)用（3）開發(fā)海洋中成藥制劑和新劑型（4）開發(fā)海洋生物，生產(chǎn)營養(yǎng)保健品（5）從海洋生物中開發(fā)新醫(yī)用生物材料----如利用甲殼質(zhì)生產(chǎn)創(chuàng)可貼、手術(shù)縫合線。利用海洋生物多糖類產(chǎn)品生產(chǎn)膠囊輔料。利用海洋藻類生產(chǎn)SOD。生物化學(xué)制藥專家講座第80頁二：生化藥品制備技術(shù)（一）：原料選擇、預(yù)處理、保留（二）：提?。ㄈ悍蛛x純化生物化學(xué)制藥專家講座第81頁（一）：原料選擇、預(yù)處理、保留1：原料選擇2：原料預(yù)處理3：原料保留生物化學(xué)制藥專家講座第82頁1：原料選擇（1）有效成份含量高，

（2）原料豐富易得，

（3）雜質(zhì)含量少，

（4）原料成本低。植物原料應(yīng)注意采收時期，以免有效成份積累不足。

動物原料要注意動物年紀(jì)和性別。

微生物原料應(yīng)注意其對數(shù)生長久。

生物化學(xué)制藥專家講座第83頁2：原料預(yù)處理動物原料采集后應(yīng)馬上去除結(jié)締組織、脂肪組織，并就地冷凍。植物原料采集后就地除去不用部分。微生物材料采集后應(yīng)將細(xì)菌細(xì)胞和培養(yǎng)液分開，并進(jìn)行保鮮處理。生物化學(xué)制藥專家講座第84頁3：原料保留方法（1）冷凍法----慣用-40℃進(jìn)行速凍。（2）有機(jī)溶劑脫水法----慣用有機(jī)溶劑是丙酮，因?yàn)樗鼘τ跊]有破壞作用，如用它來保留腦垂體。（3）防腐劑保鮮----如用乙醇、苯酚，該方法適合用于液體原料，如發(fā)酵液、提取液。生物化學(xué)制藥專家講座第85頁（二）：生物藥品提取1：生物組織破碎2：有效成份提取生物化學(xué)制藥專家講座第86頁1：生物組織破碎（1）磨切法----組織搗碎機(jī)、膠體磨、勻漿器、勻質(zhì)機(jī)、球磨機(jī)、乳缽。（2）壓力法----加壓破碎、減壓破碎（3）重復(fù)凍融法----（4）超聲波震蕩破碎法（5）自溶法----（6）酶解法----生物化學(xué)制藥專家講座第87頁2：有效成份提?。?）提取試劑-------水、緩沖溶液、鹽溶液、乙醇、氯仿、丙酮。（2）提取方法-------鹽析、萃取、滲透、過濾。生物化學(xué)制藥專家講座第88頁（三）：生物藥品分離純化方法1：蛋白質(zhì)藥品2：核酸類藥品3：糖類藥品4：脂類藥品5：氨基酸藥品生物化學(xué)制藥專家講座第89頁1：蛋白質(zhì)藥品分離純化方法（1）沉淀法（2）按分子大小分離（3）按分子所帶電荷進(jìn)行分離（4）層析法分離生物化學(xué)制藥專家講座第90頁（1）沉淀法鹽析法有機(jī)溶劑沉淀法等電點(diǎn)沉淀法與靶物質(zhì)特異性結(jié)合沉淀法生物化學(xué)制藥專家講座第91頁（2）按分子大小分離超濾法透析法凝膠層析法超速離心法生物化學(xué)制藥專家講座第92頁（3）按分子所帶電荷進(jìn)行分離離子交換術(shù)層析法電泳法等電點(diǎn)聚焦法生物化學(xué)制藥專家講座第93頁（4）層析法親和層析法----與靶物質(zhì)特異性結(jié)合，再進(jìn)行層析方法。疏水層析法----用于分離非極性藥品。

生物化學(xué)制藥專家講座第94頁2：核酸類藥品分離純化方法（1）提取法生產(chǎn)方法----先得取核酸與蛋白質(zhì)復(fù)合物，再解離核酸與蛋白質(zhì)，然后分離RNA與DNA。生物化學(xué)制藥專家講座第95頁3：糖類藥品分離純化方法（1）提取方法（2）分離方法生物化學(xué)制藥專家講座第96頁（1）提取方法非降解法----主要用于提取動物組織中粘多糖，提取所采取溶劑是水、鹽溶液。降解法----主要用于提取結(jié)合牢靠粘多糖，如從軟骨中提取硫酸軟骨素就是采取堿降解法，提取與蛋白質(zhì)結(jié)合多糖則經(jīng)常采取酶解法。生物化學(xué)制藥專家講座第97頁（2）分離方法沉淀法----乙醇沉淀是最慣用方法，4-5倍量乙醇能使任何組織中粘多糖完全沉淀。離子交換層析法----采取陰離子交換劑，如Dowex-I-X2離子交換樹脂、DEAE-離子交換纖維素等。洗脫液用氯化鈉溶液進(jìn)行梯度洗脫。生物化學(xué)制藥專家講座第98頁4：脂類藥品分離純化方法提取方法----慣用溶劑有氯仿、甲醇。純化方法（1）沉淀法，利用脂質(zhì)在丙酮中溶解度不一樣而將其沉淀。（2）吸附層析法，慣用吸附劑有硅膠、氧化鋁。洗脫經(jīng)常采取逐步增大極性洗脫液來進(jìn)行洗脫，非極性脂肪先流出，極性脂肪后流出。（3）離子交換層析法，如TEAE-纖維素對于分離脂肪酸和膽汁酸尤其有效。生物化學(xué)制藥專家講座第99頁5：氨基酸藥品分離純化方法（1）氨基酸生產(chǎn)方法（2）氨基酸分離方法生物化學(xué)制藥專家講座第100頁（1）氨基酸生產(chǎn)方法蛋白質(zhì)水解法----有酸水解、堿水解、酶水解三種方法，其中以鹽酸水解最為慣用。鹽酸水解優(yōu)點(diǎn)是水解快速、完全、產(chǎn)物全部是L-型氨基酸、鹽酸水解缺點(diǎn)是色氨酸全部被破壞、絲氨酸部份被破壞。堿水解易產(chǎn)生消旋作用，故較少使用。酶水解經(jīng)常不夠完全徹底。生物化學(xué)制藥專家講座第101頁（2）氨基酸分離方法沉淀法----依據(jù)不一樣氨基酸溶解度差異進(jìn)行沉淀分離。吸附法----利用活性炭對其進(jìn)行吸附。離子交換法----慣用離子交換劑為強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂，洗脫方法主要采取PH梯度洗脫。生物化學(xué)制藥專家講座第102頁生物化學(xué)制藥實(shí)例一：人體起源生物藥品

二：動物起源生物藥品三：植物起源生物藥品

四：海洋生物起源生物藥品生物化學(xué)制藥專家講座第103頁一、人體起源藥品制備實(shí)例（一）人血白蛋白（Alb）制劑制備（二）尿激酶（URK）制備（三）絨毛膜促性腺激素（HCG）制備（四）白細(xì)胞介素-2（IL-2）制備生物化學(xué)制藥專家講座第104頁（一）人血白蛋白（Alb）制劑制備白蛋白又稱清蛋白，約占血漿總蛋白65%。同種白蛋白制品無抗原性。白蛋白為單鏈分子，由548個氨基酸組成。白蛋白制備方法有二種：

（1）從健康人體血漿中分離制取

（2）從健康產(chǎn)婦胎盤中分離制取白蛋白制備工藝分為6步（1）絡(luò)合 （2）解離 （3）濃縮（4）熱處理 （5）除菌 （6）干燥。生物化學(xué)制藥專家講座第105頁1、工藝人血漿在攪拌下用NaHCO3調(diào)整PH=6.8，加入等體積2%利凡諾溶液。

↓

充分?jǐn)嚢韬?，靜置2-4小時，分離出上清液+絡(luò)合物沉淀。

↓

在絡(luò)合物沉淀中加入滅菌蒸餾水，用0.5mol/LHCl調(diào)整PH值至弱酸性，加入NaCl量為0.15%--0.2%，充分?jǐn)嚢琛?/p>

↓

65℃恒溫加熱1小時，離心除去雜蛋白，分離出上清液。

↓

上清液進(jìn)行超濾濃縮。

↓

60℃恒溫?zé)崽幚?0小時，滅活病毒。

↓

除菌過濾

↓

白蛋白溶液，進(jìn)行冷凍干燥

↓

白蛋白產(chǎn)品生物化學(xué)制藥專家講座第106頁2、人血白蛋白產(chǎn)品檢驗(yàn)方法（1）外觀為白色疏松物體。

（2）白蛋白含量>95%以上。

（3）水分<1%

（4）水溶后PH=6.6--7.2

（5）硫酸銨殘留量<0.01%

（6）細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)合格

（7）熱原檢測合格

生物化學(xué)制藥專家講座第107頁（二）尿激酶（URK）制備尿激酶有各種分子形式，主要有分子量為31.3KD、54.7KD二種。屬絲氨酸蛋白酶。底物：血纖溶酶原，作用其Arg-Val鍵，使纖溶酶原轉(zhuǎn)為纖溶酶。尿激酶用于治療各種血栓和血栓性梗塞。生物化學(xué)制藥專家講座第108頁1、工藝尿激酶生產(chǎn)工藝分為10步：（1）沉淀 （2）酸化（3）吸附 （4）洗滌（5）洗脫 （6）除去熱原和色素（7）濃縮 （8）洗脫（9）透析 （10）凍干生物化學(xué)制藥專家講座第109頁⑵工藝路線生物化學(xué)制藥專家講座第110頁工藝流程框圖所搜集到男性應(yīng)該在8小時之間進(jìn)行處理搜集流出活性部分，用1mol/LHac調(diào)整PH=4.2，用蒸餾水調(diào)整電導(dǎo)率至16--17M/歐姆。裝入羧甲基纖維素柱（CM-C），用10倍體積、PH=4.2Hac-NaAc緩沖液洗滌柱床，促進(jìn)吸附。酸化以后尿加入1%硅藻土，在5℃下攪拌1小時。在溫度10℃以下操作，尿液原始PH=8.5透析液進(jìn)行冷凍干燥，得尿激酶產(chǎn)品。上述搜集液用飽和NaH2PO4調(diào)整PH=8.0，加入NaCl，調(diào)整電導(dǎo)率為22M/歐姆。經(jīng)過DEAE-Sephadex-A-50層析柱，除去熱原和色素。用0.1%氨水+0.1mol/LNaCl（PH=11.5-11.8）洗脫液進(jìn)行洗脫。用0.02%氨水+0.1mol/LNaCl洗脫液進(jìn)行洗脫，當(dāng)流出洗脫液從澄清開始變混濁時，加以搜集。將硅藻土吸附物用5℃冷水洗滌，裝入層析柱。用鹽酸調(diào)整尿液PH=6.5以下，電導(dǎo)率為20—30M/歐姆，細(xì)菌數(shù)量在1000個/毫升以下搜集洗脫液中活性成份（雜質(zhì)被吸附在層析柱中），在4℃蒸餾水中進(jìn)行透析。生物化學(xué)制藥專家講座第111頁2、尿激酶產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（1）外觀為白色凍干粉末。（2）酶活力≥15000IU/mg蛋白質(zhì)。生物化學(xué)制藥專家講座第112頁（三）絨毛膜促性腺激素（HCG）制備絨毛膜促性腺激素是一個糖蛋白，由α、β兩個亞基組成。絨毛膜促性腺激素由胎盤滋養(yǎng)層合體細(xì)胞分泌，婦女妊娠45—70天，尿中HCG含量達(dá)30000-50000IU/24小時。絨毛膜促性腺激素主要用于治療女性不育癥、因?yàn)辄S體功效不全引發(fā)子宮出血、習(xí)慣性流產(chǎn)。生物化學(xué)制藥專家講座第113頁1、工藝絨毛膜促性腺激素生產(chǎn)工藝包含12步：（1）粗制 （2）提?。?）透析 （4）吸附（5）洗滌 （6）洗脫（7）干燥 （8）精制溶解（9）精制透析 （10）精制吸附（11）精制解吸 （12）精制干燥生物化學(xué)制藥專家講座第114頁孕婦尿，用HCl調(diào)整PH=4-5，加入苯甲酸-乙醇飽和液（孕婦尿：苯甲酸乙醇飽和液：乙醇=1：0.075：5），攪拌1小時，靜置2-3小時。上清液1+上清液2合并，在5℃以下，用蒸餾水進(jìn)行透析。取透析內(nèi)液進(jìn)行離子交換層析。先將CM-Sepharose柱用0.01mol/L醋酸鹽緩沖液進(jìn)行平衡，將樣品加到層析柱上。HCG粗品中加入10倍量4℃、0.067mol/L、PH=4.8醋酸鹽緩沖液，攪拌提取4小時，離心，取上清液1。離心后沉淀物再用10倍量4℃、0.067mol/L、PH=4.8醋酸鹽緩沖液提取，取上清液2。過濾，棄濾液，得沉淀吸附物。攪拌下加入95%乙醇，直到苯甲酸全部溶解為止，即有絮狀沉淀物產(chǎn)生。靜置過夜，離心，沉淀物用95%乙醇和丙酮洗滌，干燥，得HCG粗品。先用0.01mol/L、PH=4.8醋酸鹽緩沖液洗出洗脫峰-1再用0.01mol/L、PH=5.9磷酸鹽緩沖液沖出洗脫峰-2再用0.2mol/L、PH=8.5醋酸鹽緩沖液沖出洗脫峰-3從洗脫峰-3上得到就是HCG。-30℃以下冷凍干燥，得HCG精品HCG精品在10℃以下蒸餾水中溶解，溶解液用0.5mol/L、PH=6.8磷酸鹽緩沖液進(jìn)行透析。透析內(nèi)液進(jìn)行羥基磷灰石柱層析。步驟：（1）安裝羥基磷灰石柱層析柱。

（2）用0.5mol/L、PH=6.8磷酸鹽緩沖液平衡。

（3）樣品上柱先用0.5mol/L、PH=6.8磷酸鹽緩沖液洗脫，得峰-1再用1.0mol/L、PH=6.8磷酸鹽緩沖液洗脫，得峰-2從洗脫峰-2上得到就是HCG純品。-30℃以下冷凍干燥，得HCG產(chǎn)品。生物化學(xué)制藥專家講座第115頁（四）白細(xì)胞介素-2（IL-2）制備白細(xì)胞介素-2是由活化淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生，含有133個氨基酸糖蛋白。生物化學(xué)制藥專家講座第116頁1、工藝白細(xì)胞介素-2生產(chǎn)工藝分為10步：（1）誘生 （2）病毒滅活（3）硫酸銨分級 （4）硫酸銨沉淀（5）除鹽 （6）親和層析（7）洗滌 （8）解吸（9）凝膠層析 （10）洗脫生物化學(xué)制藥專家講座第117頁工藝流程圖示取上清液，加入飽和硫酸銨溶液至0.35飽和度，4℃靜置24小時，離心，棄去沉淀。用雞瘟病毒和絲裂原培養(yǎng)液聯(lián)合刺激人外周血白細(xì)胞，37℃，CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，形成誘生白細(xì)胞培養(yǎng)液。得到白細(xì)胞介素-2（IL-2）組分透析內(nèi)液裝入Sepharose-4B層析柱，用200ml、PH=6.5平衡柱緩沖液洗去不吸附蛋白質(zhì)。用含有0.4mol/LNaCl、PH=6.5磷酸鈉緩沖液（PBS）洗滌親和柱。用含有1.0mol/LNaCl、PH=6.5磷酸鈉緩沖液（PBS）進(jìn)行解析。將沉淀物溶解于10mol/L、PH=6.5磷酸鈉緩沖液（PBS），緩沖液含2%（g/ml）正丁醇+0.15mol/LNaCl。然后裝入透析袋中，用10mol/L、PH=6.5磷酸鈉緩沖液透析24小時，期間更換5次透析外液取上清液，補(bǔ)充加入飽和硫酸銨溶液至0.85飽和度4℃靜置24小時，離心，搜集沉淀。進(jìn)行病毒滅活和固-液分離：

（1）用6mol/LHCl溶液調(diào)整PH=2.0-2.5。

（2）用6mol/LNaOH溶液調(diào)整PH=7.2-7.4。

（3）離心除去變性沉淀雜蛋白。對組分進(jìn)行超濾濃縮，裝入到UltrogelACA44層析柱進(jìn)行凝膠層析，要求PH=7.6。用0.2mol/LTris-HCl+0.5mol/L甘氨酸+0.1%聚乙二醇（PEG、Mr=6000）+2%正丁醇所組成洗脫劑進(jìn)行洗脫。得白細(xì)胞介素-2（IL-2）純品。生物化學(xué)制藥專家講座第118頁二、動物起源藥品制備實(shí)例（一）胰島素制備（二）超氧化物歧化酶（SOD）制備（三）核糖核酸（RNA）制備（四）透明質(zhì)酸制備（五）肝素制備（六）冠心舒制備（七）硫酸軟骨素制備生物化學(xué)制藥專家講座第119頁（一）胰島素制備胰島素由二條鏈組成，A鏈21個氨基酸、B鏈30個氨基酸。胰島素是全部蛋白質(zhì)中研究得最清楚一個蛋白。生物化學(xué)制藥專家講座第120頁1、工藝胰島素生產(chǎn)工藝分為10步：（1）提取 （2）堿化（3）酸化 （4）濃縮（5）去脂 （6）鹽析（7）除去酸性蛋白 （8）鋅沉淀（9）結(jié)晶除去堿性蛋白 （10）洗滌（11）干燥生物化學(xué)制藥專家講座第121頁工藝流程圖示取上清液進(jìn)行鋅沉淀上清液用氨水調(diào)整PH=6.2-6.4加入3.6%醋酸鋅溶液，加入量為溶液量20%再用氨水調(diào)整PH=6.04℃下，放置過夜搜集沉淀，用冷丙酮洗滌洗滌后沉淀物進(jìn)行干燥，得胰島素粗品。鹽析物除酸性蛋白操作鹽析物加入7倍量蒸餾水進(jìn)行溶解再加入3倍量冷丙酮，用氨水調(diào)整PH=4.2-4.3補(bǔ)加丙酮。使得丙酮：水=3：7攪拌后過夜，離心，除去酸性蛋白質(zhì)沉淀濃縮液快速升溫，然后快速降溫，除去脂肪。去脂液用NaCl溶液進(jìn)行鹽析，鹽析外液PH控制在PH=2.0-2.5之間。提取液用PH=8.0-8.4氨水堿化4小時，除去沉淀。堿化液用PH=3.6-3.8硫酸，在5℃時酸化4小時，除去沉淀。酸化液，在30℃下進(jìn)行減壓濃縮至比重為1.04-1.06。豬胰臟絞成碎末，加入2.3-2.6倍86%-88%乙醇+5%草酸，10℃-15℃之間提取3小時。胰島素粗品除堿性蛋白質(zhì)，每克粗品加入2%檸檬酸溶液50ml+6.5%醋酸鋅溶液2ml+丙酮16ml然后再用冰水稀釋至100ml，使樣品充分溶解。冷卻至5℃以下，用氨水調(diào)整PH=8.0，過濾，除去堿性蛋白質(zhì)沉淀。濾液進(jìn)行結(jié)晶操作濾液用10%檸檬酸溶液調(diào)整PH=6.0補(bǔ)加丙酮，使得溶液中丙酮含量到達(dá)16%慢速攪拌3-5小時，使結(jié)晶析出再在5℃左右放置3—4天，使結(jié)晶完全析出搜集結(jié)晶，用丙酮、乙醚重復(fù)脫水，真空干燥，得結(jié)晶胰島素純品。生物化學(xué)制藥專家講座第122頁（二）超氧化物歧化酶（SOD）制備超氧化物歧化酶存在于動物、植物、微生物之中，有Gu-Zn-SOD，Mn-SOD，F(xiàn)e-SOD等等類別，當(dāng)前，美國、德國、澳大利亞等國都有產(chǎn)品生產(chǎn)。超氧化物歧化酶在抗衰老、抗輻射、消炎方面含有顯著療效，主要用于炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、放射治療之后炎癥。生物化學(xué)制藥專家講座第123頁1、工藝超氧化物歧化酶生產(chǎn)工藝分為12步：（1）搜集 （2）浮洗（3）溶血 （4）去血紅蛋白（5）沉淀 （6）熱處理（7）沉淀 （8）透析（9）層析 （10）超濾（11）濃縮 （12）干燥生物化學(xué)制藥專家講座第124頁工藝流程圖示超濾濃縮，冷凍干燥，得超氧化物歧化酶（SOD）純品透析液進(jìn)行層析操作（1）采取DEAE-Sephadex-A50層析柱，（2）層析柱先用2.5mmol/L、PH=7.6磷酸緩沖液進(jìn)行平衡，（3）樣品上柱，用緩沖液進(jìn)行吸附，（4）用2.5-5.0mmol/L、PH=7.6磷酸鉀緩沖液進(jìn)行梯度洗脫，（5）搜集SOD活力洗脫峰。上清液放入透析袋中，在0℃條件下透析6-8小時。沉淀物加入適量去離子水進(jìn)行溶解，然后離心，除去水不溶性蛋白，搜集上清液在0℃條件下，澄清液中加入適量丙酮，使其產(chǎn)生大量絮狀沉淀，離心除去上清液，搜集沉淀物。上清液于55℃-65℃熱處理10-15分鐘，然后離心，除去熱變性蛋白，搜集黃綠色澄清液。沉淀物加入適量去離子水進(jìn)行溶解，然后離心，除去水不溶性蛋白，搜集上清液。在0℃條件下，上清液中加入1.2-1.5倍體積丙酮，產(chǎn)生絮狀沉淀，離心除去上清液，搜集沉淀物。加入0.25倍體積95%乙醇+0.15倍體積氯仿，攪拌15分鐘，離心除去血紅蛋白沉淀，搜集上清液。潔凈紅細(xì)胞在5℃左右，加入去離子水，攪拌30分鐘。進(jìn)行溶血。新鮮豬血離心去除血漿紅細(xì)胞用0.9%NaCl溶液清洗3次生物化學(xué)制藥專家講座第125頁2、超氧化物歧化酶（SOD）電泳判定方法0.5%瓊脂糖凝膠平板電泳法（或者采取聚丙烯酰胺凝膠電泳法）：（1）緩沖液為PH=8.4Tris-Gly，

（2）電壓梯度22V/cm、

（3）電流3MA/cm、

（4）電泳時間35分鐘、

（5）染色液用0.5%氨基黑10B、

（6）7%Hac進(jìn)行褪色處理。生物化學(xué)制藥專家講座第126頁（三）核糖核酸（RNA）制備采取動物肝臟生產(chǎn)RNA，含有其它生物起源RNA所不具備藥品功效，缺點(diǎn)是肝臟組織中成份復(fù)雜，所以RNA提純難度相當(dāng)大。生物化學(xué)制藥專家講座第127頁1、工藝用動物肝臟生產(chǎn)RNA分為10步：（1）勻漿制備 （2）提?。?）除去雜蛋白 （4）沉淀（5）除去糖原 （6）精制（7）洗滌 （8）溶解（9）分裝 （10）凍干生物化學(xué)制藥專家講座第128頁在0℃條件下，攪拌加入等體積0.2mol/L醋酸鈉溶液，再加入1/4體積1%十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）。0℃條件下放置30分鐘，離心得沉淀物。沉淀物除糖原操作（1）沉淀物溶解在含0.001mol/LEDTA+0.01mol/L醋酸鈉溶液中，加入等體積2.5mol/LK2HPO4，（2）不停攪拌下再加入等體積乙二醇甲醚，（3）在0℃條件下，放置30分鐘，離心，得上清液。離心清液除蛋白質(zhì)操作（1）離心清液中加入等量氯仿，重復(fù)振蕩2—3次，直到中間界面無顯著蛋白質(zhì)層為止。

（2）向清液中加入1/10體積20%醋酸鉀、再加入2倍體積-20℃乙醇，（3）在0℃條件下，放置1小時，離心，得白色沉淀物。離心清液進(jìn)行提取---離心清液中，加入等體積0.2mol/L三乙醇胺，1%十二烷基磺酸鈉（SDS）0.002mol/L乙二胺四乙酸二鈉（EDTA、PH=9.0），攪拌均勻。再加入等體積90%苯酚（苯酚中含0.2%8-羥基喹啉）、再加入等體積氯仿，室溫振蕩30分鐘，3500r/min離心20分鐘，除去沉淀物。健康豬、牛肝臟用生理鹽水洗潔凈，切成小塊，加入1-2倍量0.1mol/LNaCl-0.05mol/L檸檬酸溶液，再加入0.001%聚乙烯硫酸脂（PVS）和0.1%、PH=7.0Triton溶液。用組織搗碎機(jī)搗成勻漿，3500r/min，然后離心20分鐘，除去沉淀物。沉淀物進(jìn)行重復(fù)洗滌操作（1）沉淀物用0.1mol/L醋酸鈉溶液（內(nèi)含0.001mol/LEDTA）洗滌。（2）再用70%乙醇溶液洗滌（3）重復(fù)3-5次洗滌，直到?jīng)]有泡沫。沉淀物進(jìn)行過濾式除菌操作---沉淀物用（0.001mol/LEDTA+0.14mol/L醋酸鈉溶液）溶解，

過濾式除菌操作。得無菌RNA溶液。灌裝，凍干，得無菌RNA純品。生物化學(xué)制藥專家講座第129頁（四）、透明質(zhì)酸（HA）制備生物化學(xué)制藥專家講座第130頁以雄雞冠為原料HA生產(chǎn)工藝工藝路線生物化學(xué)制藥專家講座第131頁工藝過程1．提取凍雞冠解凍后，用絞肉機(jī)絞碎，加適量水用膠體磨磨成糊狀，按每1kg雞冠加水8L，加氯化鈉80g，攪拌加熱至90℃，保溫10min，冷卻至50℃，用1mol/L氫氧化鈉液調(diào)pH8.5~9.0,加入適量胰酶,45~50℃保溫酶解5~7h，酶解過程中維持pH8.5~9.0。2．過濾將酶解提取液用濾布加硅藻土加壓過濾，得澄清濾液。3.乙醇沉淀和粗品干燥取濾液,調(diào)pH6.0~6.5,將濾液加到3倍體積95%乙醇中,重復(fù)傾倒3次,待纖維狀沉淀充分上浮后,取出沉淀,用適量乙醇脫水3~5次,放入有五氧化二磷真空干燥器內(nèi)干燥,得透明質(zhì)酸中間品。4．氯仿處理將透明質(zhì)酸中間品溶于0.1mol/L氯化鈉溶液中,溶解濃度為0.3%,溶解過程中加少許氯仿防腐。溶解后，調(diào)pH4.5~5.0,加入等體積氯仿攪拌處理2次,靜置分出水相。生物化學(xué)制藥專家講座第132頁5．酶解將水相用稀氫氧化鈉溶液調(diào)pH7.5,加入適量鏈霉蛋白酶,37℃酶解24h。6．絡(luò)合沉淀酶解結(jié)束后，向酶解液中加入同體積1%氯化十六烷基吡啶（CPC）溶液，靜置，搜集HA-CPC絡(luò)合沉淀。7．解離將HA-CPC絡(luò)合沉淀加入0.4mol/L氯化鈉溶液中,攪拌解離5~10h。8．過濾解離液先用硅藻土過濾至清,再用0.2μm微孔濾膜精濾。9．純沉淀、真空干燥將濾液加至3倍體積95%乙醇中，重復(fù)傾倒3次，取出纖維狀HA沉淀，脫水，五氧化二磷真空干燥，得HA精品。生物化學(xué)制藥專家講座第133頁工藝說明與討論1．對原料預(yù)處理，雞冠應(yīng)洗凈后冷凍儲備。也可用丙酮脫水處理或儲存，這么可除去大部分脂肪等雜質(zhì)，以利于后面分離純化，但成本加大。2．雞冠絞碎后用膠體磨處理時，注意不要磨得太細(xì)，以降低機(jī)械剪切力對透明質(zhì)酸降解。磨成糊狀后，可先用水提取，過濾除去雞冠殘?jiān)锰崛∫?，然后進(jìn)行酶解除蛋白質(zhì)；也可將水提取和蛋白酶水解同時進(jìn)行。后者提取效率高，幾乎到達(dá)完全提取，但提取液中雜質(zhì)含量也較高。提取時，可在水中加入1%氯化鈉。加熱至90℃可對原料有一定滅菌作用，并使蛋白質(zhì)熱變性，易被蛋白酶水解。所用蛋白水解酶為胰酶、木瓜蛋白酶、鏈霉蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶等，不可用胃蛋白酶，因胃蛋白酶最適pH值太低，易造成透明質(zhì)酸酸水解。公雞冠中透明質(zhì)酸以與蛋白質(zhì)結(jié)合狀態(tài)存在，酶解另一主要作用是切斷透明質(zhì)酸與蛋白質(zhì)分子結(jié)合。提取和酶解時，應(yīng)注意防腐。3.透明質(zhì)酸提取液粘度較大，過濾速度較慢，可采取先粗濾后精濾，并加紙漿、硅藻土或活性炭助濾。生物化學(xué)制藥專家講座第134頁4．醇沉淀是分離提純透明質(zhì)酸、肝素、硫酸軟骨素等粘多糖最慣用方法之一，在制備過程中，可屢次重復(fù)使用，類似于重結(jié)晶作用，每次醇沉淀操作，都使透明質(zhì)酸純度有所提升。不一樣最終濃度乙醇沉淀操作還可對不一樣Ｍr透明質(zhì)酸進(jìn)行分級分離，在較低乙醇濃度下，低Ｍr透明質(zhì)酸不易被沉淀出來，Ｍr越高，越輕易被沉淀。在從水溶液中用甲醇或乙醇沉淀透明質(zhì)酸或其它粘多糖時，必須有鹽存在，普通為1%左右氯化鈉。沉淀形態(tài)有纖維狀和無定型粉末狀兩種形態(tài),纖維狀透明質(zhì)酸輕易制備,形態(tài)疏松,易于脫水和真空干燥,缺點(diǎn)是使用時，溶解速度慢，若在常溫下溶解成1%水溶液，需要3~7d。制備無定型粉末狀沉淀，需控制料液鹽濃度、料液和乙醇混合速度及攪拌速度等很多原因，工藝較復(fù)雜，但粉末狀透明質(zhì)酸溶解速度快，使用方便。5．第一次乙醇沉淀、脫水、真空干燥所得透明質(zhì)酸產(chǎn)品，可作為化裝品用保濕劑。生物化學(xué)制藥專家講座第135頁6．上述產(chǎn)品透明質(zhì)酸進(jìn)行深入精制時，能夠使用干燥產(chǎn)品，也可使用乙醇沉淀后未干燥產(chǎn)品，這么能夠縮短生產(chǎn)周期。7．氯仿可使蛋白變性沉淀，利用此作用可除去一部分蛋白質(zhì)雜質(zhì)。氯仿處理另一個主要作用，是除去致炎物質(zhì)。如細(xì)菌內(nèi)毒素是一個脂多糖（lipopolysaccharide），其分子兼具脂溶性和水溶性，在進(jìn)行氯仿處理時，聚集在氯仿和水界面，利用這一性質(zhì)可除去細(xì)菌內(nèi)毒素。另外，加緊攪拌速度，可提升氯仿在水中分散度，極大地?cái)U(kuò)大氯仿和水界面面積，提升去除細(xì)菌內(nèi)毒素等致炎物質(zhì)效率?？芍貜?fù)屢次進(jìn)行氯仿處理。8.在精制過程中，再一次使用蛋白水解酶進(jìn)行酶解除蛋白質(zhì)時。應(yīng)選取活性較高酶，因?yàn)槊副旧硎且粋€蛋白質(zhì)，在確保酶總活性單位前提下，酶總重量越少越好，這么可降低產(chǎn)品中蛋白質(zhì)雜質(zhì)生物化學(xué)制藥專家講座第136頁9．CPC絡(luò)合沉淀與解離步驟是分離提純酸性粘多糖（透明質(zhì)酸、肝素、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素等）慣用方法之一，特點(diǎn)是純化效率高、回收率高，能夠從很低濃度溶液中將透明質(zhì)酸或其它酸性粘多糖沉淀出來。原理是，CPC為季銨鹽，在水溶液中帶正電荷；透明質(zhì)酸或其它酸性粘多糖，在水溶液中帶負(fù)電荷；在低鹽濃度下，透明質(zhì)酸與CPC絡(luò)合沉淀，在高鹽濃度下，HA-CPC絡(luò)合物解離溶解。利用這一性質(zhì)，可除去不能與CPC絡(luò)合并沉淀雜質(zhì)。透明質(zhì)酸與其它酸性粘多糖聚陰離子電荷密度不一樣，與CPC絡(luò)合生成沉淀時鹽濃度能夠不一樣，絡(luò)合沉淀物解離所需最低鹽濃度也不一樣。使用CPC絡(luò)合沉淀法，可實(shí)現(xiàn)透明質(zhì)酸與肝素、硫酸軟骨素等酸性粘多糖分離。此原理與離子交換法有類似之處。除CPC外，也可使用溴化十六烷基吡啶（CPB），十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）等其它長鏈季銨鹽。生物化學(xué)制藥專家講座第137頁10．透明質(zhì)酸在干燥之前要充分脫水，不然有機(jī)溶劑揮發(fā)后，殘余水分過多，會造成被干燥產(chǎn)品粘結(jié)，不易于干燥，干燥時間延長，干燥后產(chǎn)品變硬、變黃。脫水所用溶劑為95%乙醇、無水乙醇、丙酮和甲醇，丙酮沸點(diǎn)低，揮發(fā)性高，用丙酮脫水易于干燥，但干燥后產(chǎn)品帶有特殊氣味。干燥產(chǎn)品量較少時，可采取靜止?fàn)顟B(tài)下，加五氧化二磷進(jìn)行常溫真空干燥；產(chǎn)品量較多時，可采取動態(tài)真空干燥，溫度控制在50~65℃，不用五氧化二磷。生物化學(xué)制藥專家講座第138頁以人臍帶為原料HA生產(chǎn)工藝工藝路線生物化學(xué)制藥專家講座第139頁工藝過程1．提取丙酮脫水臍帶在提取前應(yīng)通風(fēng)揮發(fā)干丙酮，剪碎，加入蒸餾水中浸泡24h，用高速組織搗碎機(jī)打成細(xì)小碎塊。用蒸餾水重復(fù)提取4次，第一次加水量為脫水臍帶10倍，之后三次適量遞減。合并提取液過濾得濾液。2．氯仿處理濾液中加入10%量氯化鈉，攪拌使溶解。用稀鹽酸調(diào)pH5.0,加入等體積氯仿攪拌處理，靜置，待分層后分出水相。一樣再加氯仿處理一次，分出水相。3.酶解用稀氫氧化鈉調(diào)pH7.5,按水相體積加入0.4%量鏈霉蛋白酶,置37℃保溫酶解24h。4．氯仿處理再用氯仿處理2~3次，分出水相。5.乙醇沉淀加入3倍體積95%乙醇沉淀出透明質(zhì)酸。取出沉淀，重新溶解于0.1mol/L氯化鈉溶液中,再次用3倍體積95%乙醇沉淀。6.脫水干燥分別用95%乙醇、丙酮脫水，五氧化二磷真空干燥得透明質(zhì)酸精品。生物化學(xué)制藥專家講座第140頁工藝說明與討論1．對原料預(yù)處理，新生兒臍帶剪下后，應(yīng)盡可能擠出里面血管中存留血液，再放入丙酮中脫水保留。若在提取前發(fā)覺脫水臍帶血管中殘余較多血凝快，應(yīng)將血管剝離，以降低提取和純化過程中血色素污染。不然，產(chǎn)品帶有顏色。2．本工藝盡可能采取溫和條件，防止可能使透明質(zhì)酸大分子降解處理，如加熱、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等。3.試驗(yàn)發(fā)覺，在高鹽濃度下，有機(jī)溶劑可使大部分蛋白質(zhì)變性，或被鹽析沉淀出，或在乙醇沉淀后不再溶于水，這么可使提取液得到顯著純化。4.本工藝未使用氯化十六烷基吡啶（CPC）絡(luò)合沉淀法進(jìn)行純化，所得產(chǎn)品純度較低，可能混有其它多糖，蛋白質(zhì)雜質(zhì)含量也較高(0.6%~0.8%)，但因?yàn)樗迷蠟槿四殠?，所得透明質(zhì)酸精品作為眼科手術(shù)用粘彈輔助劑時,引發(fā)抗原反應(yīng)可能性較小生物化學(xué)制藥專家講座第141頁以動物眼玻璃體為原料HA生產(chǎn)工藝工藝路線生物化學(xué)制藥專家講座第142頁工藝過程1．提取將冷凍牛、豬或羊眼球解凍，剝出玻璃體，融化后離心，分出上清，加入1.5倍體積丙酮沉淀。8h后離心，所得沉淀加入到1mol/L氯化鈉溶液中，攪拌提取4h，離心。2．除蛋白質(zhì)上清液在低溫下加入冷5%三氯乙酸，攪勻，馬上離心分出上清液，用5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至中性。3.粗品沉淀將中性上清液倒入2倍體積95%乙醇中，分出沉淀。4．溶解、吸附除雜質(zhì)將沉淀溶于0.1mol/L氯化鈉溶液中，加入處理好漂白土攪拌吸附2h，離心搜集上清液。5.絡(luò)合沉淀向上清夜內(nèi)加入等體積1%CPB溶液，得HA-CPB沉淀。放置12h后離心，搜集沉淀。6.解離沉淀洗滌后于0.4mol/L氯化鈉溶液中解離4h，抽濾7.沉淀、干燥：將濾液倒入3倍體積95%乙醇中，分出沉淀。沉淀經(jīng)乙醇、丙酮脫水，放于有五氧化二磷真空干燥器內(nèi)干燥，得玻璃酸鈉精品。生物化學(xué)制藥專家講座第143頁工藝說明與討論1．以動物眼玻璃體為原料制得透明質(zhì)酸，其質(zhì)量較以雄雞冠和人臍帶為原料者差，相對分子質(zhì)量Mr較小，普通不適于作注射劑使用。2．吸附除雜質(zhì)步驟，尚可選取類似吸附劑。天然礦物質(zhì)吸附劑常