臨床檢驗方法學性能驗證SOP文件

臨床檢驗方法學性能驗證SOP文件目前，臨床實驗室中所使用的檢驗方法，多為常規(guī)分析方法，一般使用商品試劑，基本上可以滿足臨床檢驗的要求。由于作為常規(guī)分析方法的商品試劑種類繁多，其檢驗結果的質(zhì)量也不相同，因此，臨床實驗室在建立新的檢驗方法時，應對該方法的基本性能進行評價，以掌握方法的特征，判斷其能否滿足使用要求。在選擇方法并對其進行評價時，可主要考慮以下幾個方面：檢驗結果的可溯源性檢驗結果的準確性，是臨床醫(yī)生對疾病進行診斷和治療的重要依據(jù)。在臨床實驗室中如何確保檢驗結果的準確，是每一個檢驗人員必須關心的問題。通常，在檢驗過程中使用可溯源性校準品是保證檢驗結果準確性的前提，而參加室間質(zhì)評價活動，可以發(fā)現(xiàn)實驗室結果準確性的偏倚。檢驗方法學分類包括：決定性方法(definitivemethod)：經(jīng)詳盡研究尚未發(fā)現(xiàn)不準確度或者不確定性原因的方法；參考方法(referencemethod)：經(jīng)詳盡研究證實其不準確度與不精密度可以忽略的方法；常規(guī)方法(routinemethod)：可滿足臨床或者其他目的需要的日常使用的方法。標準物質(zhì)又稱參考物質(zhì)(referencematerial),是一類充分均勻，并具有一個(或者多個)確定的特性值的材料或者物質(zhì)，用以校準儀器設備、評價測量方法，或者給其它物質(zhì)賦值。標準物質(zhì)的定值結果普通表示為：標準值土總不確定度?！皹藴饰镔|(zhì)證書“是介紹標準物質(zhì)的技術文件，是研制單位向用戶提出的質(zhì)量保證書和使用說明。附有證書的標準物質(zhì)稱為有證標準物質(zhì)(certifiedreferencematerial,CRM),其特性值由建立了溯源性的程序確定，使可溯源至準確復現(xiàn)的表示該特性值的計量單位，且每一個標準值都附有給定置信水平的不確定度。一級標準物質(zhì)(primaryreferencematerial)：穩(wěn)定、均一，采用高度準確、可靠的若干方法定值，可用于校準決定性方法及為二級標準物質(zhì)定值。在我國，一級標準物質(zhì)是測量準確度達到國內(nèi)最高水平的有證標準物質(zhì)，由國家技術監(jiān)督局批準、頒布并授權生產(chǎn)。如：人血清無機成份分析標準物質(zhì)(GBW09135)和血清膽固醇標準物質(zhì)(GBW09138)o二級標準物質(zhì)(secondaryreferencematerial)：用一級標準物質(zhì)校準，參考方法定值。如：紅細胞微粒標準物質(zhì)一GBW(E)090001、膽紅素標準物質(zhì)一GBW(E)090002、氧化高鐵血紅蛋白溶液標準物質(zhì)一GBW(E)090004和純化血紅蛋白標準物質(zhì)一GBW(E)090011o校準物(calipator)：用二級標準物質(zhì)校準，常規(guī)方法定值。用于對常規(guī)方法和儀器的校準。質(zhì)控物(controlmaterial)：具有與檢測過程相適應的特性，其成份與檢測樣本的基質(zhì)相同或者相似。應使用充分均一和穩(wěn)定的質(zhì)控物,其瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預期的變異，其常規(guī)檢測應有助于確認報告范圍。為了保證質(zhì)控方法對系統(tǒng)性能提供獨立的評價，必須將質(zhì)控物與校準物區(qū)分開來。分析系統(tǒng)與可溯源性：分析系統(tǒng)是指檢驗方法所涉及的儀器、試劑、參數(shù)和校準品，其檢驗結果經(jīng)一系列合理實驗的驗證能夠滿足廠家聲明的要求，其量值能夠溯源到高級標準物質(zhì)。在實際工作中，實驗室使用分析系統(tǒng)進行檢驗，其檢驗結果具有可溯源性。改變分析系統(tǒng)中的任一因素，其檢驗結果的可溯源性將被打斷。如果必須改變分析系統(tǒng)中的某種因素，實驗室在應用該方法前，則應對改變后的系統(tǒng)作出適當?shù)男阅茉u價，以確定方法準確性的偏倚和檢驗結果的可溯源性。精密度評價1、精密度的內(nèi)容：精密度通常用不精密度表示，精密度評價的目的是評價檢測設備的總不精密度，是設備在一定時間內(nèi)的變異性。許多變異源可在不同程度上影響設備的精密度，通常在進行精密度評價時要充分考慮所有影響總不精密度的來源，但不必去評價每一個來源的相對大小。用于描述與時間相關的不精密度的內(nèi)容包括：批內(nèi)、批間、日內(nèi)和日間不精密度。其中，批內(nèi)不精密度和總不精密度的內(nèi)容最為重要。普通實驗要求：為減少對結果的影響因素，全部實驗過程中應使用單一批號的試劑和校準物。實驗樣本可采用穩(wěn)定化、蛋白基質(zhì)、可摹擬臨床樣本特性的產(chǎn)品，必要時，可采用穩(wěn)定化的混合冷凍血清。選擇樣本濃度時應考慮醫(yī)學決定水平，推薦使用2個或者以上濃度的樣本。實驗程序：精密度評價實驗應在操作者徹底熟悉實驗過程和評價方案以后（通常需要5天時間）進行。每天分2批測定樣本，各批實驗間至少間隔2小時。每批測定2個濃度樣本，每一個樣本重復測定2次。按表1記錄實驗結果。結果計算（略）測定線性范圍評價線性是分析方法的一個特征，不同于準確度和精密度。 線性范圍（LinearRange）是指系統(tǒng)最終的輸出值（濃度或者活性）與被分析物的濃度或者活性成比例的范圍。線性范圍的測量即測定濃度曲線接近直線的程度，它反映整個系統(tǒng)的輸出特性。線性檢驗系統(tǒng)反應，包括校準、線性化技術、系數(shù)和儀器反應。普通要求：執(zhí)行分析過程的實驗人員必須掌握儀器操作和維護程序、樣本準備方法和校準。對較簡單的設備需要5天或者更少的時間，對較復雜的多通道設備需要5天或者更長的時間。在完成儀器熟悉過程后開始實驗并采集數(shù)據(jù)。實驗樣本：線性實驗應使用與病人樣本相似的樣本或者注明樣本的基質(zhì)類型，至少使用4個濃度水平，推薦5個水平。高值樣本應高于線性上限30%,低值樣本應低于線性低限。線性實驗可使用的樣本包括：混合病人血清（理想的樣本基質(zhì)）、加入待測物的混合人血清（加入品在沒有干擾物存在時不需高純度）、對特殊材料透析過的混合人血清（用于降低分析物濃度，如：透析、熱處理、層析）、對鹽水透析過的混合血清（在線性實驗中使用此類樣本可掩蓋不同的基質(zhì)效應）。商品質(zhì)控物或者校準物（此類樣本由于不是正常的生理形式，可掩蓋實際的線性結果）、水溶液（普通無基質(zhì)效應），等。實驗程序：全部實驗和數(shù)據(jù)采集應在同一工作日內(nèi)完成。分析序列應為隨機羅列。有顯著攜帶污染時，應用空白隔開樣本。每一個濃度樣本重復測定4次。記錄測定結果。結果分析： 觀察結果有無明顯的數(shù)據(jù)錯誤，若有明顯異常時，應判斷是否為離群點。對于特定濃度Yi值的離群點進行檢驗時，需將其4個重復值從大到小羅列（Yi-1至ijYi-4）o計算極差D=Yi-1-Yi-4。若Yi-1可能是離群點，計算：D1=（Yi-1-Yi-2）/Do若Yi-4可能是離群點，計算：D4=（Yi-3-Yi-4）/Do計算結果（D1或者D4）如果大于0.765（0.05）或者0.889（0.01）,則該點判為離群點。全部數(shù)據(jù)中的離群點如果有2點或者以上，則應保留全部數(shù)據(jù)或者重新進行實驗。以分析物濃度為X軸，反應值或者儀器輸出值為Y軸，繪制X-Y線性圖。目測線性和進行統(tǒng)計學分析，判斷是否符合要求。對于線性結果的分析，應當注意統(tǒng)計學標準和臨床可接受限不同；應慎用方法學線性范圍從0開始；有臨床意義的濃度應在線性評價中，如最低線性濃度、醫(yī)學決定水平及最高線性濃度。方法學比較臨床實驗室中使用的檢驗方法，隨著科學技術的發(fā)展不斷更新，在引進新方法前或者用一種方法替代另一種方法時為保證臨床實驗室檢結果的連續(xù)性，通常要進行偏差分析，以比較不同的分析方法在測定同一分析項目時結果的差異。1、樣本要求：用于方法學對照實驗的樣本，應來源于健康人或者患者，無明顯干擾因素，并應盡量避免使用貯存樣本。全部樣本在醫(yī)學決定水平范圍內(nèi)均勻分布，樣本至少40例，增加可提高可信性。2、對照方法：可采用廠家要求的實驗室常規(guī)方法或者公認的參考方法。對照方法應具有好的精密度，沒有已知的干擾物，與評價方法單位相同，相對國家標準或者參考方法的偏差為已知。3、實驗程序：a）操作者應有足夠的時間熟悉儀器操作，保養(yǎng)程序及評價方案。在全部實驗過程中，都必須建立適當?shù)馁|(zhì)量控制程序。b）進行方法學對照實驗，每天應測定8份樣本，每份樣本都用評價方法和對照方法進行雙份測定，至少連續(xù)測定5天，共40份樣本。測定時先對樣本排序，再按順序1至8測定第一次，順序8至1測定第二次。按表3采集實驗數(shù)據(jù)c）結果繪圖：實驗結果可繪制4張圖，第一張圖是Yi對Xi的均值散點圖，第二張圖為Yij對Xi散點圖，第三張為（Yi-Xi）對Xi偏差圖，第四張為（Yij-Xij）對Xi的偏差圖。常用的與方法學評價EP5-A:臨床化學設備操作精密度評價核準指南（EvaluationofPrecisionPerformanceofClinicalChemistryDevices;ApprovedGuideline）用于臨床化學設備操作精密度評價的實驗設計及如何與生產(chǎn)廠聲明的精密度進行比較OEP6-P2：定量分析方法的線性評價：統(tǒng)計方法，提議指南第二版(EvaluationoftheLinearityofQuantitativeAnalyticalMethods:AStatisticalApproach;ProposedGuidelineSecondEdition)：指南可用于在法評價過程中檢驗方法線性、作為常規(guī)質(zhì)量保證的一部份進行線性檢查及驗證廠家聲明的線性范圍。EP7-P：臨床化學實驗干擾提議指南(InterferenceTestinginClinicalChemistry;ProposedGuideline)提供背景信息和監(jiān)定程序，用于干擾物對檢驗結果影響的定性。EP9-A：用病人樣本進行方法學比較和偏倚評估，核準批南(MethodComparisonandBiasEstimationUsingPatientSamples;ApprovedGuideline)。主要用于檢驗兩種臨床方法或者設備間的偏倚,和使用病人樣本進行方法比較的實驗設計及數(shù)據(jù)分析。EP10-A：定量臨床實驗室方法的初步評價，核準指南(PreliminaryEvaluationofQuantitativeClinicalLaboratoryMethods;ApprovedGuideline)：提供了用于分析方法和設備操作的初步評價的實驗設計和數(shù)據(jù)分析。EP11-P：用于體外診斷檢驗說明的統(tǒng)一描述，提議指南(UniformDescriptionofClaimsForInVitroDiagnosticTests;ProposedGuideline)EP12-P： 用于定性實驗評價的用戶協(xié)議，提議指南(UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;ProposedGuideline)EP13-R： 實驗室統(tǒng)計一標準差，報告(LaboratoryStatistics一StandardDeviation;AReport)EP14-A：基質(zhì)效應的評價，核準指南(EvaluationofMatrixEffects;ApprovedGuideline)EP15-A:精密度和準確度性能的應用，核準指南(UserDemonstrationofPerformancefo