《甘草多糖與甘草黃酮的提取及含量檢測》編制說明

《甘草多糖與甘草黃酮的提取及含量檢測》編制說明書2《甘草多糖與甘草黃酮的提取及含量檢測》編制說明中國國際科技促進會標準化工作委員會《關于開展<甘草多糖與甘草黃酮的提取及含），甘草多糖和甘草黃酮是甘草中的兩種重要有效成分，具有多種藥理活性和臨床應用價值，如抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、降血糖、降血脂等作用。因此，制定甘草多糖與保障產品質量：制定國家標準可以明確甘草多糖與甘草黃酮的提取方法和含量檢測標準，有利于保障產品質量，避免不合格產品流入市場；促進產業(yè)發(fā)展：國家標準的制定可以規(guī)范甘草多糖與甘草黃酮的生產和檢測，促進產業(yè)發(fā)展，提高行業(yè)競爭力，推動產業(yè)健康發(fā)展；便于監(jiān)管管理：國家標準的制定可以為監(jiān)管管理提供依據，有利于加強對甘草多糖與甘草黃酮產品的監(jiān)管管理，保障消費者的合法權益；提高國際競爭力：制定國家標準可以提高我國甘草多糖與甘草黃酮產品的國際競爭力，有利于我國在國際市場上拓展業(yè)務，實現產業(yè)升級和國際化發(fā)展；推動科學研究：國家標準的制定可以促進甘草多糖與甘草黃《中國藥典》2020版一部對甘草藥材的質量有具體要求，其中對甘草苷和甘草酸的含量有明確的要求，規(guī)定了甘草按干燥品計算，含甘草苷（C21H22O9）不得少于0.50%，甘甘草多糖是甘草除甘草黃酮和甘草酸兩大主要活性元素外的又一重要的有效成分。研究證明，甘草多糖具有免疫調節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒等多種藥理活性，甘草的生物學特性亦與多糖有密切關系。甘草多糖能刺激B淋巴細胞和體液免疫中T淋巴細胞的增殖，提高抗體生成水平，提升特異性免疫功能；甘草多糖對水皰性口炎病毒、腺病毒Ⅱ型、HSV-1和牛痘病毒均有明顯的抑制作用，且甘草多糖具有較強的抗癌活性，對移植瘤小鼠具有較好的免疫活性。眾多研究均表明甘草多糖頗具有研究價值。甘草多糖具有多種藥理甘草黃酮是甘草中除三萜皂苷外的另一大類重要化合物。由于甘草品種和產地的差異，3其甘草黃酮含量不同，但通常在1%-6%之間，這使得甘草藥效也不盡相同，目前從甘草中分離得到的黃酮類化合物數量已達到300多個。針對甘草中黃酮類化合物的提取工藝研究已較為透徹，主要有醇提取法、超聲提取法、微波輔助提取法和超臨界CO2提取法，其中超聲提取法應用最為廣泛。最初甘草的所有藥理作用都被歸因于甘草三萜皂苷類成分，自甘草抗?jié)兊淖饔帽蛔C實來源于甘草黃酮后，甘草黃酮的藥理作用才開始受到關注。已證實甘草黃酮存在抗氧化、抗炎、抗菌、保肝、激素樣作用、降糖、降脂、抗癌、解痙、抗抑郁等諸多藥理作用。臨床用于治療急慢性肝損傷、各類炎癥、心腦血管疾病、腫瘤的治療、神經退化性疾病等的治療?；诟什葜懈什蔹S酮含量豐富，提取工藝成熟、藥理活性廣泛的特點，在甘草【含量測定】中新增甘草黃酮含量測定標準，對甘草的應用及質量控本標準的起草單位有：江蘇大學、江蘇天晟藥業(yè)有限公司、烏茲別克斯坦塔什干國立12345明確制定甘草質量標準的目標和范圍，即要評估和確定哪些方面的甘草質量以及評價該方面質量的意義，最終選擇對甘草多糖與甘草黃酮的標準進行研究；組建一個專門的工作組，由江蘇大學、江蘇天晟藥業(yè)有限公司、烏茲別克斯坦塔什干國立農業(yè)大學努庫斯分校、正大天晴藥業(yè)集團股份有限公司、揚子江藥業(yè)集團有限公司的相關要學領域的專業(yè)從業(yè)者組成；在此基礎上對甘草多糖與甘草黃酮標準的提取方法、關鍵指標、時間進度、任4求，規(guī)定含甘草苷（C21H22O9）不得少于0.50%，甘草酸（C42H62O16）不得少于2.0%；《美國藥典》USP-NF2023：對甘草的鑒別、甘草酸含量測定、植物學特征、包裝、儲存、標簽進行規(guī)定，規(guī)定甘草酸（C42H62O16）含量不得少于2.5%；有機雜質含量不得超過2.0%；乙醇提取物含量不得少于25.0%；105℃干燥6小時，干燥失重不得超過《歐洲藥典》:歐洲藥典規(guī)定了甘草質量要求、檢測方法、儲存等，同時對于甘草質量標準的規(guī)定包括對藥材、提取物和制劑等的要求，規(guī)定含18β-甘草酸在5.0%-《日本藥局方》規(guī)定的甘草質量標準，包括對藥材的鑒定、純度的監(jiān)測、規(guī)定按干燥物料計算，甘草酸(C42H62O16:8根據收集到的背景信息和工作組的實驗結果，開始起草標準草案的內容，包括提取方根據相關的法規(guī)、標準、藥典和研究論文以及團隊的實驗研究結果，起草一個初步的討論稿；將討論稿進行內部討論和評審；根據討論和評審的結果，編制甘草質量標準的說將討論稿和編制說明發(fā)送給外部專家、行業(yè)協會、藥企等組織，征求他們的意見和建8月，標準由中國國際科促會標準化工作委員會在全國團體標準信息平臺，面向社會二、標準編制原則、主要內容及其確定依據，修訂標準時，還包括修訂前后5甘草質量標準的起草基于最新的科學研究和技術進展，確保評價指標和測試方法的科學性和準確性，同時綜合考慮多個指標和因素，以全面評估甘草的質量。標準涵蓋甘草質量評價的方方面面，包括甘草藥材的提取、質量標準、檢驗方法、限度等。關注甘草產品的安全性、衛(wèi)生質量和可靠性，以保護消費者的健康和權益，與國際標準接軌，以便于國內甘草產品的國際貿易和市場準入。甘草在醫(yī)藥、食品等領域的廣泛應用，確保標準對不同行業(yè)的從業(yè)者具有指導意義，標準涵蓋原材料的采集、提取控制等方面，確保標準的全提供了明確的測試方法，包括樣品的采集、提取、檢測儀器的選擇和操作步驟等，測試方法簡明清晰，方便從業(yè)人員按照標準要求進行操作；標準圍繞甘草的主要質量問題進行界定和規(guī)范，解決實際問題并提高甘草產品的質量，明確規(guī)定甘草質量的評價標準，即對各項質量指標的要求和評價方法。標準與行業(yè)的發(fā)展和技術的進步保持同步，會不斷修指標的選取和限度要求應基于可靠的數據和研究結果，標準提供了準確、可靠的測試方法，確保對甘草質量的檢測結果具備準確性和可信度，標準的修訂和更新基于科學的依本標準中的質量標準的提出，參考了《中國藥典》2020版一部對甘草藥材的質量有具體要求，規(guī)定了含甘草苷（C21H22O9）不得少于0.50%，甘草酸（C42H62O16）不得少于2.0%，在此基礎上我們研究發(fā)現甘草多糖和甘草黃酮也具有十分顯著的藥理活性和研究價值，所以本標準對甘草的提取方法，以及甘草多糖和甘草黃酮的檢測方法及限度進行規(guī)范。本標準采用了超聲逆流工藝提取甘草中的多糖和黃酮，即在50℃-60℃的溫度條件下，將甘草置于超聲波連續(xù)逆流設備的提取管內，常壓提取90min-150min。該提取方法參考了苗彥妮、吳斌等人的《超聲逆流提取技術在中藥發(fā)明專利中的應用概況》、郭志雄的《超聲波連續(xù)逆流提取在中藥生產中的應用》、胡文、王瑩的《Preparingmaca6addingethanol,andsaccharifying》以及陳紅專、王曙賓等人的《人參超聲逆流提取本標準采用苯酚—硫酸反應以碳水化合物形式比色測定其含量，其顯色強度與粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此計算食品中粗多糖含量。檢測方法參考了陸婷婷等人發(fā)表的《甘草多糖提取工藝的研究》；王晴等人發(fā)表的《甘草多糖的抗氧化及降血糖作用研究》；Behnken法優(yōu)化甘草多糖提取工藝及其體外抗氧化活glabraL.)inhibitadhesionofHeliphysicochemicalpropertiesoUralCity,Xinjian》。同時在GB/T35818-2018林業(yè)生物質原料分析方法多糖及木質素含量的測定中也采用了酚-硫酸法，在加入硫酸之前，將樣品與酚混合，使多糖在酚的作用下變得可溶。然后加入硫酸，利用多糖與硫酸反應的顏色變化來測定多糖的含量。用苯酚—硫酸法對多糖進行檢測的方法在DB45/T2143-2020甘蔗葉中多糖的測定和SN/T本標準采用紫外分光光度法檢測甘草黃酮的含量，黃酮類物質化學結構為2-苯基色原酮，分子中具有酚羥基，可與Al3＋在堿性溶液中顯色。黃酮類物質被亞硝酸鈉還原，然后與硝酸鋁生成絡合物，該絡合物在氫氧化鈉溶液堿性環(huán)境中顯橙紅色，在510nm處有最大吸收峰，在一定濃度范圍內其濃度與吸光度符合朗伯-比爾定律，以蘆丁為對照品，采用標準曲線法可計算樣品中總黃酮的含量。檢測方法參考了GB/T20574-2006蜂膠中總黃酮含量的測定方法-分光光度比色法；DB34/T2743-2016槐米及其制品中總黃酮含量的測定-分光光度法；DB64/T1082-2015枸杞中總黃酮含量的測定-分光光度比色法；萬嘉洋等7王應強等人的《超聲波提取甘草黃酮的工藝研究》；XiaoyanLi等人的《Ulrtrasonic本單位近年來主要圍繞天然藥用資源高效利用開展創(chuàng)新研究，先后承擔國家科技支撐計劃項目、國家自然科學基金重點項目、面上項目等10余項，第一完成人獲教育部科技進步一等獎2項，中國商業(yè)聯合會科技進步特等獎1項、一等獎2項，挑戰(zhàn)杯大學生課外科技競賽特等獎1項、一等獎1項；獲中國授權發(fā)明專利40件，美國授權發(fā)明專利3件；擁有國家百千萬、江蘇省杰青、省雙創(chuàng)團隊領軍人才、省六大高峰人才等各類人才10余人，江蘇省雙創(chuàng)團隊和江蘇省高校優(yōu)秀科技創(chuàng)新團隊各1個。2018年，牽頭建設“江蘇省食品新資源藥用功能開發(fā)工程研究中心”，2019年，主持國家科技部國家重點研發(fā)計劃《甘草資源度開發(fā)進行了創(chuàng)新研究，已發(fā)表甘草活性篩選、活性提取純化、新型制劑等相關SCI論文本單位擁有噴霧干燥器、凍干機、均質機、多用途流化床實驗機、全自動膠囊填充機、軟膠囊機、高效包衣機、多功能微丸機、激光粒度儀、高效液相色譜儀、氣相色譜儀、薄層掃描儀、熒光酶標儀、熒光定量PCR儀、活細胞3D打印機、藥物設計綜合軟件、熒光顯微鏡、紅外光譜儀、紫外分光光度計、熒光分光光度計、臺式高速冷凍離心機、藥物穩(wěn)定性試驗箱、活細胞工作站、全自動快速中壓制備系統等大型精密儀器和制藥中試設備，已按中華人民共和國藥典對甘草鑒別后進行凈選、淘洗，烘干后的藥材置于粉碎機中粉碎至30目-40目。然后進行甘草的超聲逆流提取，通過料斗緩沖將處理后的甘草提取原料甘草和梯度提取溶液在超聲波連續(xù)逆流設備的提取管內，在溫度50℃~60℃、常壓下進行連續(xù)逆流超聲提取90min～150min；排渣口排出甘草渣，排液口排出提取液；提取液進甘草多糖的檢測，利用多肽在80%乙醇溶液中沉淀，再用堿性二價銅試劑選擇性地從其他高分子物質中沉淀具有葡聚糖結構的多糖，用苯酚—硫酸反應以碳水化合物形式比色8甘草黃酮的檢測，甘草提取物中的黃酮類成分可被亞硝酸鈉還原，與硝酸鋁生成絡合物，在氫氧化鈉溶液堿性條件下開環(huán)，生成2基查耳酮而使溶液顯特征的橙紅色，采用紫外分光光度計在510nm波長處測定吸光度，以蘆丁為對照品，采用標準曲線法計算樣品中本標準的提出可以提供明確的評價標準和操作指南，幫助從業(yè)人員對甘草的質量進行判斷和控制。通過標準的應用，可以降低甘草產品的質量風險，提高產品的質量穩(wěn)定性和可追溯性。本標準的制定，使得甘草產品在國內外貿易中更具競爭力，可以增強甘草產品的可信度和市場認可度，促進貿易暢通和合作交流。標準的實施可以提高從業(yè)人員的專業(yè)三、試驗驗證的分析、綜述報告，技術經濟論證，預期的經濟效益、社會效“4.1.4甘草的切制、粉碎”中“將切制好的甘草置于不銹鋼烘盤內，平鋪，厚度為20mm～30mm”的方法參照了1986年的《吉林省中藥炮制標準》?！?.1.4甘草的切制、粉碎”中“烘干后的藥材置于粉碎機中粉碎至30目-40目”的方法參照了李金芳等人的《超聲輔助提取新疆甘草總黃酮工藝研究》、李紅等人的《甘草渣中黃酮和多糖的提取及含量測定》以及陳紅專等人的《人參超聲逆流提取工藝研究》。“4.2.3甘草的超聲逆流提取”中“在溫度50℃~60℃”的方法參照了專利《利用連續(xù)逆流超聲提取機提取甘草酸“5.3甘草多糖的純化”中“Sevag法脫蛋白，對甘草多糖進行純化的具體方法如下：向甘草粗多糖的溶液中加入適量的氯仿和正丁醇溶液，氯仿：正丁醇體積比為1：4，振搖用離心法除去變性蛋白質，重復使用5次以上能以較高的效率除去蛋白?！钡姆椒▍?immunologicfunctioninmiceinUralCity,Xinjian》?！?.4甘草多糖含量的標準曲線模型”中“精密吸取葡聚糖標準使用液0、0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL相當于葡聚糖0、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、0.08mg、0.10mg）”的方法參照了乙凱強等人的《甘草中活性成分連續(xù)提取純化及多孔炭材料制備工藝研究》，韓榮生等人的《甘草多糖提取工藝條件的研究》以及JieChen等人的“甘草黃酮的檢測”項下，6.3前處理中“超聲處理5min”參考了李金芳等人發(fā)表的草中總黃酮提取工藝的優(yōu)化》；“6.4標準勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10mL，加水至刻度，搖勻，放置15min”參考了DB64/T1082-2015枸杞中總黃酮含量的測定-分光的《甘草總黃酮提取的優(yōu)化條件研究》；“在5101082-2015枸杞中總黃酮含量的測定-分光光度比色法，DB34/T2743-2016槐米及其制品中《中國藥典》對甘草、脹果甘草和光果甘草的性狀進行了描述，并分別說明了其橫切面和粉末的鑒別方法，藥典對甘草的水分、總灰分、酸不溶性灰分、重金屬及有害元素以及其他有機氯類農藥殘留等指標進行規(guī)定（水分不超過12.0%；總灰分不超過7.0%；酸不溶性灰分不超過2.0%；鉛不得超過5mg/kg；鎘不超過1mg/kg；砷不超過2mg/kg；汞不超過0.2mg/kg；銅不超過20mg/kg；五氯硝基苯不超過0.1mg/kg）。規(guī)定其含量測定的色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0.05%磷酸溶液為流動相B，梯度洗脫，檢測波長為237nm，藥典規(guī)定理論板數按甘草苷峰計算不低于5000。同時，藥典對對照品和供試品溶液的制備也做出規(guī)定，且規(guī)定按干燥品計算，甘草苷（C21H22O9）含量不得低于0.50%，甘草酸（C42H62O16）含量不得少于2.0%。最后，藥典對甘草飲片質量進行規(guī)范，包括其性狀、炮制方法、性味歸經、功能主治、用法用量和儲存方式，其含量測定和鑒別方法同藥材，規(guī)定其總灰分不得超過5.0%，甘草苷（C21H22O9）含量不得低于0.45%，甘草酸（C42H62GB/T19618-2004中規(guī)定了西甘草、東甘草分等質量標準的術語、技術要求和檢驗方法等內容，具體包括對西甘草和東甘草進行分等，對各規(guī)格和等級甘草的外觀、水含量、1總灰分、酸不溶性灰分、甘草酸含量、農藥殘留和有害元素含量進行了規(guī)定；規(guī)定了甘草酸含量檢測方法、甘草中農藥六六六、滴滴涕殘留檢測方法、甘草中有害元素——鉛、鎘、新標準基于GB/T19618-2004和《中國藥典》的規(guī)定，采用了超聲逆流提取方法，并甘草是一種重要的中藥材，被廣泛用于食品、藥品、化妝品等領域。本甘草質量標準的制定和實施可以帶來以下預期經濟效益：保證產品質量：甘草質量標準的制定可以確保甘草及其相關產品的質量穩(wěn)定和一致性，防止劣質產品流入市場。這有助于增強消費者對產品的信任，維護企業(yè)聲譽。促進國內貿易：統一的甘草質量標準有助于消除地區(qū)差異，降低交易成本，促進國內貿易的發(fā)展。企業(yè)可以更方便地進行跨地區(qū)交易，拓寬銷售渠道。提高產品競爭力：通過制定嚴格的甘草質量標準，可以促使企業(yè)提升生產工藝和質量管理水平，提高產品的質量和安全性。這有助于增強產品的競爭力，在激烈的市場競爭中脫穎而出。促進國際貿易：甘草質量標準的制定與國際接軌，有助于提升中國甘草產品在國際市場上的競爭力。符合國際標準的產品更容易被國際市場接受，有利于拓展海外市場，增加出口收入。保護消費者權益：甘草質量標準的制定有助于保護消費者的權益，防止不合格產品對消費者健康造成損害。消費者可以更有信心地購買甘草產品，提高消費者滿意度，樣機的有關數據對比情況檢索甘草的美國、歐洲、日本藥典中質量標準，發(fā)現，《美國藥典》USP-NF2023：規(guī)定甘草酸（C4