微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室腸球菌屬標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室腸球菌屬標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1.概述腸球菌屬于1984年從鏈球菌屬劃出，單獨(dú)成為一個(gè)菌屬，包括糞腸球菌、屎腸球菌、鳥腸球菌、堅(jiān)韌腸球菌、鉛黃腸球菌、蒙氏腸球菌、海氏腸球菌、鶉雞腸球菌和病臭腸球菌等18個(gè)種和1個(gè)變異株。臨床上常見的菌株為糞腸球菌。2.標(biāo)本類型血液、尿液、痰、穿刺液、膿液等標(biāo)本。3.鑒定3.1形態(tài)與染色革蘭陽性球菌，單個(gè)、成雙或短鏈狀排列。3.2培養(yǎng)特性在血瓊脂平板上形成較小、灰白色，有a溶血或β溶血環(huán)的菌落。在麥康凱瓊脂平板上形成較小、干燥、粉紅色菌落。3.3生化反應(yīng)觸酶試驗(yàn)陰性，分解甘露醇、山梨醇、膽汁七葉苷試驗(yàn)陽性、在含6.5%氯化鈉的肉湯中生長，多數(shù)菌株P(guān)YR試驗(yàn)陽性，對(duì)桿菌肽耐藥。3.4鑒別要點(diǎn)3.4.1本菌特征革蘭陽性球菌，觸酶試驗(yàn)陰性，在65g/L氯化鈉中生長，膽汁、七葉苷試驗(yàn)陽性，45℃中生長。3.4.2與屎腸球菌的鑒別：糞腸球菌不分解阿拉伯糖，而屎腸球菌能分解阿拉伯糖3.4.3與鏈球菌屬和乳球菌屬的鑒別：見表5-353.4.4糞腸球菌與其他各主要菌種間的鑒別：見表5-36操作步驟3.5.1觸酶試驗(yàn)陽性參見觸酶試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程3.5.2鑒定從血平板上挑取純菌落，用微生物鑒定儀或傳統(tǒng)生化反應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定。4.藥敏參見《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》及CLSIM100-S20最新版本文件.5.質(zhì)量控制參見《質(zhì)量控制程序》6.檢驗(yàn)結(jié)果解釋與分析在β-內(nèi)酰胺酶陰性球菌腸球菌中，氨芐西林藥敏試驗(yàn)結(jié)果可預(yù)測阿莫西林-克拉維酸、氨芐西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等敏感性。青霉素藥敏試驗(yàn)可預(yù)測氨芐西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉維酸、氨芐西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等藥敏結(jié)果。糞腸球菌中氨芐西林藥敏結(jié)果可以預(yù)測亞胺培南的藥敏結(jié)果。對(duì)于血培養(yǎng)和腦脊液中分離到的腸球菌，需做β-內(nèi)酰胺酶檢測，β-內(nèi)酰胺酶陽性，則對(duì)青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素均耐藥。為耐萬古霉素腸球菌做氯霉素、紅霉素、四環(huán)素和利福平藥敏試驗(yàn)，根據(jù)結(jié)果進(jìn)行治療。氨基糖苷類高水平耐藥株HLRA可用慶大霉素120ug/片和鏈霉素300ug/片篩選，無抑菌環(huán)為耐藥，抑菌環(huán)≥10mm為非HLAR，對(duì)于抑菌環(huán)在7～9mm之間的菌株需用稀釋法確認(rèn)。對(duì)于腸球菌屬，頭孢菌素類、氨基糖苷類（僅篩選高水平耐藥性）、磺胺甲惡唑、甲氧芐啶和克林霉素在體外可能有活性（敏感），但在臨床上耐藥，所以不能報(bào)告腸球菌對(duì)這些藥物敏感。表5-35屬常見菌種的生物學(xué)特性菌種甘露山梨山梨精氨阿拉棉子蔗核動(dòng)色丙酮醇醇糖酸伯糖糖糖糖力素酸鹽組1鳥腸球菌+++-+-++--+假鳥腸球菌+++--+++--+棉子糖腸球菌+++-++++--+病臭腸球菌+++---++--+組2糞腸球菌++-+--++--+屎腸球菌+--++-++---卡氏黃色腸球菌+--+++++++-蒙氏腸球菌+--+++++-+-鉛黃腸球菌+--++++-++-鶉腸球菌+--++++++--組4堅(jiān)韌腸球菌---+---ND---海氏腸球菌---+-++ND---不稱腸球菌---+-++ND--+糞腸球菌變異株---+---ND--+硫磺色腸球菌-----+++-+-表5-腸球菌屬、鏈球菌屬和乳球菌屬細(xì)菌的生物學(xué)特性試驗(yàn)?zāi)c球菌屬鏈球菌屬乳球菌屬膽汁七葉苷+-+65g/L氯化鈉中生長+-VPYR+-+45℃生長+--注：“+”為90%以上菌株陽性，“-”為90%以上菌株陰性，“V”為11%~89%菌株陽性。7.臨床意義糞腸球主要引起感染，最常見為尿道感染，其中大部分與尿道器械操作、導(dǎo)尿等有關(guān)；其次為腹部和盆腔等部位的創(chuàng)傷和外科術(shù)后感染。近年來，腸球菌屬氨芐青霉素耐藥株和慶大霉素高耐藥株逐漸增多，耐萬古霉素的腸球道菌國外也有較多報(bào)道，已使腸球菌所致重癥感染的治療成為臨床棘手問題。8.鑒定流程菌落觀察：較小、灰白色、a溶血或菌落觀察：較小、灰白色、a溶血或β溶血觸酶試驗(yàn)-+棉子糖-+精氨酸-+阿拉伯糖-+蔗糖-涂片染色：G+球菌，單個(gè)、成雙或短鏈排列+丙酮酸-+甘露醇-孤立腸球菌棉子糖腸球菌鳥腸球菌異味腸球菌+丙酮酸-糞變種+阿拉伯糖-屎腸球菌+動(dòng)力-+色素-曼特腸球菌堅(jiān)韌腸球菌腸道腸球菌鉛黃腸球菌+動(dòng)力-母雞腸球菌參考文獻(xiàn)[1]中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì).CNAS-GL23；2008醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的指南.2008[2]周庭銀編著.《臨床微生物學(xué)診斷與圖解》.第二版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2007[3]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第三版.南京：東南大學(xué)出版社，2006[4]MurrayPR.Manual