牛乳檢驗(yàn)方法20030305

內(nèi)蒙古伊利集團(tuán)股份有限公司液態(tài)奶事業(yè)部生鮮牛乳檢驗(yàn)方法文件匯編（試行）編號：YLYT-ZG/1-JY-78[1?0]伊利液態(tài)奶事業(yè)部質(zhì)管處感官指標(biāo)1） 車體感官2） 牛乳感官2?理化指標(biāo)1） 脂肪含量的測定2） 蛋白質(zhì)含量的測定3） 全乳固體含量的測定4） 非脂乳固體含量的測定5） 酸度的測定6） PH值的測定7） 雜質(zhì)度的測定8） 收奶溫度的測定9） 酒精實(shí)驗(yàn)10）煮沸實(shí)驗(yàn)3?摻假檢測1） 鹽2） 蔗糖3） 尿素4） 食堿5） 硝酸鹽、亞硝酸鹽6） 硫酸鹽7） 飴糖（糖稀）及葡萄糖8）米湯、淀粉類9）豆?jié){、豆餅水

4?衛(wèi)生指標(biāo)的測定1） 細(xì)菌總數(shù)2） 耐熱芽孢的測定3） 芽孢總數(shù)的測定4） 嗜冷菌總數(shù)的測定5） 乳房炎乳檢測6） 體細(xì)胞的檢測7） 抗生素的測定8） 硝酸鹽、亞硝酸鹽（定量法）起草：李志君 審核審批：李印所 日期：孫秀芝2003.3.3感官指標(biāo)檢驗(yàn)一、 車體感官奶罐口密封嚴(yán)密，且使用食品級橡膠圈，膠圈干凈，禁止用泡沫類、編織袋等物品密封罐口。用肉眼觀察及用手觸摸其罐口、罐內(nèi)壁及罐出口，是否有奶垢、奶油及其它贓物。二、 牛乳感官1.色澤觀察奶車中的牛乳，正常色澤為乳白色或微帶黃色，如帶有紅色、綠色或明顯的黃色，則不合格（如果奶車中觀察不清楚，則采樣后進(jìn)行觀察）。取生鮮牛乳樣品放于白色平盤中，在自然光下觀察牛乳色澤是否為乳白色或稍帶黃色。滋氣味打開奶罐口蓋時(shí)，聞是否有酸味、牛糞味、牛舍味和強(qiáng)烈的腥、膻味等異常氣味，如有則不合格。取牛乳50ml于250ml三角瓶中置電爐上煮沸，將瓶口與鼻子之間的距離10cm左右，用手扇動瓶口上方的氣體，使空氣吸向自己聞是否有乳香味或其他異味、臭味。冷卻至15°C時(shí)品嘗，是否稍帶甜味，有無其他異味。組織狀態(tài)觀察奶車中牛乳，是否有凝塊、煤屑、豆渣、牛糞和昆蟲等肉眼可見雜質(zhì)，如有則不合格。理化指標(biāo)檢驗(yàn)一、脂肪含量的測定方法一(基準(zhǔn)法)羅茲一哥特里法(GB6914—86)原理用氨水處理牛乳，使酪蛋白鈣鹽成為可溶性的鹽類，促進(jìn)脂肪球-乙醚的作用；加入乙醇，使一系列的能被酒精浸出的物質(zhì)留在水相中。利用乙醚將脂肪從牛乳中抽出，加入石油醚使乙醚不被水飽和。將醚層傾入脂肪收集瓶中，揮發(fā)溶劑，則得出脂肪收集瓶中的樣品中脂肪的含量。儀器設(shè)備分析天平：感量0.1mg鼓風(fēng)式烘箱：箱內(nèi)溫度控制在102±2°C毛氏抽脂瓶及瓶塞毛氏抽脂瓶架脂肪收集瓶：250ml(150ml)錐形瓶刻度吸管：2ml、5ml、10ml、25ml量筒：25ml水浴鍋試劑所用試劑都是分析純，所用水為蒸餾水。氨水：NH的含量為25%3乙醇：體積分?jǐn)?shù)為95%剛果紅溶液：將1g剛果紅溶于水稀釋至100ml乙醚：分析純石油醚：分析純、沸程30—60oC混合醚：等體積乙醚和石油醚混合步驟脂肪收集瓶的準(zhǔn)備：將干凈的脂肪收集瓶在烘箱102±2°C中烘lh,取出后置于天平室內(nèi)冷卻至室溫，要防止灰塵，稱取脂肪收集瓶的質(zhì)量，準(zhǔn)確至O.lmg,稱量時(shí)要帶手套或使用夾子。樣品的稱取和抽提準(zhǔn)備：用10ml吸管將樣品移入一個(gè)干燥、潔凈的小燒杯中,用減量法稱取10-llg樣品于毛氏抽脂瓶中，準(zhǔn)確至0.1mg。加2m125%的氨水，在小球內(nèi)混合均勻。加完氨水后，應(yīng)將實(shí)驗(yàn)一直做完,不得停頓和延誤。3.3空白試驗(yàn)：在測定的同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)，用10ml水替代樣品，其他同樣品的測定。3.4加10ml乙醇混好，允許液體在小球和大柱間流動，只是要避免液體過于接近瓶口，加兩滴剛果紅溶液混合均勻。加25ml乙醚，塞緊塞后，兩手分握抽脂瓶的兩端，以相同位置和振幅搖混1min，小心地拔掉塞子，用少量混合醚淋洗塞子和瓶口，使淋洗液都流入瓶內(nèi)。加25ml石油醚，塞緊塞子，再用兩手分握抽脂瓶兩端，以相同位置和振幅搖混0.5min，小心拔掉塞子，用少量的混合醚淋洗塞子和瓶口，使淋洗液都注入瓶內(nèi)。將毛氏抽脂瓶置于支架上放置30min以上，至醚層和水層完全分開(或?qū)⒓尤某橹糠湃腚x心機(jī)中，在500-600r/min下離心1-5min)。拿住抽脂瓶的小球，小心并盡可能完全地將醚層傾入已稱好重的脂肪收集瓶中，要避免將水層的液體傾入收集瓶中，用混合醚淋洗抽脂瓶口的外部，讓淋洗液流入收集瓶中。3.9重復(fù)3.4-3.8的操作，進(jìn)行第二次抽提，（加入量分別為5ml乙醇，15ml乙醚、15ml石油醚）3.10重復(fù)3.9中的操作，只是不再加乙醇，進(jìn)行第三次抽提。3.11用混合醚淋洗脂肪收集瓶的瓶口和內(nèi)壁后，將脂肪收集瓶中的乙醇和醚盡可能地?fù)]發(fā)掉。3.12將脂肪收集瓶置于102±2°C烘箱中烘1h,在天平室冷卻（防塵）1h后稱量，然后再將脂肪收集瓶置于烘箱中烘0.5h，再冷卻0.5h后稱量，重復(fù)操作，直至兩次稱量的差值小于0.5mg。結(jié)果計(jì)算：計(jì)算公式：（脂肪含量以質(zhì)量數(shù)表示）（m-m）（m-m）W= 1 2 3 4X100m式中：w—樣品脂肪的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%m—稱取的樣品量，g0m—脂肪收集瓶和抽提出的物質(zhì)的量，g1m—空脂肪收集瓶的重量，g2m—空白試驗(yàn)中收集瓶和抽提出的物質(zhì)的量，g3m—空白試驗(yàn)中收集瓶的重量，g4方法二：儀器法（IDF141C：2000）儀器120型（或50型）全組分分析儀（需進(jìn)行校準(zhǔn)）、50ml燒杯方法取約40ml、20-40C過濾、混勻的牛乳樣品于燒杯中，將燒杯放在全組分分析儀的吸樣管下，選擇相應(yīng)的檢測程序，按檢測鍵，待顯示屏出現(xiàn)檢測結(jié)果時(shí)，即可讀數(shù)。方法三：蓋勃法（GB5409-85）原理用硫酸把乳制品中以酪蛋白的鈣鹽形態(tài)存在的酪蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苄缘闹亓蛩崂业鞍谆衔锱c生成不溶性的硫酸鈣，溶解脂肪球膜，把脂肪釋放出來，加入異戊醇促進(jìn)脂肪的分離；分離出的脂肪量可直接從乳脂計(jì)的刻度管中讀取，或據(jù)脂肪柱讀數(shù)計(jì)算出。儀器設(shè)備蓋勃牛乳乳脂計(jì)：0-6刻度乳脂計(jì)架恒溫水浴鍋蓋勃離心機(jī)10ml硫酸自動吸管1ml異戊醇自動吸管11ml牛乳吸管3試劑硫酸：比重為1.820T.825異戊醇：沸點(diǎn)128-132°C，比重0.8090-0.8115用硫酸自動吸管向牛乳乳脂計(jì)中加入硫酸10ml,頸口勿沾濕硫酸，用11ml吸管吸取牛乳樣品至刻度，緩慢加入同一乳脂計(jì)內(nèi)（注意不能與硫酸液面混合），再加入異戊醇1ml,加入蒸餾水調(diào)節(jié)液面（使脂肪柱適合乳脂計(jì)刻度部分），塞緊橡皮塞，充分搖動，使牛乳凝塊溶解、無黑色顆粒。將乳脂計(jì)放入65-70C的水浴中保溫5min，然后置離心機(jī)中以1200轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)5min，再放入65-70C的水浴中保溫5min，取出立即讀數(shù)，讀數(shù)時(shí)要將乳脂肪柱下彎月面放在與眼睛視線同一水平面上，以彎月面下限為準(zhǔn)。所得數(shù)值即為脂肪的百分?jǐn)?shù)。注：（1）.如所用離心機(jī)有保溫功能，可省去水浴保溫的步驟。（2）.搖動時(shí)用布包住，乳脂計(jì)向外、向下，不要對著自己或他人，以免乳脂計(jì)破裂或塞子沖開，受到傷害。二、蛋白質(zhì)含量的測定方法一（基準(zhǔn)法）：半微量凱氏定氮法（具體見B/T5413.1-1997）原理：消化：樣品中的含氮有機(jī)物經(jīng)濃硫酸加熱消化，硫酸使有機(jī)物脫水，然后，有機(jī)物炭化生成C；C將硫酸還原為SO,本身生成CO；SO使N還原為NH,2223本身則氧化為SO，而消化過程中生成的H,又加速了NH的形成。在反應(yīng)過33程中，生成物水和SO逸出，而NH則與硫酸結(jié)合成硫酸銨，留在溶液中。33蒸餾：硫酸銨在堿性條件下，釋放出氨。吸收和滴定：蒸餾過程中放出的氨用硼酸溶液吸收后，用硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗量計(jì)算出總氮量，進(jìn)而算出蛋白質(zhì)的含量。儀器：凱氏燒瓶：250ml（細(xì)長頸）蒸餾裝置電子天平：精度為0.1mg試劑硫酸鉀（分析純）硫酸銅（分析純）濃硫酸（分析純）硫酸標(biāo)液（c（H+）濃度為0.1mol/l）：取3ml濃硫酸加到15ml水中，冷卻后洗入1000ml容量瓶中，定容、標(biāo)定。400g/L氫氧化鈉溶液30g/L硼酸溶液樣品的稱取液體乳：用減量法準(zhǔn)確稱取樣品12-15g于凱氏燒瓶中，傾倒樣品時(shí)要順著連燒杯一起稱重的小玻璃棒小心操作，盡量使樣品不掛在凱氏燒瓶的頸口部。方法：4.1消化：在凱氏燒瓶中加入10g硫酸鉀和1g硫酸銅，量取20ml濃硫酸，徐徐加入到凱氏燒瓶中，混合。置于有石棉網(wǎng)的電爐上加熱（通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行）。一開始火要小，小心燒瓶內(nèi)泡沫沖出而影響測定結(jié)果。當(dāng)瓶內(nèi)發(fā)泡停止，再加大火力。同時(shí)，分?jǐn)?shù)次加入10ml過氧化氫溶液（加前須將燒瓶冷卻），沖下瓶頸和瓶壁上的炭化顆粒。當(dāng)燒瓶內(nèi)容物的顏色逐漸變成透明的淡綠色時(shí)，繼續(xù)消化0.5Th。轉(zhuǎn)移：使消化好的樣品冷卻，沿瓶壁吹入少許水，混合，再逐漸沿瓶壁吹入少許水（防止劇烈沸騰，水迸出燒瓶），至燒瓶內(nèi)液體的體積約60ml，沿玻璃棒將燒瓶壁內(nèi)的液體倒入放有小漏斗的100ml容量瓶中，以水洗凱氏燒瓶多次，洗滌液沿玻璃棒倒入容量瓶中。冷卻，定容。蒸餾：接好定氮裝置，在水蒸汽發(fā)生瓶中裝入2/3以下的水，加入數(shù)粒玻璃珠防止暴沸，加熱煮沸水蒸汽發(fā)生瓶內(nèi)的水，接通冷凝水。在接收瓶中加入50ml30g/L硼酸溶液和3滴混合指示劑，使冷凝器的出液端口位于接收瓶液面以下。將25ml消化液小心移入定氮器的蒸餾瓶中，再緩慢加入25ml400g/L氫氧化鈉溶液，迅速塞好塞，并用水封好，通入蒸汽進(jìn)行蒸餾。蒸至液面達(dá)150ml時(shí)，稍移動接收瓶，使出液口位于液面之上，流出的蒸餾液沿瓶壁流下，至接收瓶內(nèi)液體達(dá)200ml時(shí)，用少量蒸餾水沖洗冷凝管的出液口，將沖洗液收集入接收瓶，拿開接收瓶，停止蒸餾。滴定：用硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定接收瓶中溶液至酒紅色。空白實(shí)驗(yàn)：在測定樣品的同時(shí)，進(jìn)行空白試驗(yàn)，即除不加樣品外，其他過程和樣品的測定一樣。分析結(jié)果（V—V）Xc（H+）X0.014X6.380W= X100mX25/100式中：w—樣品中蛋白質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%V—滴定時(shí)消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mlV—空白試驗(yàn)消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml0c（H+）—硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液中H+的濃度，mol/Lm—樣品質(zhì)量，g0.014—氮原子的摩爾質(zhì)量,kg/mol6.38—氮換算為乳蛋白質(zhì)的系數(shù)方法二（基準(zhǔn)法）：凱氏定氮儀法儀器：凱氏定氮儀電子天平：精度為0.1mg試劑：10%氫氧化鈉溶液（其它同半微量凱氏定氮法）測定步驟：3.1樣品的稱?。涸谙苤蟹謩e加入0.5gCuSO、5gKSO（或廠家提供消化4 2 4藥片），用減量法準(zhǔn)確稱取樣品（原奶、純牛奶4-5g，其它產(chǎn)品根據(jù)蛋白質(zhì)的含量稱取。）于消化管中，傾倒樣品時(shí)盡量使樣品不掛在消化管的頸口部。3.2消化：1） 在加好樣品的消化管中加入15ml濃硫酸混合，放入消化器，蓋緊。2） 打開消化器上的總開關(guān)，將加熱旋鈕調(diào)到6檔。如果只用一組消化管，則將另一組加熱旋鈕關(guān)閉（擰到“OFF”并將排氣口密封）。3） 當(dāng)消化管中產(chǎn)生黑煙后，打開抽洗機(jī)開關(guān)（先把10%的氫氧化鈉溶液加入吸收瓶中）。4） 當(dāng)消化管中沒有黑煙或黑煙很少時(shí)，將加熱旋鈕打到9-10檔，繼續(xù)消化。5） 當(dāng)消化管中溶液變綠時(shí)，繼續(xù)消化60-90分鐘，停止加熱（加熱旋鈕調(diào)到“OFF”，并關(guān)掉消化器上的總開關(guān)）。6） 不要關(guān)閉清洗器，直到消化管中不再冒煙時(shí)，將清洗器關(guān)閉。3.3蒸餾：1） 首先打開冷卻水龍頭，再打開蒸餾儀的開關(guān)，預(yù)熱。2） 利用“UP”或“DOWN”鍵，將光標(biāo)移至“PREHEATING（預(yù)熱）”，再按“START”鍵，預(yù)熱時(shí)間為2分鐘。3） 預(yù)熱完畢后，將光標(biāo)移至“CIEANING”，按“START”鍵進(jìn)行清洗。4） 清洗完畢后，將光標(biāo)移至“DISTILLATION（蒸餾）”，按“ENTER”鍵。5） 設(shè)定板面上顯示的項(xiàng)目，先將光標(biāo)移至要設(shè)定的項(xiàng)目上，按“EDIT”鍵，然后按“UP”和“DOWN”鍵，以增減體積數(shù)，設(shè)定結(jié)束按“ENTER”鍵。6） 所有項(xiàng)目設(shè)定完畢后，放好接收瓶，并固定消化管，按“ENTER”鍵開始蒸餾。7） 蒸餾完畢后，按以上步驟蒸餾下一個(gè)樣品，直到全部蒸餾完畢。按“ESC”鍵，回到最初的操作面板，將光標(biāo)移到“CLEANING”鍵，按“START”鍵，進(jìn)行清洗。4.4滴定：1） 打開電位滴定儀上的開關(guān)。2） 校準(zhǔn)：連續(xù)按“MODE”鍵，直到屏幕顯示MODE CAL再按“ENTER”鍵，屏幕顯示CAL ******將一種緩沖溶液放在磁力攪拌器上，并放入磁子，把電極插入溶液中，打開開關(guān)。按“START”鍵屏幕顯示cal.temp 25.0°C輸入目前溶液溫度，再按“ENTER”鍵，屏幕顯示TOC\o"1-5"\h\zbuffer1PH 7.00輸入在目前溫度下緩沖溶液對應(yīng)的PH值，然后按“ENTER”鍵屏幕會顯示電壓值，當(dāng)其不變動時(shí)，屏幕顯示buffer2PH 470F將電極放入第二個(gè)緩沖溶液中，并輸入目前溫度下的PH值，再按“ENTER”鍵，當(dāng)電壓值穩(wěn)定后，屏幕顯示PH(as)6.89slope0.985關(guān)閉攪 —注：框中數(shù)值為舉例說明。測量按“MODE”鍵，直到屏幕顯示如果屏幕顯示的不是PH，請按“SELECT”鍵選擇，直到顯示PH,然后按“ENTER”鍵，屏幕顯示SETPH ******b.按“PARAMETERS"鍵，屏幕顯示>SETI按“ENTER”鍵，屏幕顯示EPatPH OFF輸入滴定終點(diǎn)eg.EPatPH 4.60然后按“ENTER”鍵dynamics OFF輸入“2”，然后按“ENTER”鍵max.rate 10.0ml/min|按“ENTER”鍵min.rate 25.0ul/min再按“QUIT”鍵。將被測溶液放到攪拌器上，放入磁子，打開開關(guān)，按“START”鍵，開始滴定。滴定結(jié)束后，先關(guān)掉攪拌器，取出電極和滴定管，再關(guān)閉滴定儀上的開關(guān)。結(jié)果表述：樣品中的蛋白質(zhì)含量(g/100g)=(V-V)Xc(H+)X0.014X6.38/m0式中：V：滴定時(shí)消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液得體積，mlV空白實(shí)驗(yàn)消耗硫酸標(biāo)液的體積，ml0C(H+)：硫酸標(biāo)液中H+濃度，mol/lm：樣品的質(zhì)量，0.014：氮原子的摩爾質(zhì)量，kg/mol6.38:氮換算為乳蛋白質(zhì)的系數(shù)注意事項(xiàng)：消化前檢查抽洗機(jī)的堿液是否需要更換，管路、濾網(wǎng)是否堵塞。蒸餾前必須先打開冷凝水。蒸餾前檢查蒸餾水、氫氧化鈉、硼酸溶液是否夠用。使用前校準(zhǔn)電極，但每天蒸餾完畢后必須將電極浸泡在蒸餾水中。方法三：儀器法(引用于IDF141C：2000)儀器：120型(或50型)全組份分析儀、40ml燒杯方法取約40ml、20-40°C經(jīng)過濾、混勻的牛乳樣品于燒杯中，將燒杯放在全組份分析儀的吸樣管下，選擇相應(yīng)的檢測程序，按檢測鍵，待電腦顯示屏出現(xiàn)檢測結(jié)果時(shí)，即可讀數(shù)。三、全乳固體含量的測定方法一（基準(zhǔn)法）：常壓干燥法儀器設(shè)備電子天平：精度為0.1mg稱量皿（鋁皿或玻璃皿）：配有移動蓋，直徑為50-70mm，高度為25mm干燥器：配有有效干燥劑恒溫干燥箱：可控制恒溫在102±2C,烘箱中的溫度應(yīng)均勻恒溫水浴鍋10ml吸管試劑：海砂:適用性測試（1） 將約20g海砂同短玻璃棒一起放于一皿盒中，然后敞蓋在102±2C烘箱中，至少干燥2h。把皿盒蓋蓋后放入干燥器中冷卻至室溫后稱量，準(zhǔn)至0.1mg.（2） 用5ml水將海砂潤濕，用短玻璃棒混合海砂和水，將它們再次放入烘箱中烘4h。把皿盒蓋蓋后放入干燥器中冷卻至室溫后稱量，準(zhǔn)至0.1mg.兩次稱量的差不應(yīng)超過0.5mg.（3） 如果兩次稱量的質(zhì)量差超過0.5mg,則需對海砂進(jìn)行下面的處理后，才能使用：讓海砂在6mol/1的鹽酸溶液煮沸30min,經(jīng)常攪拌。盡可能地傾出上清液，用水洗滌海砂，直到不再有酸。再用6mo1/1氫氧化鈉溶液煮沸30min,經(jīng)常攪拌，用水洗滌海沙,直到不再有堿。然后重復(fù)進(jìn)行適用伊利液態(tài)奶事業(yè)部生鮮牛乳檢驗(yàn)方法性測試。步驟3.1取潔凈稱量皿，內(nèi)加10.0g海砂及一根小玻璃棒，置于102±2°C烘箱中，干燥0.5-1.0h后取出，放入干燥器內(nèi)冷卻0.5h后稱量，應(yīng)重復(fù)干燥至恒重。3.2準(zhǔn)確稱取5g左右樣品于稱量皿中，用小玻棒攪勻放在沸水浴上蒸干，并隨時(shí)攪拌。3.3將蒸干后的稱量皿用濾紙搽凈水垢置于102±2C烘箱中干燥3h后蓋好取出，放入干燥器中，冷卻至室溫稱重（準(zhǔn)至0.1mg）。3.4再將稱量皿置于102±2C烘箱中干燥0.5h后蓋好取出，放入干燥器中，冷卻至室溫稱重（準(zhǔn)至0.1mg）。3.5重復(fù)上述操作，直到兩次連續(xù)稱量質(zhì)量之差不超過0.5mg。結(jié)果表示樣品的水份含量（％）=（m-m）/mX10021式中：m—樣品的重量，gm—稱量皿加海砂、玻棒的重量，g1m—稱量皿加海砂、玻棒和樣品干燥后的重量，g2方法二：儀器法（IDF141C：2000）儀器：120型（或50型）全組份分析儀、40ml燒杯2．方法取約40ml、20-40C經(jīng)過濾、混勻的牛乳樣品于燒杯中，將燒杯放在全組份分析儀的吸樣管下，選擇相應(yīng)的檢測程序，按檢測鍵，待電腦顯示屏出現(xiàn)檢測結(jié)果時(shí)，即可讀數(shù)。四、非脂乳固體含量的測定方法一：計(jì)算法用基準(zhǔn)法測得樣品全脂乳固體、脂肪含量后，依據(jù)公式進(jìn)行計(jì)算。非脂乳固體=全脂乳固體-脂肪方法二：儀器法（IDF141C：2000）儀器：120型（或50型）全組份分析儀、40ml燒杯2．方法取約40ml、20-40°C經(jīng)過濾、混勻的牛乳樣品于燒杯中，將燒杯放在全組份分析儀的吸樣管下，選擇相應(yīng)的檢測程序，按檢測鍵，待電腦顯示屏出現(xiàn)檢測結(jié)果時(shí)，即可讀數(shù)。五、酸度的測定方法一：基準(zhǔn)法原理用0.1mol/L氫氧化鈉滴定牛乳至PH為8.3，由此消耗的0.1mol/L氫氧化鈉溶液毫升數(shù)可計(jì)算出牛乳的酸度。儀器堿式滴定管（0-10刻度，精確到0.05ml）25ml量筒c10ml刻度吸管PH計(jì)：帶玻璃電極合適當(dāng)?shù)膮⒈入姌O，已用PH7和PH的緩沖溶液校準(zhǔn)，可讀至0.01PH單位。40ml燒杯試劑0.1mol/LNaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液：防止二氧化碳的滲入煮沸冷卻的蒸餾水方法吸取10ml牛乳置于干燥的40ml燒杯中，加入煮沸冷卻的蒸餾水20ml，加入磁力攪拌器，進(jìn)行攪拌。用滴定管向燒杯中加入氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，直到PH達(dá)到8.3（用PH計(jì)測定），滴定過程中始終用磁力攪拌器進(jìn)行攪拌，整個(gè)滴定過程應(yīng)在lmin內(nèi)完成。分析結(jié)果表述A二VXCX10A：牛乳的酸度，0TV：消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù)，mlC：氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L方法二：常規(guī)法儀器堿式滴定管（0-10刻度，精確到0.05ml）l50ml三角瓶25ml量筒1ml刻度吸管、10ml刻度吸管試劑0.1mol/LNaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液：防止二氧化碳的滲入。酚酞溶液：取0.5g酚酞溶于75ml體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇中，加入20ml水,用0.1mol/LNaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液調(diào)至加入一滴立即變成粉紅色，再加水定容至100ml。煮沸冷卻的蒸餾水終點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)色：在加好樣品和水的三角瓶中加入3滴0.005%堿性品紅溶液，搖勻即得滴定終點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)色（2小時(shí)更換一次）。方法吸取10ml牛乳置于干燥的150ml三角瓶中，加入煮沸冷卻的蒸餾水20ml、酚酞溶液0.5ml，用0.1mol/LNaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴至微紅色（與標(biāo)準(zhǔn)色相比較）,整個(gè)滴定過程需在45秒內(nèi)完成，在30秒內(nèi)不褪色為止。記錄消耗的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的毫升數(shù)。分析結(jié)果表述A二VXCX10A：牛乳的酸度，0TV：消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù)，mlC：氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L六、 PH值的測定儀器酸度計(jì)或電位滴定儀（測定前均需校準(zhǔn)）方法將酸度計(jì)的電極插入裝有樣品的容器中（樣品在水浴中保持至25°C或?qū)⑺岫扔?jì)電極進(jìn)行溫度補(bǔ)償），待顯示數(shù)字穩(wěn)定后，讀數(shù)。七、 雜質(zhì)度的測定儀器旋片式真空泵、抽濾瓶、真空瓶、24mm布氏漏斗、雜質(zhì)度棉板方法將干凈雜質(zhì)度棉板放入布氏漏斗中，插上真空泵電源，取混勻的液體乳樣500ml,預(yù)熱至30-40C全部通過棉板抽入抽濾瓶中，用無雜質(zhì)水沖洗盛樣容器及附于過濾板上的牛乳，然后用此棉板與標(biāo)準(zhǔn)板對照，即為此樣品雜質(zhì)度。當(dāng)過濾板上雜質(zhì)的含量介于兩個(gè)級別之間時(shí)，判定為雜質(zhì)含量較多的級別。八、 收奶溫度的測定取樣后，立即將校準(zhǔn)過的溫度計(jì)插入樣品中，待溫度計(jì)溫度不再變化時(shí)（一般為lmin左右），讀取讀數(shù)。九、酒精實(shí)驗(yàn)生鮮牛乳在酸度升高后，與等體積中性酒精混合后會出現(xiàn)絮片。酸度值可根據(jù)生成絮片時(shí)對應(yīng)的乙醇濃度可粗略地判定出來，見表1表1酒精濃度不出現(xiàn)絮片的參考酸度68o2OoT以下70o19oT以下72o18oT以下（包括18oT）75o16oT以下（包括16oT）儀器平皿，直徑80-90mm溫度計(jì)量筒，25ml吸管，2ml酒精計(jì)試劑所有試劑均應(yīng)為分析純；實(shí)驗(yàn)用水至少應(yīng)是蒸餾水。酒精：根據(jù)需要用分析純中性乙醇配制68°、70°、72?；?5°的酒精。注：如酒精呈酸性，可用0.1mol/LNaOH進(jìn)行中和至稍有粉色，中和時(shí)推薦使用5g/L酚酞指示劑。方法準(zhǔn)確吸取2ml牛乳于潔凈干燥的平皿中。注：該步驟開始后，應(yīng)將試驗(yàn)連續(xù)進(jìn)行下去直至完成，中間不得間斷。在加有乳樣的平皿中加入2ml75°酒精（或根據(jù)需要使用68°，或70°或72°酒精），要邊加邊搖，使酒精與牛乳均勻混合，觀察是否有絮片（或微細(xì)顆粒）生成。注：仲裁試驗(yàn)必須在20°C條件下進(jìn)行。7.5結(jié)果判定出現(xiàn)絮片的牛乳為酒精試驗(yàn)陽性乳，不出現(xiàn)絮片的牛乳為酒精試驗(yàn)陰性乳。十、煮沸實(shí)驗(yàn)取50ml乳樣于250ml三角瓶中，置于電爐上加熱，加熱過程中不停搖動。當(dāng)三角瓶中的牛乳沸騰后，將三角瓶取下，觀察瓶底白色顆粒的多少（與《生鮮牛乳煮沸實(shí)驗(yàn)顆粒標(biāo)準(zhǔn)板》進(jìn)行比較）。摻假的測定一、食鹽原理鮮乳中氯化物與硝酸銀反應(yīng)生成氯化銀沉淀，用鉻酸鉀作指示劑，當(dāng)乳中的氯化物與硝酸銀作用后，過量的硝酸銀與鉻酸鉀生成赭紅色（磚紅色）鉻酸銀。儀器試管：18X180mm試管架吸管：2ml試劑配制硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液：取分析純硝酸銀置105°C烘箱內(nèi)干燥30分鐘，取出放在干燥器內(nèi)冷卻后，準(zhǔn)確稱取9.6克，用蒸餾水洗入1000ml棕色容量瓶中，搖勻、定容。100g/L鉻酸鉀溶液：取10g鉻酸鉀，溶于100ml蒸餾水中。方法取2ml乳樣于潔凈的試管中加鉻酸鉀溶液5滴，搖勻，再準(zhǔn)確加入9.6g/LAgNO溶液1.5ml,搖勻，觀察結(jié)果。3結(jié)果判定正常乳：呈磚紅色摻假乳：土黃色f鮮黃色（a、b、c級）二、蔗糖原理蔗糖在酸性溶液中水解產(chǎn)生的果糖與溶于強(qiáng)酸內(nèi)的間苯二酚溶液加熱后顯紅色沉淀反應(yīng)。儀器試管，18X180mm試管架吸管，2ml可調(diào)電爐試劑配制稱取間苯二酚0.4克用少量蒸餾水溶解，加濃鹽酸200ml,再加蒸餾水稀釋至600ml置于棕色瓶中，室溫保存三個(gè)月，冰箱保存半年。方法取間苯二酚鹽酸溶液1.5ml于小試管中，加鮮乳5滴，加熱煮沸2—3分鐘，觀察結(jié)果。結(jié)果判斷正常乳：淡棕黃色摻蔗糖乳：>0.1%：淺桔紅色 >0.3%：桔紅——紅色>0.5%：深桔紅——磚紅色 >1%：磚紅色混濁甚至沉淀注意事項(xiàng)：鹽酸濃度要準(zhǔn)確，否則影響顯色反應(yīng)。試劑配制及貯存過程中被有機(jī)物污染，特別是糖類污染；若試劑變?yōu)榧t色即不能使用。加熱時(shí)間過長，其它醛類糖也能產(chǎn)生淺紅色的反應(yīng)。三、尿素原理尿素與二乙?！吭谒嵝詶l件下，經(jīng)鎘離子（或三價(jià)鐵離子）的催化產(chǎn)生縮合，并在氨基硫脲存在下，生成3，5，6—三甲基—1，2，4三胺的紅色復(fù)合物。儀器試管，18X180mm試管架吸管，2ml可調(diào)電爐試劑配制酸性試劑：在1升容量瓶中加入蒸餾水約100ml,然后加入濃硫酸44ml及85%磷酸66ml，冷卻至室溫后，加入硫氨脲30mg，硫酸鎘2克溶解后用蒸餾水稀釋至1000ml。貯棕色瓶中冰箱內(nèi)保存半年不變。20g/L%二乙?！吭噭悍Q取二乙?！?克，溶于100ml蒸餾水中。貯棕色瓶中放置冰箱內(nèi)，可保存半年不變。應(yīng)用液：取酸性試劑90ml加二乙酰 肟10ml混合均勻，即可使用。方法取應(yīng)用液1—2ml于試管中，加鮮乳一滴加熱煮沸約1分鐘觀察結(jié)果。結(jié)果判定正常乳：無色或微紅色摻入尿素或尿的乳，立即呈深紅色。摻入量越大，顯示越快，紅色越深；注正常乳煮沸時(shí)間超過2分鐘，也可出現(xiàn)淡紅色。四、食堿方法一：溴麝香草酚蘭法原理鮮乳中如摻堿，可使指示劑變色，由顏色的不同，大略判斷加堿量的多少。儀器試管，18X180mm試管架吸管，2ml試劑配制取0.04克溴百里香草酚蘭（溴麝香草酚蘭）溶于100ml分析純乙醇中。方法取乳樣約2ml于小試管中，沿管壁慢慢加入指示劑約0.5ml，將試管輕輕轉(zhuǎn)動幾圈，然后垂直放置2分鐘后，觀察指示劑與樣品接觸面顏色變化。結(jié)果判定正常奶：黃色摻堿奶：0.03%黃綠色0.1%綠色0.5%青綠色1.0%青色注意事項(xiàng)：0.05%淡綠色0.3%深綠色0.7%淡青色1.5%深青色摻水乳（因水的PH大都在7—9之間）、摻洗衣粉乳（因洗衣粉中加有碳酸鈉）、乳房炎乳（因?yàn)榧?xì)菌分解乳酪蛋白產(chǎn)生氨及乳房代謝功能的改變而造成PH值升高）與摻堿指示劑的接觸面均可呈黃綠至淡綠色。方法二：玫瑰紅酸法試劑配置玫瑰紅酸（乙醇溶液）：稱取0.05g玫瑰紅酸溶于100ml分析純乙醇中。方法于盛有2ml牛乳的試管中加入2ml玫瑰紅酸溶液，搖勻，觀察顏色變化。結(jié)果判定乳中如無堿性物質(zhì)則呈黃色，有堿性物質(zhì)則呈玫瑰紅色，其加入量與顏色的深淺成正比。五、硝酸鹽、亞硝酸鹽(定性檢測方法)1．亞硝酸鹽1.1儀器試管，①18X180mm試管架吸管，1ml1.2試劑對氨基苯磺酸10ga—萘胺 1g酒石酸 89g上述三種試劑分別稱好后，在研缽中研碎，在棕色試劑瓶中干燥保存。或哈爾濱乳品中心亞硝酸鹽試劑。1.3方法取亞硝酸鹽試劑一耳勺(0.04-0.05g)于入試管中，加入被檢乳樣1ml,振蕩溶解，1-2分鐘觀察判定。4結(jié)果判定正常乳無色，如摻亞硝酸鹽乳則由摻入量的不同而呈現(xiàn)出微粉——水粉——粉紅。2．硝酸鹽2.1原理鮮乳中的硝酸鹽經(jīng)氫還原成亞硝酸鹽后，再與對氨基苯磺酸中和甲一苯胺作用，形成紅色的偶氮化合物。2.2儀器試管，①18X180mm試管架吸管，1ml2.3試劑哈爾濱乳品檢測中心的鮮奶硝酸鹽試劑方法取硝酸鹽試劑一耳勺(0.04-0.05g)倒入試管中，加入被檢乳樣1ml,振蕩溶解，1-2分鐘觀察判定。結(jié)果判定如亞硝酸鹽與硝酸鹽顯色程度一樣，說明乳樣中只有亞硝酸鹽，如硝酸鹽的顯色重于亞硝酸鹽，則說明乳樣中不但有亞硝酸鹽而且有硝酸鹽，如無色，則即無硝酸鹽也無亞硝酸鹽。注意事項(xiàng)試管用前要用不含亞硝酸鹽或硝酸鹽的水刷洗，以防影響結(jié)果。低溫季節(jié)化驗(yàn)時(shí)，加乳樣后應(yīng)加溫至室溫觀察。注意硝酸鹽、亞硝酸鹽試劑生產(chǎn)日期(保存期三年)，避光貯存，用后馬上蓋嚴(yán)，防透空氣。六、硫酸鹽原理鮮乳中的硫酸鹽與氯化鋇形成硫酸鋇沉淀，過量的鋇離子與玫紅酸鈉反應(yīng)生成玫紅酸鋇呈玫瑰紅色。若鮮乳中摻入硫酸鹽后，因氯化鋇被硫酸鹽全部沉淀，無游離的鋇離子，因而不能與玫紅酸反應(yīng)，故呈黃色。儀器試管，18X180mm試管架吸管，2ml試劑配制a.稱取氯化鋇3克，加蒸餾水少許溶解后，加濃鹽酸20ml,加蒸餾水至250ml。b.玫紅酸鈉1克，氯化鈉49克，干燥研磨至粉末狀，密閉保存。方法取乳2ml于小試管中，加入玫紅酸鈉指示劑約0.3克混勻，加氯化鋇溶液4—5滴混勻，放置3—5分鐘后觀察結(jié)果。結(jié)果判定正常乳：呈玫瑰紅色最低檢出量：1/1000，摻入硫酸鹽乳呈黃色或土黃色。注意事項(xiàng)：嚴(yán)格控制酸度，酸度過大易褪色，酸度不足不顯色。對不能判定乳樣可取乳10ml，加10%氯化鋇溶液0.5一1ml離心沉淀，正常鮮乳沉淀物很少，摻硫酸鹽乳有較多量硫酸鋇沉淀。七、飴糖（糖稀）及葡萄糖1.原理飴糖中的葡萄糖被葡萄糖氧化酶氧化生成葡萄糖酸及過氧化氫；后者在過氧化物酶的作用下，使還原性氧受體領(lǐng)聯(lián)甲苯銨氧化成蘭色化合物。方法使用醫(yī)院檢驗(yàn)?zāi)蛱堑哪蛱窃嚰垳y試。八、米湯、淀粉類1.原理淀粉遇碘呈蘭色反應(yīng)。儀器試管，18X180mm吸管，2ml酒精燈試劑配制碘化鉀20g、碘5g先用大約20ml的蒸餾水溶解，然后定容至250ml。方法取2ml乳樣于試管中，加熱煮沸，觀察乳液是否有沉積現(xiàn)象，然后加入3-5滴KI—I試劑，觀察。判定結(jié)果正常乳呈現(xiàn)淡黃色。摻淀粉乳呈現(xiàn)蘭色。摻糊精粉乳呈現(xiàn)紅色或紫色。九、豆?jié){、豆餅水1.原理：牛奶中加入豆?jié){、豆餅水，由于其中有皂角素，加入NaOH或KOH生成黃色物質(zhì)。2.試劑：28%NaOH或KOH方法：取牛奶5ml，加5mlKOH溶液，陽性顯黃色，此試驗(yàn)應(yīng)做陰、陽性對照試驗(yàn)。方法一：三氯化鐵方法原理甲醛常被作為防腐劑而摻入牛乳中，鮮乳中的甲醛在酸性溶液中與三氯化鐵產(chǎn)生紫色反應(yīng)。儀器吸管，2ml、0.5ml試管，18X180mm試管架可調(diào)式電爐試劑配制稱取0.2g三氯化鐵溶于100ml濃鹽酸中。方法取乳樣2ml于小試管中，加入三氯化鐵鹽酸溶液0.5ml,混勻于沸水中水浴1分鐘，觀察顏色。結(jié)果判定正常乳：呈黃色或淡黃褐色。摻甲醛乳：呈紫色。最低檢出量1/4000。有些涂料中含有甲醛或甲醛的衍生物，亦可檢出。方法二：溴化鉀—濃硫酸方法1.儀器吸管，2ml、0.5ml試管，18X180mm試管架試劑濃硫酸（分析純）溴化鉀（分析純）方法取3ml濃HSO放入試管中，加入溴化鉀晶粒幾粒（0.004g）,沿試管壁24徐徐加入待檢驗(yàn)乳樣1ml，勿使乳樣與酸液混合。結(jié)果判定在牛乳與酸液的接觸面如果出現(xiàn)紫色，便證明甲醛存在。不含甲醛的牛乳接觸面呈現(xiàn)淡黃褐色，當(dāng)甲醛含量較大，紫色環(huán)會立刻出現(xiàn)或經(jīng)1-2min后出現(xiàn)。衛(wèi)生指標(biāo)的測定樣品的采取采樣時(shí)應(yīng)注意部位等代表性，散裝的樣品應(yīng)放于滅菌容器中，及時(shí)送檢。鮮乳在氣溫較高情況下應(yīng)進(jìn)行冷藏，不得使用任何防腐劑（培養(yǎng)法）。一、細(xì)菌總數(shù)方法一：平板法（GB4789.2-94）原奶：將檢樣搖勻，無菌操作將檢樣25ml放于含有225ml滅菌生理鹽水三角瓶中或以無菌操作用1ml滅菌吸管吸取檢樣1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管中，振搖混勻；作為1:10的稀釋液；做10倍遞增稀釋，遞增稀釋一次,即換用1支1ml滅菌吸管。選擇適合的稀釋倍數(shù);同時(shí)做空白及環(huán)境對照試驗(yàn)。1．培養(yǎng)基和試劑（1） 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)：營養(yǎng)瓊脂按說明制備、分裝于300ml三角瓶中，高壓滅菌（121°C、15分鐘）。（2） 生理鹽水：8.5g氯化鈉溶于1000ml蒸餾水中，分裝、高壓滅菌（121C、15-20分鐘）。2．操作程序1） 對樣品進(jìn)行編號、記錄；原料奶選取10-3至10-5三個(gè)稀釋度的樣品稀釋液。2） 培養(yǎng)基準(zhǔn)備檢查預(yù)先滅菌過的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基是否處于正常、可用狀態(tài)。將滅菌營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用微波爐加熱加in或融化后，在45C水浴中保溫待用。3） 接種培養(yǎng)在無菌操作的條件下，在一個(gè)滅菌平皿內(nèi)傾入15mL營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并暴露至接種過程結(jié)束，標(biāo)記后以作為環(huán)境對照品。按樣品編號在滅菌平皿底部作相應(yīng)的標(biāo)記，并記錄在“微生物檢驗(yàn)操作表”中。在無菌操作條件下，用1ml的滅菌吸管移取1ml選定樣品稀釋液或樣品原樣至滅菌平皿內(nèi)。同上對同一樣品重復(fù)操作即每個(gè)選定的樣品稀釋度做兩個(gè)平皿。按以上步驟，以1毫升無菌生理鹽水作為空白操作對照。在無菌操作條件下，將約15ml的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入樣品平皿中，將平皿置于操作臺面上輕輕轉(zhuǎn)動，使樣品和培養(yǎng)基混合均勻。待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，即保持有標(biāo)記和培養(yǎng)基的一面向上。將所有平皿（包括空白和環(huán)境對照）置于36±1°C的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，保持48±2小時(shí)。4） 菌落計(jì)數(shù)方法做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀查，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。5） 菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30—300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板，應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù)，其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)板后乘2代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌生長時(shí)（菌落之間無明顯界線），若僅有一條鏈，可視為一個(gè)菌落；若果有不同來源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)。稀釋度的選擇應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30—300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。若有兩個(gè)稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30—300之間，則視兩者之比來決定。若其比值小于或等于2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)；若大于2，則報(bào)告其中較小的數(shù)字。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300,則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。W.若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。V.若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之?？?若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30—300之間，其中一部分大于300或小于30時(shí)，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。③菌落數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可有10的指數(shù)來表示。方法二：儀器法（僅適用于生鮮牛乳）1）儀器設(shè)備BactoScanFC型微生物檢測儀、微生物采樣小瓶2）方法（見FC微生物快速檢測儀操作規(guī)程）取牛乳樣放于吸管下，設(shè)定檢測樣品為NORMAL，并輸入樣品數(shù)據(jù)，按

“STORE”鍵，再按MEASURE鍵進(jìn)行測定，待屏幕出現(xiàn)檢測結(jié)果時(shí)，即可讀數(shù)。二、耐熱芽孢的測定（利樂提供）1）設(shè)備和材料（1） 生化培養(yǎng)箱：55±1°C（2） 高壓蒸汽滅菌鍋恒溫水浴鍋：46±1°C天平電爐吸管：1ml和10ml，標(biāo)有0.1ml單位的刻度三角瓶：平皿：皿底直徑為9cm試管：15X150mm酒精燈試管架、試管筐滅菌刀或剪刀、滅菌鑷子酒精棉球記號筆白瓷缸(用于煮開水)(16)溫度計(jì)：1-100C(17)超凈工作臺培養(yǎng)基和試劑營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂按說明制備、分裝于300ml三角瓶中，高壓滅菌(121C、15分鐘)。生理鹽水：8.5g氯化鈉溶于1000ml蒸餾水中，分裝后高壓滅菌121C、15分鐘。方法用10ml滅菌吸管吸取5ml乳樣加入滅菌試管中。在另一支試管中加入與乳樣等量的水。在裝水的試管中插一根溫度計(jì)。將裝有乳樣和水的試管同時(shí)放入沸水浴中(在電爐上用白瓷缸把水煮沸，伊利液態(tài)奶事業(yè)部生鮮牛乳檢驗(yàn)方法并保持沸騰)。⑸直至“裝水試管”的溫度達(dá)到100°C，計(jì)時(shí)10分鐘(如果水不到100°C就沸騰，則等候時(shí)間需延長；或在水中加入鹽以提高沸點(diǎn)溫度，但要避免奶樣沸騰)。10分鐘后，取出試管，用冷水冷卻乳樣至室溫。用1ml滅菌吸管分別吸1ml冷卻后混勻的乳樣于兩個(gè)滅菌平皿中。及時(shí)將涼至46°C的營養(yǎng)瓊脂注入平皿約15ml，并轉(zhuǎn)動平皿使之混勻；同時(shí)做環(huán)境對照試驗(yàn)。⑼待營養(yǎng)瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板。置于55±1°C的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72土2h，取出計(jì)數(shù)(同細(xì)菌菌落測定計(jì)數(shù)方法)。三、芽孢總數(shù)的測定儀器和材料生化培養(yǎng)箱：36±1°C高壓蒸汽滅菌鍋恒溫水浴鍋：46±1°C天平電爐吸管：1ml和10ml，標(biāo)有0.1ml單位的刻度三角瓶：容量為250ml、300ml平皿：皿底直徑為9cm試管：15X150mm酒精燈試管架、試管筐滅菌刀或剪刀、滅菌鑷子酒精棉球記號筆白瓷缸(用于煮開水)(16)溫度計(jì)：1T00°C(17)超凈工作臺培養(yǎng)基和試劑(1)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂按說明分裝于300ml三角瓶中，高壓滅菌(121C、15分鐘)。(2)生理鹽水：8.5g氯化鈉溶于1000ml蒸餾水中，分裝、高壓滅菌(121C、15-20分鐘)。方法用10ml滅菌吸管吸取5ml乳樣加入滅菌試管中。在另一支試管中加入與乳樣等量的水。在裝水的試管中插一根溫度計(jì)。將裝有乳樣和水的試管同時(shí)放入熱水中(在電爐上用白瓷缸把水煮至有小氣泡時(shí))。⑸直至“裝水試管”的溫度達(dá)到80C，計(jì)時(shí)，保溫10分鐘。10分鐘后，取出試管，用冷水冷卻奶樣至室溫。用1ml滅菌吸管分別吸1ml冷卻后混勻的乳樣于兩個(gè)滅菌平皿中。及時(shí)將涼至46C的營養(yǎng)瓊脂注入平皿約15ml，并轉(zhuǎn)動平皿使之混勻；同時(shí)做環(huán)境對照試驗(yàn)。⑼待營養(yǎng)瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板。置于36土1C的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72土2h，取出計(jì)數(shù)(同菌落總數(shù)測定計(jì)數(shù)方法)。四、嗜冷菌總數(shù)的測定方法一：標(biāo)準(zhǔn)方法(IDF101A：1991)設(shè)備和材料低溫培養(yǎng)箱：可控4°C—6°C2） 培養(yǎng)基和試劑營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂按說明分裝于300ml三角瓶中，高壓滅菌（121°C、15分鐘）。生理鹽水：8.5g氯化鈉溶于1000ml蒸餾水中，分裝后高壓滅菌（121°C、15-20分鐘）。3） 操作同細(xì)菌總數(shù)測定。4） 培養(yǎng)溫度及時(shí)間置于4-6C的培養(yǎng)箱（或冰箱保鮮室）內(nèi)培養(yǎng)10天，取出計(jì)數(shù)（同細(xì)菌總數(shù)測定計(jì)數(shù)方法）。方法二：快速測定方法（IDF132A:1991）1）設(shè)備培養(yǎng)箱：21C±0.5°C2） 培養(yǎng)基酵母提取物2.5g 胰蛋白胨5.0g 脫脂奶粉1.0g葡萄糖1.0g 瓊脂10-15g 蒸餾水1000分裝于300ml三角瓶中，高壓滅菌（121°C、15分鐘）。PH值為6.93） 操作同細(xì)菌總數(shù)測定。4） 培養(yǎng)溫度及時(shí)間在21C±0.5°C下恒溫培養(yǎng)25h（需嚴(yán)格控制溫度、時(shí)間），取出計(jì)數(shù)（同細(xì)菌總數(shù)測定計(jì)數(shù)方法）五、乳房炎乳檢測（國標(biāo)法）儀器吸管，0.5ml、5ml白色平皿試劑配制稱取60g碳酸鈉（NaCO.10HO）溶于100毫升蒸餾水中，稱取40g無水32氯化鈣溶于300毫升蒸餾水中。二者須均勻攪拌、加溫、過濾，然后將二種濾液傾注一起，予以混合、攪拌、加溫和過濾，于第二次濾液中加入等量的15%氫氧化鈉溶液，繼續(xù)攪拌、加溫，過濾即為試液。加入溴甲酚紫于試液內(nèi)，有助于結(jié)果的觀察。試劑宜放在棕色玻璃瓶中保存。方法吸取乳樣3ml于白色平皿中，加0.5毫升試液，立即回轉(zhuǎn)混合，約10s后觀察結(jié)果。結(jié)果判定現(xiàn)象結(jié)果無沉淀及絮片—（陰性）稍有沉淀發(fā)生土（可疑）肯定有沉淀（片條）+邙日性）發(fā)生粘稠性團(tuán)塊并繼之分為薄片++（強(qiáng)陽性）有持續(xù)性的粘稠性團(tuán)塊（凝膠）+++（強(qiáng)陽性）六、體細(xì)胞的檢測方法一：顯微鏡法（手工校準(zhǔn)Somacount150校準(zhǔn)方法）一、 配制500ml染色液所用藥品如下：2.5g美藍(lán)，280ml95%的乙醇，200ml二甲苯，20ml冰醋酸二、 操作：1、將前三種藥品放入一個(gè)500ml帶有螺絲口的棕色瓶內(nèi)，放于室溫至少兩小時(shí)溶解，輕輕搖動（防止爆炸），放入4-7°C冰箱內(nèi)20小時(shí)（過夜）。趁溫度低時(shí)加入20ml冰醋酸，輕輕搖動，立刻過濾到另外一個(gè)瓶內(nèi)（去掉未溶美藍(lán),美藍(lán)結(jié)晶），放于冰箱內(nèi)貯存，用時(shí)再過濾到一小瓶內(nèi)。2、準(zhǔn)備樣品：奶樣加熱到40°C使脂肪混勻（上下倒置九次），不能保存太久，最多二星期。分瓶，標(biāo)號、放于冰箱冷藏。3、涂片：涂在正面，通過嗜水處理，涂之前用酒精輕輕檫掉油。4、 用10M移液管移取液體。用一杯40°C蒸餾水洗吸樣管，先拔出來洗干凈，針頭放于水中洗5-6次，易于插拔為止。5、 樣品混勻加熱至40°C，沖洗吸樣管三次。6、 吸樣后擦干凈針頭外部，將樣品放于載玻片上，同一個(gè)樣品涂四次（四個(gè)位置）用曲別針涂勻樣品在片上，放于室溫自然晾干后，在酒精燈上過兩次（二秒），冷卻后染色（可同時(shí)作兩片，背對背放至染液中）。染色四分鐘后，取出，45。角靠放在瓶子上瀝干。7、 準(zhǔn)備兩杯35°C蒸餾水共500ml蒸餾水（溫度重要，否則容易剝離）。第一杯水中速浸2次，第二杯水中速浸2次斜靠于瓶旁涼干，干后即可用顯微鏡讀數(shù)。三、顯微鏡校準(zhǔn)用測微尺加上顯微鏡油放于油鏡下，先將鏡頭挨住鏡片，再調(diào)節(jié)，使之離開鏡片，然后觀察，計(jì)算視野寬度。讀片時(shí)豎走，數(shù)數(shù)計(jì)算面積（直徑X寬度）顯微鏡系數(shù)K= 。注：W為視野寬度，K為確定后，鏡不變，K就不變。記好顯微鏡及鏡頭編號。其中染色較深的算，淺色不算，三次取平均值來校準(zhǔn)設(shè)備。注：本檢驗(yàn)室顯微鏡系數(shù)為 。方法二：體細(xì)胞檢測儀法見體細(xì)胞檢測儀操作規(guī)程。七、抗生素的測定方法一：儀器法儀器：漩渦混合器溫育箱離心機(jī)Charm7600分析儀（或其它儀器Rosa、Snap）13X100mm試管及試管蓋300卩l(xiāng)移液槍及吸嘴10ml移液管醫(yī)用棉簽藥品試劑所用水為蒸餾水。&-內(nèi)酰胺試劑盒鏈霉素試劑盒磺胺試劑盒閃爍液基準(zhǔn)液實(shí)驗(yàn)步驟3.16-內(nèi)酰胺類3.1.1樣品在測試前放冰浴中冷卻至0-7°C。3.1.2將綠藥片加至空試管中，用移液槍加300卩l(xiāng)水，在漩渦混合器上混合10秒鐘打碎藥片。3.1.3加5.0±0.25ml樣品，在漩渦混合器上混合均勻；加黃色藥片立即混合。3.1.4將試管放入溫育箱，85±2C溫育3分鐘。3.1.5以3400轉(zhuǎn)/分離心3分鐘，立即取出試管棄去上清液，用棉簽擦去上層脂肪環(huán)，并保持試管垂直，不碰及底部藥片。3.1.6加300卩l(xiāng)水，在漩渦混合器上將沉淀物充分打碎并混合均勻。3.1.7加3ml閃爍液，加蓋垂直震動直到呈均一霧狀。3.1.8在分析儀上進(jìn)行60秒讀數(shù)，讀?。?4C］上的cpm值。2鏈霉素類3.2.1于試管中加3/4量的樣品離心3分鐘，冷凍至0-7°C。3.2.2于一空試管中加入白色藥片，加300ul水，混合10秒鐘打碎藥片。3.2.3加入步驟1中離心后的樣品5.0土0.25ml（于脂肪層下），加入綠色藥片并立即搖勻。3.2.4將試管放入溫育箱，35±2C溫育3分鐘。3.2.5以3400轉(zhuǎn)/分離心3分鐘，立即取出試管棄去上清液，用棉簽擦去上層脂肪環(huán)，并保持試管垂直，不碰及底部藥片。3.2.6加300ul水，在漩渦混合器上將沉淀物充分打碎并混合均勻。3.2.7加3ml閃爍液，加蓋垂直震動直到呈均一霧狀。3.2.8在分析儀上進(jìn)行60秒讀數(shù)，讀取［3H］上的cpm值。3.3磺胺類先加白色藥片，后加粉紅色藥片，其他過程同B-內(nèi)酰胺類檢測步驟，在分析儀上讀?。?H］上的cpm值。結(jié)果判定4.1測定結(jié)果比基準(zhǔn)值大50以上，可判定為樣品陰性。4.2測定結(jié)果比基準(zhǔn)值大，但差值不足50時(shí)，應(yīng)重新用Charm7600測定一分鐘，如重新測定結(jié)果小于或等于基準(zhǔn)值，則判定為樣品陽性；如測定結(jié)果比基準(zhǔn)值大，則判定為陰性。測定結(jié)果小于基準(zhǔn)值，判定為假陽性，應(yīng)重新測定，如重新測定結(jié)果小于或等于基準(zhǔn)值，則判定為樣品陽性。5基準(zhǔn)值的測定5.1零基準(zhǔn)值5.1.1用100ml40dC的蒸餾水溶解零基準(zhǔn)品，溶解后放至冰浴中15分鐘。5.1.2按各類不同抗生素的檢測方法測定各自的零基準(zhǔn)液，測定3個(gè)cpm值,結(jié)果取平均值，此平均值即為零基準(zhǔn)值。陽性基準(zhǔn)值5.2.1用配制好的零基準(zhǔn)液100ml溶解陽性基準(zhǔn)品，溶解后放至冰浴中15分鐘。按各類不同抗生素的檢測方法測定各自的陽性基準(zhǔn)液，測定6個(gè)cpm值，計(jì)算其平均值，將平均值加平均值的15%即為陽性基準(zhǔn)值。方法二：TTC法（見GB5409-85）注：菌液制備接種操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行如果是干粉菌種應(yīng)在無菌條件下稱取2-3g溶于1000ml滅菌的脫脂乳中。脫脂乳的制備可用脫脂乳粉與水以1：9混合配制而成。制定依據(jù)：八、硝酸鹽、亞硝酸鹽的測定（定量法）原理將樣品溶解于水，沉淀脂肪和蛋白質(zhì)后進(jìn)行過濾。用鍍銅的鎘使一定量的濾液中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，在一定量的未還原的濾液和已還原的濾液中加入磺胺和N-1-萘基-乙二胺二鹽酸鹽，使其顯粉紅色，然后用分光光度計(jì)以538nm的波長測其吸光度。將測得的吸光度與亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度進(jìn)行比較，計(jì)算出樣品中的亞硝酸鹽含量和硝酸鹽還原后的亞硝酸鹽總量；從兩者之間的差值可計(jì)算出硝酸鹽的含量試劑a.去離子水鍍銅鎘粒：直徑0.3-0.8mm硫酸銅溶液：溶解20g五水硫酸銅(CuSO?5H0)于水中，稀釋至1000ml。42鹽酸-氨水緩沖溶液：PH9.60-9.70。用600ml水稀釋75ml濃鹽酸。混勻后,再加入135ml濃氨水，用水稀釋至1000ml混勻。用精密PH計(jì)調(diào)PH值為9.60-9.70。鹽酸溶液：c(H+)約為2mol/L，用水將160ml的濃鹽酸稀釋至1000ml。鹽酸溶液：c(H+)約為0.1mol/L，將50ml2mol/L的鹽酸溶液用水稀釋至1000ml。沉淀蛋白和脂肪的溶液：硫酸鋅溶液：將53.5g的七水硫酸鋅(ZnSO?7HO)溶于水中，并稀釋至100ml。42亞鐵氰化鉀溶液：將17.2g的三水亞鐵氰化鉀［KFe(CN)?3HO］溶于水中，462稀釋至100ml。EDTA溶液：用水將33.5g的二水乙二胺四乙酸二鈉(NaCHNO?2HO)溶2101423 2解，稀釋至1000ml。顯色液1：體積比450:550鹽酸溶液。將450ml鹽酸加入到550ml水中，冷卻后裝入試劑瓶中。顯色液2：5g/L的磺胺溶液。在75ml水中加入5ml濃鹽酸在水浴上加熱，用其溶解0.5g磺胺(NHCNHSONH)。冷卻至室溫后用水稀釋至100ml。必要2624 2 2時(shí)進(jìn)行過濾。顯色液3：1g/L的萘胺鹽酸鹽溶液。將0.1g的N-1-萘基-乙二胺二鹽酸鹽(CHNHCHCHNH?2HCL)溶于水，稀釋至100ml必要時(shí)過濾。107 2 2 2硝酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液：相當(dāng)于硝酸鹽的濃度0.0045g/L。將硝酸鉀(KNO)在3110-120°C的溫度范圍內(nèi)干燥至恒重，冷卻后稱取1.4680g，溶于1000ml容量瓶中，用水定容。在使用的當(dāng)天，于1000ml容量瓶中，取5ml上述溶液和20ml緩沖溶液(試劑4）用水定容。1ml該標(biāo)準(zhǔn)溶液中含4.5ug的NO-。3m.亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：相當(dāng)于亞硝酸鹽的濃度為 0.001g/L。將亞硝酸鈉（NaNO）在110-120°C的溫度范圍內(nèi)干燥至恒重，冷卻后稱取0.150g，溶于21000ml容量瓶中，用水定容。在使用的當(dāng)天配制該溶液。于1000ml容量瓶中，取10ml上述溶液和20ml緩沖溶液（試劑4）用水定容。1ml該標(biāo)準(zhǔn)溶液中含1.00ug的NO-。2儀器所有玻璃儀器都要用蒸餾水沖洗，以保證不帶有硝酸鹽和亞硝酸鹽。電子天平：靈敏度為0.1mg燒杯：100ml三角瓶：250ml、50ml容量瓶：100ml、500ml、和1000ml5?移液管：2ml、5ml、10ml、25ml刻度吸管：2ml、5ml、10ml、25ml量筒：根據(jù)需要選取玻璃漏斗：直徑約9cm定性濾紙：直徑約18cm還原反應(yīng)柱：簡稱鎘柱分光光度計(jì)：測定波長538nm，使用1-2cm光程的比色皿。PH計(jì)：精度為土0.01，使用前用PH7和PH9的標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行校正。操作步驟制備鍍銅鎘柱置鎘粒于三角瓶中（所用鎘粒的量以達(dá)到要求的鎘柱高度為準(zhǔn)）。1.2加足量的鹽酸（試劑5）浸沒鎘粒，搖晃幾分鐘。潷出液體，在三角瓶中用水反復(fù)沖洗，直到把氯化物全部沖洗掉。4.1.4在鎘粒上鍍銅。向鎘粒中加入硫酸銅溶液（試劑2）（每克鎘粒約需2.5ml）,搖晃1min。潷出液體，立即用水沖洗鍍銅鎘粒，注意鎘粒要始終用水浸沒。當(dāng)沖洗水中不再有銅沉淀時(shí)即可停止沖洗。在用于盛裝鍍銅鎘粒的玻璃柱底部裝上幾厘米高的玻璃纖維。在玻璃柱中灌入水，排凈氣泡。將鍍銅鎘粒盡快地裝入玻璃柱，使其暴露于空氣的時(shí)間盡量短。鍍銅鎘粒的高度應(yīng)在15-20cm的范圍內(nèi)。新制備柱的處理以不大于6ml/min的流量將由750ml水225ml硝酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液（試劑12）20ml緩沖溶液（試劑4）和20mlEDTA（試劑8）溶液組成的混合液通過剛裝好鎘粒的玻璃柱，接著用50ml水以同樣流速沖洗該柱。檢查柱的還原能力這種檢查每天至少進(jìn)行兩次，一般在開始時(shí)和一系列測定之后。用移液管將20ml的硝酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液（試劑12）移入還原柱頂部的貯液杯中，再立即向該貯液杯中添加5ml緩沖液（試劑4）。用一個(gè)100ml的容量瓶收集洗提液。洗提液的流量不應(yīng)超過6ml/min。在該貯液杯將要排空時(shí)，用約15ml水沖洗杯壁，沖洗水流完后，再加入15ml水重復(fù)沖洗。當(dāng)?shù)诙螞_洗水也流完后，將貯液杯灌滿水，并使其以最大流速流過柱子。當(dāng)容量瓶中的洗提液接近10