微生物數(shù)量檢驗技術-供試液制備

項目八微生物數(shù)量檢查技術任務2供試液制備知識點2不同劑型藥品供試液制備2.供試液的制備根據(jù)被檢藥品的理化特性與生物學特性，采取適宣的方法制備供試液。所用乳化劑、分散劑、中和劑或滅活劑及其用量應證明是有效的，并對微生物無毒性。供試液的制備若需用水溶加溫時，溫度不應超過45℃，時間不得超過30min。除另有規(guī)定外,常用的供試品制備方法如下。2.1一般供試品溶液的制備2.1.1.液體供試品

取供試品10ml，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，作為供試液。油劑可加入適量的無菌聚山梨酯80使供試品分散均勻。水溶性液體制劑可用混合的供試品原液作為供試液。

環(huán)境、人員和取樣的要求2.1.2固體、半固體或黏稠液供試品

取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，用勻漿儀或其他適宜的方法，混勻，作為供試液。必要時加適量的無菌聚山梨酯80，并置水浴中適當加溫使供試品分散均勻。2.2用特殊方法制備供試液的供試品2.2.1非水溶性供試品2.2.1.1軟膏、乳膏劑

取供試品5g(或5ml)，加至含熔化的5g司盤80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80的無菌混合物(熔化溫度不超過45℃)的燒杯中，即先將燒杯中無菌助溶劑混合物溶化，待溫度不超過45℃時，加入供試品，用無菌玻棒攪拌成團后，分次慢慢加入45℃的pH7.0無菌氯化鈉一蛋白陳緩沖液至100，邊加邊攪拌，使供試品充分乳化，作為1:20供試液。

環(huán)境、人員和取樣的要求2.2.1.2油劑

取供試品10m，加入無菌聚山梨酯805-8m1，搖勻，再加入稀釋劑至100m，作為1:10供試液。2.2.1.3栓劑

稱取供試品10g，置滅菌錐形瓶中，加適量稀釋劑，置45℃水溶保溫10min，使熔化，加入無菌聚山梨酯805～8ml，振搖使之乳化，再加稀釋劑(稀釋劑和山梨酯80總量為100ml)，搖勻，作為1：10供試液。2.2.1.4膏劑

取供試品10g，加至含20ml無菌十四烷酸異丙酯(制法見《中國藥典》部附錄ⅪH“無菌檢查法”)和無菌玻璃珠的適宜容器中，必要時可增加十四烷酸異丙酯的用量，充分振搖，使供試品溶解。然后加入45℃的pH7.0無菌氧化鈉-蛋白胨緩沖液100ml，振搖5-10min，萃取，待油水明顯分層，取其水層作為1:10供試液。

環(huán)境、人員和取樣的要求2.2.2.非水溶性膜劑供試品

一般取樣為100cm2，置滅菌錐形瓶中，加入適量的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，于45℃水浴中保溫，浸泡，振搖，以供試品浸液作為1:10供試液。中藥膜劑取100cm2，剪碎，加適量的pH7.0無菌氧化鈉-蛋白胨緩沖液(通常1cm2加1ml或2ml)，浸泡，振搖，以供試品浸液作為1:10供試液。2.2.3腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品

取供試品10g，腸溶制劑加pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液至100ml，結(jié)腸溶制劑加pH7.6無菌磷酸鹽緩沖液至100ml，均置45℃水浴中，振搖，使溶解，作為1:10供試液。

環(huán)境、人員和取樣的要求2.2.4氣霧劑、噴霧劑

供試品取規(guī)定量供試品，置冰箱冰凍室(-20℃以下)內(nèi)約lh。取出，迅速消毒供試品容器的開啟部位周圍，用無菌鋼錐在容器上鉆一小孔，在室溫輕輕轉(zhuǎn)動容器，使拋射劑緩緩全部釋出。用無菌注射器吸出全部藥液，加至適量的稀釋劑(若含非水溶性成分，加適量的無菌聚山梨酯80)中，混勻，取相當于10g或10ml的供試品，再稀釋成1:10的供試液。2.2.5茶劑供試品

取供試品10g，置滅菌錐形瓶中，加入稀釋劑100ml，振搖2～3min，以滅菌紗布過濾(如為袋泡茶，可直接取2袋，以稱樣結(jié)果按1:10加稀釋劑浸泡30min)。以上供試品如吸水膨脹，或黏度過高，可增加稀釋劑的量，制成1:20～1:100供試液。

環(huán)境、人員和取樣的要求2.2.6貼膏劑供試品

取規(guī)定量供試品，去掉貼劑的保護層，放置在無菌玻璃或塑料片上，粘貼面朝上。用適宜的無菌多孔材料(如無菌紗布)覆蓋貼劑的粘貼面以避免貼劑粘貼在一起。然后將其置于適宜體積并含有滅活劑(如聚山梨酯80或卵磷脂)的稀釋劑中，用力振蕩至少30min，或放置于均質(zhì)儀均質(zhì)10min，或以其他方法制備成供試液。2.3具抑菌活性的供試品當供試品具有抑菌活性時，應消除供試液的抑菌活性后，再依法檢查。常用的方法如下：2.3.1稀釋法

取規(guī)定量的供試液，加至較大量的培養(yǎng)基中，使單位體積內(nèi)的供試品含量減少至不具抑菌作用。用平板法測定菌數(shù)時，1ml供試液可等量分注多個平皿。培養(yǎng)基稀釋法適用于抑菌作用不強的制劑。

環(huán)境、人員和取樣的要求2.3.2離心沉淀法

此方法用于去除供試液中的沉淀物，對于抑菌活性較強的供試品，如供試液中有不溶顆粒、沉淀，取供試液，先以500r/min，離心3min，取上清液進行試驗。2.3.3薄膜過濾法

見“滅菌藥物的無菌檢驗”中的“薄膜過濾法”。本法適用于含有各種抑菌、抗菌、防腐等成分的供試品。2.3.4中和法

凡含汞、砷或防腐劑的供試品，可用相應的試劑鈍化、中和其抑菌活性，制成供試液。

環(huán)境、人員和取樣的要求2.4供試液的稀釋(10倍遞增稀釋法)2.4.1取2～3支滅菌試管，分別加入9mlpH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液滅菌稀釋劑(此時操作一般為：左手執(zhí)試管并將塞打開，傾斜，右手執(zhí)10ml吸管吸量。切勿在酒精燈火焰的正上方操作，以免火焰將供試液中的菌細胞殺滅)。加稀釋劑后，試管塞應立即塞上。

環(huán)境、人員和取樣的要求2.4.2另取1支1ml滅菌吸管吸1:10均勻供試液1ml，加入裝有9mlpH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液滅菌稀釋劑的試管中，混勻，即得1:100供試液。以此類推，根據(jù)供試品污染程度，可稀釋至1：103等適宜稀釋級。每遞增1稀釋級，必須另換一支吸管。稀釋時，吸管插入第1級稀釋液內(nèi)不低于液面