動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本技術(shù)和方法課件

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本知識(shí)

和操作技術(shù)上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心湯家銘動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本知識(shí)

和操作技術(shù)上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心1進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作前必須注意的事一、動(dòng)物福利和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理問題什么是動(dòng)物福利？動(dòng)物福利是指動(dòng)物在整個(gè)生命過程中應(yīng)得到人類的保護(hù)，其基本原則是要善待動(dòng)物，保證動(dòng)物的健康和快樂。動(dòng)物福利的提出是基于這樣一個(gè)觀點(diǎn)，即動(dòng)物與人一樣，有思維、有情感，應(yīng)當(dāng)給予與人一樣的生存權(quán)。臺(tái)灣學(xué)者夏良宙（1990年）把動(dòng)物福利概括成兩句話：

善待活著的動(dòng)物，減少動(dòng)物死亡的痛苦。

應(yīng)該再加一句：動(dòng)物死后應(yīng)得到妥善處理。進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作前必須注意的事一、動(dòng)物福利和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理問題2在國際上被普遍認(rèn)可的動(dòng)物福利包括以下5個(gè)內(nèi)容，即：應(yīng)提供給動(dòng)物滿足生長(zhǎng)發(fā)育和繁衍后代的營(yíng)養(yǎng)食物和清潔的飲水，使其免受饑渴。（吃好喝好）應(yīng)提供給動(dòng)物適當(dāng)?shù)臈⒅睾惋曫B(yǎng)場(chǎng)所，使其能休息和睡眠。（休息好）應(yīng)提供預(yù)防動(dòng)物疾病和患病后及時(shí)診療的措施，使其免受疾病和傷害的痛苦。（健康成長(zhǎng)）應(yīng)提供給動(dòng)物安靜的飼養(yǎng)環(huán)境，無刺激動(dòng)物發(fā)生應(yīng)激和恐懼的場(chǎng)面和聲音。（平靜生活）應(yīng)提供給動(dòng)物同類一起自由玩耍、表達(dá)天性的空間和自由。（表達(dá)天性）在國際上被普遍認(rèn)可的動(dòng)物福利包括以下5個(gè)內(nèi)容，即3飼養(yǎng)繁殖實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的目的是用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為人類的替難者進(jìn)行各種生物醫(yī)學(xué)研究。一方面隨著生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用量逐年增加，使用種類也逐年擴(kuò)大；另一方面從動(dòng)物福利和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)考慮，又需要盡量減少一些不必要的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，特別是人類的寵物諸如貓、犬、猴等，或者在不得不做的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中盡可能將動(dòng)物的痛苦、壓迫和不適降到最低。飼養(yǎng)繁殖實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的目的是用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為人類的替難者進(jìn)行各種生4動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的倫理判斷標(biāo)準(zhǔn)：1.必須權(quán)衡實(shí)驗(yàn)的目和得出的結(jié)論與動(dòng)物由此而受到的傷害和死亡。2.必須清楚而且明確「沒有任何替代方法可達(dá)到所做的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的目的」這個(gè)前提。3.必須將動(dòng)物的痛苦、壓迫和不適減到最低程度。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的倫理判斷標(biāo)準(zhǔn)：5二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是實(shí)踐性非常強(qiáng)的技術(shù)和方法，不能僅靠書本理論知識(shí)，需要通過反復(fù)實(shí)踐加以掌握。目的：保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。減少動(dòng)物承受的痛苦。二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是實(shí)踐性非常強(qiáng)的技術(shù)和方法，不能僅靠書本理論知6成為熟練掌握動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)的能手或?qū)＜覒?yīng)該是大學(xué)/研究所每一個(gè)動(dòng)物飼養(yǎng)管理人員所追求的目標(biāo)。成為熟練掌握動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)的能手或?qū)＜覒?yīng)該是大學(xué)/研究所每7動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備1.所用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施是否符合本實(shí)驗(yàn)要求

普通設(shè)施，清潔級(jí)、SPF設(shè)施，感染性設(shè)施，有毒有害供試品設(shè)施，放射性設(shè)施實(shí)驗(yàn)室、手術(shù)室2.所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的品種、品系、性別、數(shù)量等能否得到所需要的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)是否熟練掌握所用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)器具、試劑是否準(zhǔn)備好所用的儀器設(shè)備是否處于可運(yùn)行狀態(tài)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備1.所用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施是否符合本實(shí)驗(yàn)要求86.預(yù)實(shí)驗(yàn)正式實(shí)驗(yàn)前的演習(xí)預(yù)實(shí)驗(yàn)可用少量動(dòng)物進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能并入正式實(shí)驗(yàn)結(jié)果一起分析。6.預(yù)實(shí)驗(yàn)9一、動(dòng)物的抓取動(dòng)物的抓取是順利進(jìn)行各項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作最基本的一個(gè)環(huán)節(jié)。應(yīng)熟練掌握各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取方法，用輕柔的手法把對(duì)動(dòng)物施加的恐懼和痛苦降到最低。一般說來動(dòng)物是不會(huì)主動(dòng)攻擊人的。小鼠抓取的注意點(diǎn)大鼠抓取的注意點(diǎn)3.豚鼠抓取的注意點(diǎn)一、動(dòng)物的抓取動(dòng)物的抓取是順利進(jìn)行各項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作最基本的一104.兔抓取的注意點(diǎn)最好戴人造革圍裙和袖套，以免爪子抓傷。采用正確地抓取方法。可采用兔固定器固定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，或一人抓取固定，一人實(shí)驗(yàn)操作。4.兔抓取的注意點(diǎn)11豚鼠和兔的抓取豚鼠和兔的抓取125.犬抓取注意點(diǎn)實(shí)驗(yàn)用犬有專用的比格犬和農(nóng)村收購來的草犬。犬是通人性的，草犬購入后，飼養(yǎng)人員和實(shí)驗(yàn)人員要經(jīng)常親近它們，使它放松對(duì)你的警惕，容易直接抓取它們。不要輕易使用長(zhǎng)柄鐵鉗，鉗傷造成的傷害會(huì)使它對(duì)你更加恐懼，影響以后實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。抓取后用繩子將嘴綁住。5.犬抓取注意點(diǎn)13二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)（一）一般動(dòng)物試驗(yàn)分組設(shè)計(jì)的基本原則：隨機(jī)、對(duì)照和重復(fù)。隨機(jī)：就是按照機(jī)遇均等的原則來進(jìn)行分組。其目的是盡量減少各種干擾因素造成的實(shí)驗(yàn)誤差，不受實(shí)驗(yàn)者主觀因素或其他偏性誤差的影響。隨機(jī)化的手段可采用編號(hào)卡片抽簽法，隨機(jī)數(shù)字表或采用計(jì)算器的隨機(jī)數(shù)字鍵。

二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)（一）一般動(dòng)物試驗(yàn)分組設(shè)計(jì)的基本原則：隨14對(duì)照：是要求在實(shí)驗(yàn)中設(shè)立可與實(shí)驗(yàn)組比較，用以消除各種無關(guān)因素影響的對(duì)照組。對(duì)照應(yīng)有可比性：同時(shí)同地同條件對(duì)照設(shè)立有兩種方式：自體對(duì)照1.實(shí)驗(yàn)前后對(duì)照2.身體左右對(duì)照組間對(duì)照（以手術(shù)造成兔腹主動(dòng)脈損傷動(dòng)脈粥樣硬化模型為例）1.正常（空白）對(duì)照組：正常飲食，不做手術(shù)2.假手術(shù)組：正常飲食，做手術(shù)3.模型組：手術(shù)+高脂飼料4.已知療效藥物組：手術(shù)+高脂飼料+已知療效藥物5.未知療效藥物組：手術(shù)+高脂飼料+未知療效藥物6.賦型劑對(duì)照：手術(shù)+高脂飼料+賦型劑對(duì)照：是要求在實(shí)驗(yàn)中設(shè)立可與實(shí)驗(yàn)組比較，用以消除各種無關(guān)因素15重復(fù)：是指同一處理要設(shè)置多個(gè)樣本數(shù)。重復(fù)的主要作用是估計(jì)試驗(yàn)誤差、降低試驗(yàn)誤差和增強(qiáng)代表性，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確度，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果能在不同個(gè)體中穩(wěn)定地重復(fù)出來。樣本數(shù)過少，實(shí)驗(yàn)處理效應(yīng)不能充分顯示；樣本數(shù)過多，又會(huì)增加實(shí)際工作中的困難。因此在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前必須確定最少的樣本例數(shù)。最少的樣本例數(shù)可按一般估測(cè)方法確定，也可通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行測(cè)算確定。重復(fù)：是指同一處理要設(shè)置多個(gè)樣本數(shù)。重復(fù)的主要作用是估計(jì)試驗(yàn)16（二）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)的基本類型1.完全隨機(jī)化設(shè)計(jì)2.按體重分層隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)3.配對(duì)設(shè)計(jì)（二）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)的基本類型17（二）按體重分層隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)

先確定實(shí)驗(yàn)的組數(shù)，將動(dòng)物稱重，按體重的輕重順序編號(hào)，再用隨機(jī)化工具，如隨機(jī)數(shù)字表等，將動(dòng)物隨機(jī)分配至處理組及對(duì)照組。隨機(jī)區(qū)組法舉例以用四氧嘧啶誘發(fā)小鼠糖尿病模型，用藥物進(jìn)行治療觀察療效為例，實(shí)驗(yàn)中可分為5組：正常對(duì)照組、模型組、藥物治療低劑量組、高劑量組和已知可治療糖尿病藥物組，每組10只，5雌5雄。按下列步驟進(jìn)行分組：1）雌雄分開：分組時(shí)雌、雄動(dòng)物分開分別進(jìn)行。2）用記號(hào)筆在小鼠尾巴上隨機(jī)編1-25號(hào)。3）按編號(hào)稱重，記錄每只小鼠的體重。4）按動(dòng)物體重順序依次重新編號(hào)。5）共5個(gè)實(shí)驗(yàn)組分成5個(gè)區(qū)組，每個(gè)區(qū)組都有5只體重相近的動(dòng)物。第一區(qū)組5只動(dòng)物為1、2、3、4、5號(hào)，第二區(qū)組為6、7、8、9、10號(hào)，余類推。6）抄錄隨機(jī)數(shù)表。抄錄數(shù)字的個(gè)數(shù)等于區(qū)組數(shù)減1，如5個(gè)區(qū)組就抄錄4個(gè)數(shù)字。第5個(gè)動(dòng)物無隨機(jī)數(shù)字，其分組為調(diào)劑。以后的區(qū)組按順序依次抄錄數(shù)字。7）將小鼠分到各組中。（二）按體重分層隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)18按體重分層隨機(jī)區(qū)組分組按體重分層隨機(jī)區(qū)組分組19三、動(dòng)物編號(hào)常用的標(biāo)記方法適用需要個(gè)體識(shí)別的實(shí)驗(yàn)染料標(biāo)記法：適合白色被毛的動(dòng)物，如小鼠、大鼠、豚鼠、兔等。黃色：常用3~5%苦味酸溶液紅色：常用0.5%中性紅溶液咖啡色:2%硝酸銀溶液黑色：煤焦油酒精溶液優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單、易識(shí)別缺點(diǎn)：長(zhǎng)期易退色；不能編大號(hào)碼。三、動(dòng)物編號(hào)常用的標(biāo)記方法適用需要個(gè)體識(shí)別的實(shí)驗(yàn)20動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本技術(shù)和方法ppt課件212.剪耳（打孔）法：嚙齒類小動(dòng)物3.號(hào)碼鉗法：適用于兔、犬等大動(dòng)物4.耳牌法：適用于羊、牛等大家畜5.電子芯片植入法：2.剪耳（打孔）法：嚙齒類小動(dòng)物22四、動(dòng)物被毛的去除方法1.剪毛法：用彎頭剪逆毛方向剪適用于各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2.拔毛法：常用于兔的耳緣靜脈注射3.剃毛法：剃須刀、手術(shù)刀適用于大動(dòng)物4.脫毛法：脫毛劑四、動(dòng)物被毛的去除方法1.剪毛法：用彎頭剪逆毛方向剪23常用脫毛劑配方配方1：硫化鈉8g溶于100mL水中。配方2：硫化鈉：肥皂粉：淀粉的比例為3：1：7，再加水調(diào)成糊狀。配方3：硫化鈉10g和生石灰15g溶于100mL水中。配方1和2適用于家兔和嚙齒類動(dòng)物的脫毛，配方3適合給犬脫毛。脫毛后用清水將脫毛區(qū)清洗干凈。常用脫毛劑配方24五、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行麻醉的目的是，消除實(shí)驗(yàn)過程中引起的痛苦和不適，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的安全和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理的一個(gè)重要方面。麻醉方法有全身麻醉和局部麻醉兩種。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉中絕大多數(shù)采用全身麻醉。應(yīng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?shí)驗(yàn)動(dòng)物種類、日齡及健康狀況等因素進(jìn)行綜合考慮，決定選用的麻醉劑和麻醉方法。五、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行麻醉的目的是，消除實(shí)驗(yàn)25全身麻醉簡(jiǎn)稱全麻。全麻是指麻醉藥通過呼吸道吸入、靜脈和肌肉注射等途徑，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)，使其產(chǎn)生短時(shí)間意識(shí)喪失、痛覺消失、肌肉松弛和反射抑制等中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制現(xiàn)象。當(dāng)麻醉藥從體內(nèi)排出或在體內(nèi)代謝破壞后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物逐漸清醒，不留后遺癥。全麻有吸入麻醉法和注射麻醉法兩種途徑，吸入麻醉法用揮發(fā)性麻醉藥，注射麻醉法用非揮發(fā)性麻醉藥。全身麻醉簡(jiǎn)稱全麻。全麻是指麻醉藥通過呼吸道吸入、靜脈和肌肉注26（1）吸入麻醉法常用藥物為乙醚、氟烷和異氟烷等。吸入麻醉法有開放吸入和氣管內(nèi)插管吸入兩種方法。開放吸入：適用于嚙齒類小動(dòng)物，可用乙醚、氯仿小動(dòng)物吸入麻醉機(jī)國外已有售。氣管內(nèi)插管：適用于犬、猴、羊等大動(dòng)物，氟烷和異氟烷是最常用的麻醉藥。吸入麻醉的優(yōu)點(diǎn)：麻醉平穩(wěn)、安全可靠、停止吸入后很快蘇醒缺點(diǎn)：需要一定的儀器設(shè)備，注意自身防護(hù)。（1）吸入麻醉法27大小鼠麻醉法大小鼠麻醉法28（2）注射麻醉法注射麻醉法是使用非揮發(fā)性麻醉藥進(jìn)行全麻的方法。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中比較常用。常用麻醉藥：戊巴比妥鈉硫噴妥鈉氯氨酮烏拉坦大動(dòng)物：靜脈注射或肌肉注射嚙齒類動(dòng)物：腹腔注射（2）注射麻醉法29實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉應(yīng)注意的事項(xiàng)大動(dòng)物麻醉之前應(yīng)禁食。麻醉之前應(yīng)準(zhǔn)確稱量動(dòng)物體重，作為計(jì)算麻醉劑用量的依據(jù)。應(yīng)注意不同麻醉藥對(duì)動(dòng)物的作用是不同的，如戊巴比妥鈉、硫賁妥鈉等能抑制心肌收縮力，使肌肉松弛，而氯胺酮?jiǎng)t相反。大動(dòng)物犬、猴、羊等麻醉前半小時(shí)應(yīng)注射麻醉前給藥如阿托品和苯巴比妥鈉。靜脈注射麻醉藥是必須緩慢，邊注射邊觀察動(dòng)物的意識(shí)、角膜反射、肌肉緊張性和對(duì)疼痛的反應(yīng)，達(dá)到麻醉要求時(shí)應(yīng)停止注射。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉應(yīng)注意的事項(xiàng)306.大動(dòng)物手術(shù)時(shí)應(yīng)配備麻醉師，在麻醉過程中密切觀察動(dòng)物的反應(yīng)，如血壓、脈搏、呼吸和體溫，及時(shí)調(diào)節(jié)麻醉藥劑量，保證手術(shù)順利進(jìn)行。7.動(dòng)物在麻醉期間、手術(shù)后至蘇醒期體溫會(huì)下降，應(yīng)注意手術(shù)室的室溫。8.注意術(shù)后護(hù)理。6.大動(dòng)物手術(shù)時(shí)應(yīng)配備麻醉師，在麻醉過程中密切觀察動(dòng)物的反應(yīng)31麻醉意外的搶救原因：麻醉藥速度過快、劑量過大、麻醉過深后果：中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制導(dǎo)致呼吸系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)功能障礙，引起呼吸、心跳停止。搶救方法：要針對(duì)具體情況，采取對(duì)癥治療的措施。1.立即停止供給麻醉劑2.人工呼吸，吸氧3.蘇醒劑4.呼吸中樞興奮劑如可拉明等和心臟和呼吸興奮劑，如0.1%腎上腺素適量作心內(nèi)或靜脈注射，靜脈滴注50%葡萄糖溶液等。麻醉意外的搶救32六、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥方法經(jīng)口給藥法注射法其它途徑給藥方法呼吸道給藥皮膚給藥脊髓腔內(nèi)給藥腦內(nèi)給藥直腸內(nèi)給藥關(guān)節(jié)腔內(nèi)給藥六、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥方法經(jīng)口給藥法33經(jīng)口給藥拌入飼料、飲水中自由攝取優(yōu)點(diǎn)：省人力缺點(diǎn)：因個(gè)體差異，攝入量不等灌胃優(yōu)點(diǎn)：能準(zhǔn)確定量缺點(diǎn)：給動(dòng)物造成一定的痛苦，需熟練掌握技術(shù)經(jīng)口給藥34大小鼠灌胃注意點(diǎn)用灌胃針。從嘴角處插入，到達(dá)咽部后改變灌胃針的方向，使其與食管的走向一致，然后順利插入。成年大鼠由于體型較大，不易保定。辦法：1）一人保定，一人灌胃2）操作者抓取后，將大鼠尾部按在自己的胸部，達(dá)到固定尾部的目的，然后灌胃。灌胃量：小鼠0.2-0.4ml/10克，大鼠1.0ml/100克大小鼠灌胃大小鼠灌胃注意點(diǎn)大小鼠灌胃35

兔灌胃法采用用固定器一人操作，或一人保定一人操作法。操作者用左手拇指和中指擠壓家兔兩頰，將下頜擠開使兔被動(dòng)張口，右手將開口器從一側(cè)口角插入口腔并固定，用泡在水中的14號(hào)細(xì)導(dǎo)尿管，經(jīng)開口器的孔插入，向前推進(jìn)約15cm，可達(dá)胃內(nèi)，確認(rèn)泡在水中的導(dǎo)管另一端沒有冒氣泡，說明沒有誤入氣管，即可注入藥液。灌胃量為每只每次80-150mL。兔灌胃法兔灌胃法兔灌胃法361.口服給藥用右手將口服藥片夾在拇指和食指之間，把左手放在犬的圈套上，用拇指和食指壓著犬的上唇，用力使犬的頭向后仰，繼而把右手中指放在犬的下頜向下壓。當(dāng)犬的嘴張大時(shí)，快速把藥片放在舌根隆起的部位，合上犬的嘴，維持頭后仰姿勢(shì)，右手在咽喉部輕輕按摩。借助犬本能的吞咽動(dòng)作服下藥片。犬的膠囊給藥法1.口服給藥犬的膠囊給藥法372.灌胃給藥在給犬灌胃時(shí)，將犬固定于特制的固定架上，實(shí)驗(yàn)時(shí)將木制開口器從一側(cè)口角放入犬的口腔，用左手或繩子固定，右手持12號(hào)胃管由開口器的小圓孔向咽后壁方向不斷插入，導(dǎo)管另一端置于一杯清水中，若連續(xù)出現(xiàn)氣泡，說明插入呼吸道，應(yīng)立即拔出胃管，重新操作。如無氣泡，說明沒有插入氣管，插至約20cm，即可到達(dá)胃內(nèi)。犬的灌藥量為每只每次200-500mL。犬的灌胃給藥法2.灌胃給藥犬的灌胃給藥法38各種動(dòng)物一次灌胃能耐受的最大容積各種動(dòng)物一次灌胃能耐受的最大容積39注射法注射法有皮下注射、腹腔注射、靜脈注射、肌肉注射以及皮內(nèi)注射、腦內(nèi)注射等。藥物吸收速度：靜脈注射＞腹腔注射＞肌肉注射＞皮下注射。皮內(nèi)注射常用于觀察皮膚血管通透性變化或反應(yīng)，如過敏試驗(yàn)?zāi)X內(nèi)注射常用于病毒學(xué)接種注射法40靜脈注射大小鼠尾靜脈和足背正中靜脈注射尾靜脈大小鼠尾靜脈注射靜脈注射尾靜脈大小鼠尾靜脈注射41豚鼠陰莖靜脈注射豚鼠足背正中靜脈注射豚鼠陰莖靜脈注射豚鼠足背正中靜脈注射42兔耳緣靜脈注射犬前肢頭靜脈和后肢小隱靜脈注射兔耳緣靜脈注射犬前肢頭靜脈和后肢小隱靜脈注射43其它途徑給藥方法呼吸道給藥：皮膚給藥：脊髓腔內(nèi)給藥：4.腦內(nèi)給藥：5.直腸內(nèi)給藥：6.關(guān)節(jié)腔內(nèi)給藥：其它途徑給藥方法44動(dòng)物間以及動(dòng)物與人之間

給藥等效劑量的換算在藥理學(xué)毒理學(xué)上常涉及到給動(dòng)物多少劑量的問題：不同種屬動(dòng)物間的劑量換算動(dòng)物與人之間的劑量換算人與動(dòng)物間的計(jì)量換算等效劑量：不同動(dòng)物間或動(dòng)物與人之間可能產(chǎn)生相同藥效的劑量。等效劑量與單位體重的動(dòng)物體表面積成正比動(dòng)物間以及動(dòng)物與人之間

給藥等效劑量的換算在藥理學(xué)毒45表1.標(biāo)準(zhǔn)體重動(dòng)物由動(dòng)物a到動(dòng)物b的mg/kg換算系數(shù):劑量×換算系數(shù)動(dòng)物劑量換算成人劑量：例1：已知150g大鼠用5mg/kg，換算成成人的用藥劑量：查表大鼠a行，成人b列的換算系數(shù)為0.162，故成人的劑量=5×0.162=0.81mg/kg。一種動(dòng)物劑量換算成另一種動(dòng)物劑量：例2：已知20g小鼠用4mg/kg，換算成8kg比格犬的用藥劑量：查表小鼠a行，比格犬b列的換算系數(shù)為0.15，故比格犬的劑量=4×0.15=0.60mg/kg表1.標(biāo)準(zhǔn)體重動(dòng)物由動(dòng)物a到動(dòng)物b的mg/kg換算系數(shù):劑量46非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物的換算非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物換算成標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物：給藥劑量×校正系數(shù)Sa×換算系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物換算成非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物：給藥劑量×換算系數(shù)×校正系數(shù)Sb非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物換算成非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物:給藥劑量×校正系數(shù)Sa×換算系數(shù)×校正系數(shù)Sb例3：長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)350g大鼠用10mg/kg，換算成8kg比格犬的用藥劑量：查表2，350/150=2.3，校正系數(shù)Sa=1.301。再查表1大鼠a行，比格犬b列的換算系數(shù)為0.30，故8kg比格犬的劑量=10×1.301×0.30=3.90mg/kg表2.非標(biāo)準(zhǔn)體重動(dòng)物的校正系數(shù)非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物的換算表2.非標(biāo)準(zhǔn)體重動(dòng)物的校正系數(shù)47（一）采血法大小鼠剪尾尾靜脈切割大鼠后肢足中靜脈采血眼眶后靜脈叢采血摘眼球采血腋窩動(dòng)靜脈采血心臟采血腹主動(dòng)脈采血七、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體液的采集方法（一）采血法七、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體液的采集方法48心臟采血眼眶后靜脈叢采血足背正中靜脈采血腹主動(dòng)脈采血心臟采血眼眶后靜脈叢采血足背正中靜脈采血腹主動(dòng)脈采血49小鼠頜下靜脈采血法小鼠頜下靜脈采血法50大小鼠不同采血方法的比較大小鼠不同采血方法的比較51豚鼠心臟采血兔耳緣靜脈采血兔心臟采血兔頸總動(dòng)脈采血豚鼠心臟采血兔耳緣靜脈采血兔心臟采血兔頸總動(dòng)脈采血52一個(gè)動(dòng)物到底能采多少血，取決于動(dòng)物的體重、定期活體采血還是處死采血。動(dòng)物的全血量為動(dòng)物體重的8%左右，其中約30%儲(chǔ)藏在全身毛細(xì)血管內(nèi)。全血中約50%是有形成分。據(jù)此可測(cè)算處死后的采血量和血清量。采血為全血量的10%時(shí)，兩個(gè)星期恢復(fù)；采血為全血量的30%時(shí)，將危及生命。一個(gè)動(dòng)物到底能采多少血，取決于動(dòng)物的體重、定期活體采血還是處53血清和血漿的區(qū)別不同的實(shí)驗(yàn)對(duì)血液樣品的要求不同，有的要求全血，有的要求血清或血漿。血清是指血液凝固后析出的淡黃色的液體，血漿是指血液經(jīng)過抗凝后去除有形成份后的淡黃色液體。血清和血漿的區(qū)別在于血清中不含纖維蛋白，而血漿中含有與凝血有關(guān)的許多酶原和纖維蛋白原。常用的抗凝劑有肝素、枸櫞酸鈉、乙二胺四乙酸（EDTA）鈉鹽或鉀鹽。血清和血漿的區(qū)別54各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物活體安全采血量和致死采血量各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物活體安全采血量和致死采血量55（二）采尿法反射排尿法代謝籠法導(dǎo)尿法膀胱穿刺法兔采糞尿比格犬采糞尿大鼠采糞尿（二）采尿法兔采糞尿比格犬采糞尿大鼠采糞尿56八、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用處死方法安死術(shù)的概念“安死術(shù)”是指以人道的方法處死動(dòng)物的過程。在處死動(dòng)物過程中減少動(dòng)物的驚恐或焦慮，安靜地、無痛苦地死亡。八、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用處死方法安死術(shù)的概念57采用安死術(shù)必須符合的標(biāo)準(zhǔn)死亡時(shí)沒有驚恐、疼痛的表現(xiàn)使其在最短時(shí)間內(nèi)失去意識(shí)，迅速死亡方法可靠且可重復(fù)對(duì)操作人員安全采用的方法要與研究要求和目的一致對(duì)觀察者和操作者的情緒影響最小對(duì)環(huán)境污染的影響最小設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)廉、易操作處死動(dòng)物地點(diǎn)應(yīng)遠(yuǎn)離，并與動(dòng)物室隔開采用安死術(shù)必須符合的標(biāo)準(zhǔn)58㈠大鼠小鼠1.頸椎脫臼法2.急性失血法3.麻醉致死法4.氣體窒息致死法㈠大鼠小鼠59㈡貓、犬、兔1.空氣栓塞法優(yōu)點(diǎn)：方法簡(jiǎn)單、迅速，缺點(diǎn)：由于動(dòng)物死于急性循環(huán)衰竭，各臟器凝血十分明顯。2.急性失血法先行麻醉，再分離頸動(dòng)脈或股動(dòng)脈，將一根較粗的塑料管插入動(dòng)脈內(nèi)放血。動(dòng)物在3～5min內(nèi)即可死亡。優(yōu)點(diǎn)：動(dòng)物十分安靜，對(duì)臟器無損傷，對(duì)活殺采集病理切片標(biāo)本是一種比較好的方法。3.化學(xué)藥物致死法通過注射一定量的化學(xué)藥物而使動(dòng)物迅速致死。常用的化學(xué)藥物有：⑴10％氯化鉀溶液：靜脈注射，用量為犬20～30ml/只，兔5～10ml／只。⑵10％福爾馬林：靜脈注射，用量為犬20ml／只。㈡貓、犬、兔60大小鼠安樂死法豚鼠二氧化碳窒息法大小鼠安樂死法豚鼠二氧化碳窒息法61九、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后的護(hù)理1.麻醉蘇醒前注意保溫保持呼吸道通暢定時(shí)觀察記錄動(dòng)物的生命體征2.創(chuàng)口處理徹底清創(chuàng)處理，必要時(shí)放置引流條可以不用敷料覆蓋創(chuàng)口3.抗菌素治療4.飲食和輸液大手術(shù)后適當(dāng)輸液能加快恢復(fù)犬、猴手術(shù)后給與高蛋白、高能量飲食九、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后的護(hù)理1.麻醉蘇醒前62十、動(dòng)物活體解剖、臟器稱重

及病理取材方法動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后進(jìn)行活體解剖是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)最后一個(gè)重要步驟，通過活體解剖和病理學(xué)觀察，可以分析藥物的作用、各器官病變特點(diǎn)，觀察實(shí)驗(yàn)效果，為分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果提供大體病理和組織病理學(xué)依據(jù)。十、動(dòng)物活體解剖、臟器稱重

及病理取材方法動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后進(jìn)行活63活體解剖程序體表檢查胸腹部皮下檢查腹腔檢查胸腔檢查顱腦檢查麻醉放血活體解剖程序體表檢查胸腹部皮下檢查腹腔檢查胸腔檢查顱腦檢查麻64腹腔檢查胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸、直腸肝、脾、胰腺、腎、腎上腺、腸系膜淋巴結(jié)睪丸、副睪、輸精管、前列腺、精囊腺卵巢、輸卵管、子宮、腹腔檢查65胸腔檢查心