高中生物選修一DNA的粗提取與鑒定課件

討論2：如何證明他們是遺傳物質(zhì)？討論3：怎樣才能將細(xì)胞內(nèi)的這些物質(zhì)分離出來(lái)？討論1：構(gòu)成生物體的遺傳物質(zhì)是什么？討論2：如何證明他們是遺傳物質(zhì)？討論3：怎樣才能將細(xì)胞內(nèi)的1§5.1DNA的粗提取與鑒定§5.1DNA的粗提取與鑒定2一、基礎(chǔ)知識(shí)（一）提取DNA的方法1.提取生物大分子的基本思路

選用一定的物理或化學(xué)方法，分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子2.提取DNA的基本思路提取DNA，去除其他成分利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異一、基礎(chǔ)知識(shí)（一）提取DNA的方法1.提取生物大分子的基本思3⑴DNA的溶解性DNA和蛋白質(zhì)等成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同利用這一特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀；或者讓其他成分溶解，DNA析出3.DNA等大分子的理化性質(zhì)⑴DNA的溶解性DNA和蛋白質(zhì)等成分利用這一特點(diǎn)，或者讓其4DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離。⑵DNA不溶于酒精溶液⑶DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性①蛋白酶——水解蛋白質(zhì)，

對(duì)DNA沒(méi)有影響②高溫——大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60～80℃

而DNA在80℃以上才會(huì)變性③洗滌劑——溶解細(xì)胞膜，去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì)

但對(duì)DNA沒(méi)有影響DNA不溶于酒精溶液，⑵DNA不溶于酒精溶液⑶DNA對(duì)酶5高中生物選修一DNA的粗提取與鑒定ppt課件6試劑：（二）DNA的鑒定條件：二苯胺沸水浴條件下，

DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色沸水浴現(xiàn)象：試劑：（二）DNA的鑒定條件：二苯胺沸水浴條件下，

DNA遇7二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取從下列材料中選取2～3種原則：菜花、香蕉、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜；魚(yú)卵、豬肝、雞血、哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞；在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌凡是含有DNA的生物材料都可以考慮選用DNA含量相對(duì)較高的組織二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取從下列材料中選取2～3種原則8（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液1、動(dòng)物細(xì)胞2、植物細(xì)胞——容易破碎——需要溶解細(xì)胞膜雞血細(xì)胞溶液：加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，

過(guò)濾后收集濾液想一想：為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來(lái)說(shuō)是一種低滲液體，水分大量進(jìn)入血細(xì)胞，使血細(xì)胞脹裂；加上攪拌作用，加速雞血細(xì)胞細(xì)胞膜、核膜破裂，

從而釋放出DNA①加入一定的洗滌劑和食鹽②充分的攪拌和研磨，過(guò)濾后收集研磨液想一想：洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？洗滌劑——離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，利于DNA釋放食鹽——NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液1、動(dòng)物細(xì)胞2、植物細(xì)胞—9使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，

導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等為了純化提取的DNA需要將濾液作進(jìn)一步處理討論：濾液/研磨液中可能含有哪些成分？答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)想一想：如果研磨不充分，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生

怎樣的影響？使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，

導(dǎo)致看不101.DNA的溶解性2.DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性（三）除去濾液中的雜質(zhì)1.DNA的溶解性2.DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性（11討論：方案二與方案三的原理有什么不同？方案二：利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，使提取的DNA

與蛋白質(zhì)分開(kāi)；方案三：利用DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同，

使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離討論：方案二與方案三的原理有什么不同？方案二：利用蛋白酶分解12（四）DNA的析出與鑒定與濾液體積相等的冷卻的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)95％)，靜置2－3min，溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物

——粗提取DNA用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水1、DNA的析出（四）DNA的析出與鑒定與濾液體積相等的冷卻的酒精溶液(體13高中生物選修一DNA的粗提取與鑒定ppt課件142.DNA的鑒定⑴向兩支試管中分別加入2mol/LNaCl

溶液5ml⑵其中一支試管中加入DNA絲狀物⑶各加入二苯胺試劑4ml⑷混勻后，置于沸水浴中加熱5min⑸待冷卻后，比較兩只試管中溶液的顏色變化觀察現(xiàn)象：溶解絲狀物的溶液變?yōu)樗{(lán)色2.DNA的鑒定⑴向兩支試管中分別加入2mol/LN15觀察你提取的DNA顏色，如果不是白色絲狀物，說(shuō)明DNA中的雜質(zhì)較多；二苯胺鑒定出現(xiàn)藍(lán)色說(shuō)明實(shí)驗(yàn)基本成功，如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能所提取的DNA含量低，或是實(shí)驗(yàn)操作中出現(xiàn)錯(cuò)誤，需要重新制備四、課題成果評(píng)價(jià)：是否提取出了DNA觀察你提取的DNA顏色，四、課題成果評(píng)價(jià)：是否提取出了DNA16課題延伸本課題使用的洗滌劑是多組分的混合物，在嚴(yán)格的科學(xué)實(shí)驗(yàn)中很少使用。實(shí)驗(yàn)室提取高純度的DNA時(shí)，通常使用十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）、十二烷基硫酸鈉（SDS）或吐溫等化學(xué)試劑。課題延伸本課題使用的洗滌劑是多組分的混合物，在嚴(yán)格的科學(xué)實(shí)驗(yàn)17提取DNA的第一步是材料的選取，其目的是一定要選取DNA含量較高的生物材料，否則會(huì)由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中或多或少的損失而造成檢測(cè)的困難；第二步是DNA的釋放和溶解，這一步是實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵，要盡可能使細(xì)胞內(nèi)的DNA全部溶解；第三步是DNA的純化，即根據(jù)DNA的溶解特性、對(duì)酶及高溫的耐受性的不同等特性，最大限度地將DNA與雜質(zhì)分開(kāi)；最后一步是對(duì)DNA進(jìn)行鑒定，這是對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果的檢測(cè)。1、請(qǐng)解釋提取DNA的實(shí)驗(yàn)操作主要步驟的目的練習(xí)提取DNA的第一步是材料的選取，其目的是一定要選取D182、你認(rèn)為從細(xì)胞中提取某種特定的蛋白質(zhì)與提取DNA一樣容易嗎？答：提取蛋白質(zhì)比提取DNA的難度大。這是因?yàn)椋cDNA相比，蛋白質(zhì)對(duì)溫度、鹽濃度、pH等條件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)多種多樣，理化性質(zhì)各不相同，使得蛋白質(zhì)的提取沒(méi)有一種統(tǒng)一的方法，只能根據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性摸索提取的條件，設(shè)計(jì)特定的方法。2、你認(rèn)為從細(xì)胞中提取某種特定的蛋白質(zhì)與提取DNA一樣容易嗎192.實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)的量濃度為2mol／L和0.14mol／L對(duì)DNA有何影響?1.在DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是()。A.稀釋血液、沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出C.使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA答：B答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出2.實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)的量濃度為2mol／L和0.14203.DNA遇二苯胺(沸水浴)會(huì)染成()A.磚紅色B.橘黃色C.紫色D.藍(lán)色4.提取雞血中的DNA時(shí)，為什么要除去血液中的上清液?答：DNA的提取，關(guān)鍵是對(duì)雜質(zhì)的去除，由于上清液是血液中的血漿部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白質(zhì))。答：D3.DNA遇二苯胺(沸水浴)會(huì)染成()4.提取雞血21高中生物選修一DNA的粗提取與鑒定ppt課件22為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？

1、用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；

2、用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過(guò)反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？1、用23⑴過(guò)濾用蒸餾水稀釋過(guò)的雞血細(xì)胞液目的:獲得含核物質(zhì)的濾液

⑵過(guò)濾含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液目的:獲取紗布上的粘稠物

⑶過(guò)濾溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液目的:得到含DNA的濾液

本實(shí)驗(yàn)中有三次過(guò)濾,分別有什么作用?⑴過(guò)濾用蒸餾水稀釋過(guò)的雞血細(xì)胞液本實(shí)驗(yàn)中有三次過(guò)濾,分別有24第一次攪拌加蒸餾水的雞血細(xì)胞液

加速細(xì)胞的破裂第二次攪拌加2mol/LNaCl溶液的濾液

使DNA與溶液混合均勻第三次攪拌加蒸餾水至0.14mol/LNaCl溶液

稀釋NaCl溶液,析出DNA第四次攪拌放入2mol/LNaCl溶液中紗布上的粘稠物

使DNA盡可能多的溶于溶液中第五次攪拌體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精

提取含雜質(zhì)較少的DNA實(shí)驗(yàn)中有五次用玻璃棒攪拌?分別有什么作用?第一次攪拌加蒸餾水的雞血細(xì)胞液實(shí)驗(yàn)中有五次用玻璃棒攪拌?分別25方法步驟

加入物質(zhì)

目的

1.制備雞血細(xì)胞液

檸檬酸鈉溶液

①

2.提取雞血細(xì)胞細(xì)胞核物質(zhì)

20m1蒸餾水

②幻燈片18

3.溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA

2m1／L的NaCI溶液40mL

③幻燈片18

4.析出含DNA的黏稠物

蒸餾水

④

5.濾取含DNA的黏稠物

⑤

6.將DNA的黏稠物再溶解

2mol／L的NaCl溶液20mL

⑥

7.過(guò)濾含DNA的NaCl溶液

⑦

8.提取含有雜質(zhì)較少的DNA

冷卻的95％的酒精50mL

⑧幻燈片18

A:(1)向試管中加入0.015mol／L的NaCl溶液5mL

(2)加入DNA

(3)4

mL二苯胺試劑

9.DNA的鑒定

B:(1)向試管中加入0.015mol／L

的NaCl溶液5mL

(2)4mL二苯胺試劑

⑨

方法步驟加入物質(zhì)目的