SN0169-92出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法

受控文件出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法SN0169-92ZBX09002受控文件Methodforexaminationofcoliform，fecalcoliformandescherichiacoliinfoodforexport1、主題內容與適用范圍本標準適用于出口食品的檢驗。2、設備和材料；5mL10mL，1mL2.2水浴箱：44.5±0.5℃。2.3培育箱：36±1℃，44.5±0.5℃。2.4冰箱：0～5℃和-15～-20℃。均質器。乳缽和研棒。平皿：直徑90mm。天平：感量0.1g。顯微鏡。稀釋瓶：100mL、200mL和500mL三角燒瓶及廣口瓶。玻璃珠：直徑約5mm。3、培育基及試劑月桂基硫酸鹽胰蛋白(胨)(LST)肉湯。(BGLB)肉湯。3.3EC伊紅美藍瓊脂(EMB)。養(yǎng)分瓊脂斜面。3.7MR-VPKorser結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)。Butterfield生理鹽水。革蘭氏染色液。甲基紅指示劑。試劑。4、樣品制備75％4℃冰箱保存。2～5℃18h45℃15min不同食品樣品勻液的制備225mL30cm7s251：10固體和半固體食品225mL8000r/min1：1010-2、10-3、10-4……。從制備樣品勻液至稀釋完畢，全過程不得超15min。5、大腸菌群的測定大腸菌群MPN值的測定)(LST)1mL。將接種管置于36±1℃培育48±2h。24h48h進一步作證明試驗。大腸菌群的證明試驗將全部產氣管用直徑為3mm的接種環(huán)移種到煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯管中。BGLB36±1℃48±2h。記錄全部BGLB肉湯管的產氣管數(shù)。MPNB(補充件)]報告每克(毫升)MPN6、糞大腸菌群測定用直徑為3mm的接種環(huán)將全部48±2h內產氣的LST肉湯管培育物移種于EC肉湯管中。EC30min44.5±0.5℃24±2h。44.5℃44.5℃不產氣的產氣腸桿菌或其他大腸菌群細菌作陽性和陰性比照。試驗陰性。結果報告：按產氣管數(shù)，查MPN表報告每克(毫升)樣品中糞大腸菌群的MPN值。靛基質MRVP枸椽酸鹽鑒定(型別)＋＋－－典型大腸桿菌－＋－－非典型大腸桿菌＋＋－＋典型中間型－＋－＋非典型中間型－－＋＋典型產氣腸桿菌＋－＋＋非典型產氣腸桿菌7、大腸桿菌測定將6.3EC24h平板，36±1℃24±2h。檢查平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。如有典型菌落，則從每個平板上至少挑取2236±1℃18～24h。將斜面培育物移種到以下培育基中進展生化試驗。色氨酸肉湯：在36±1℃24±2hKovacs0.2～0.3mL，上層消滅紅色為靛基質陽性反響。48±2h1mL13mm×100mm0.6mL，40％0.2mL2h，VP48h5基紅試驗陽性，假設變黃色則為陰性反響。Koser36±1℃96hLST36±1℃48±2h，觀看試管中是否產氣。物作革蘭氏染色。大腸桿菌為革蘭氏陰性。7.4.6 大腸桿菌與非大腸桿菌生化鑒別如下：重復試驗。IMViCMPNMPN8、大腸菌群固體培育基測定法4計數(shù)1mL。1mL(VRBA)10～15mL旋轉平皿，將培育基與樣液充分混勻。待瓊脂凝固后，再加3～4mLVRBA掩蓋平板表層。8.2.4翻轉平板，置于36±1℃18～24h。0.5mm證明BGLB24h48h，觀看產氣狀況。色，以便排解革蘭氏陽性桿菌。結果報告8.2.5板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每克(毫升)樣品中大腸菌群數(shù)。例：10-41mL，在VRBA10010BGLB6100×6/10×10-4/g(mL)＝6.0×105/g(mL)附 A1月桂基硫酸鹽胰蛋白(胨)(LST)肉湯(Trypticase)20g氯化鈉5.0g乳糖5.0g磷酸氫二鉀2.75g磷酸二氫鉀2.75g月桂基硫酸鈉0.1g蒸餾水1000.0mL20mm×150mm10mL。121℃15minpH6.8±0.2。A2煌綠乳糖膽鹽(BGAB)肉湯蛋白胨 10.0g乳糖 10.0g膽粉(oxgall或oxbile)溶液 0.1％煌綠水溶液 13.3mL蒸餾水200mL(20.0g200mL，pH7.0～7.5)，975mL，pH7.40.1％煌綠13.3mL，1000mL，20mm×150mm10mL。121℃15minpH7.2±0.1。A3EC)20.0g3號膽鹽或混合膽鹽 1.5g乳糖 5.0g磷酸氫二鉀 4.0g磷酸二氫鉀 1.5g氯化鈉 5.0g蒸餾水 1000.0mL。121℃15min，pH6.9±0.1。A4伊紅美藍瓊脂(EMB)蛋白胨 乳糖 10.0g磷酸氫二鉀 2.0g瓊脂 15.0g伊紅γ(水溶性) 美藍 蒸餾水 1000.0mL100mL200mL，15minpH7.1±0.2。使用前將瓊脂溶化，于100mL5mL20％乳糖水溶液、2mL2％伊紅γ1.3mL0.5％的45～50℃傾注平皿。A5養(yǎng)分瓊脂斜面牛肉膏 3.0g蛋白胨 5.0g瓊脂 15.0g1000.0mL121℃高壓滅菌15minpH7.3。滅菌后擺成斜面?zhèn)溆?。A6色氨酸肉湯1000.0mL15min。pH6.9±0.2。A7MR-VP(胨)胨 7.0g葡萄糖 5.0g酸氫二鉀(KHPO) 5.0g2 41000.0mL15min，pH6.9±0.2。A8Koser酸氫銨鈉(NaNHHPO·4HO) 1.5g4 4 2磷酸氫二鉀(KHPO)1.0g2 4酸鎂(MgSO·7HO) 0.2g4 2椽酸鈉(含2HO) 3.0g21000.0mL10mL，121℃15min。最終pH6.7±0.2。A9結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)蛋白胨7.0g酵母膏3.0g乳糖10.0g氯化鈉5.0g31.5g中性紅0.03g結晶紫0.002g15～18g蒸餾水1000.0mL將上述成分溶于蒸餾水中，靜置幾分鐘，充分攪拌，調至pH7.4±0.12min，將45～50℃3h。酸鹽緩沖稀釋液貯存液 2 4500mL175mLpH7.2。用蒸餾水加至1000mL稀釋液 取貯存液1.25mL，，121℃15min。A11氯化鈉 8.5g15min。A12色液：結晶紫 1.0g20.0mL1％80.0mL革蘭氏碘液：碘 1.0g碘化鉀2.0g300mL。沙黃復染液：沙黃0.25g90.0mL染色法將涂片在火焰上固定，滴加結晶紫染液，染1min，水洗。滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗。滴加95％乙醇脫色約15～30s，直至染色液被洗掉，不要過分脫色，水洗。氏陰性菌呈紅色。A13Kovacs對二甲氨基苯甲醛5.0g戊醇75.0mL 鹽酸(濃)25.0mLA14甲基紅0.1g500mL。A15Voges-Proskauer(V-P)試劑甲液α-萘酚 5.0g無水乙醇100.0mL 乙液陽性管數(shù)陽性管數(shù)氫氧化鉀40.0g 附 錄B1g陽性管數(shù)陽性管數(shù)0.10.010.0010.10.010.001000＜32009.10013201140026202200039203260103210150116.1211200129.22122702312213340206.2220210219.322128022122223502316223420309.4230290311323136032162324403319233531003.6300231017.233139102113026410315303951107331043111113117511215312120113193131601201132093121153211501222032221012324323290130163302401312033146013224332110013329333>11000.1，0.010.001g。3[0.1g(mL)、0.01g(mL)0.001g(mL)]，30.1