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文檔簡(jiǎn)介
12023/7/31
黃文輝青海大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物培養(yǎng)標(biāo)本采集標(biāo)準(zhǔn)化培訓(xùn)
2023/7/312我們應(yīng)該追求:
“準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷”
“針對(duì)性病原學(xué)治療”
正確的微生物標(biāo)本采集和運(yùn)送,是準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷的前提!
微生物讓人類步步為營(yíng)!2023/7/313
隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的進(jìn)步和人類對(duì)疾病的不斷認(rèn)識(shí),醫(yī)學(xué)的學(xué)科分類越來(lái)越細(xì),疾病的分類越來(lái)越完善,而與之相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)也日趨精密復(fù)雜。在多數(shù)情況下,實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)比病人的主訴敏感、準(zhǔn)確、客觀,而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)疾病的診斷和治療越來(lái)越依賴于實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果?!熬由魇?,差之毫厘,謬以千里”
——《禮記》2023/7/314良好的標(biāo)本是成功了一半!
為了取得準(zhǔn)確的、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果,必須取得高質(zhì)量的標(biāo)本。高質(zhì)量的標(biāo)本是高質(zhì)量的檢驗(yàn)的第一步。沒(méi)有高質(zhì)量的標(biāo)本,再先進(jìn)、再精密的儀器也得不出準(zhǔn)確的結(jié)果,而很多采集標(biāo)本的患者和醫(yī)務(wù)人員都有忽視了標(biāo)本的采集質(zhì)量而引起結(jié)果很大的偏差的經(jīng)歷。2023/7/315標(biāo)本采集和運(yùn)送是細(xì)菌培養(yǎng)成功的最最重要的關(guān)鍵;但由于標(biāo)本的采集和運(yùn)送常有護(hù)士或醫(yī)生或病人自己完成,所以也是最不容易做好的事情,而且不知道問(wèn)題所在之處,造成的后果是?......
臨床醫(yī)生最不能接受的問(wèn)題:陽(yáng)性率低、標(biāo)本污染2023/7/316棉花纖維+竹/木條
抑菌區(qū)是因?yàn)椋褐参锓置诔鰜?lái)的:脂肪酸;樹(shù)脂;福爾馬林;2023/7/317氯氣,重金屬與膠水的影響
推薦使用專業(yè)運(yùn)送培養(yǎng)基
多用途運(yùn)送系統(tǒng)–需氧+厭氧低氧化的環(huán)境–不會(huì)對(duì)標(biāo)本的微生物造成損害拭子是深入培養(yǎng)基中來(lái)保護(hù)苛養(yǎng)菌與厭氧菌兩面是以塑料密封,不透水和漏氣–減少污染和維持缺氧環(huán)境流感嗜血桿菌在三種不
同的運(yùn)送基的存活率2023/7/3110基本原則1.及時(shí)采集微生物標(biāo)本作病原學(xué)檢查2.在抗菌藥物使用前采集標(biāo)本3.采樣時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作4.采樣后立即送檢5.棉拭子標(biāo)本宜用運(yùn)送培養(yǎng)基6.混有正常菌群污染標(biāo)本,不可置肉湯培養(yǎng)7.標(biāo)本容器須滅菌處理,但不得使用消毒劑8.送檢標(biāo)本應(yīng)注明來(lái)源和檢驗(yàn)?zāi)康?023/7/3111如何提高細(xì)菌陽(yáng)性檢出率?標(biāo)本采集時(shí)機(jī)標(biāo)本采集方法標(biāo)本的質(zhì)與量標(biāo)本的運(yùn)送與保存鏡檢篩選合格標(biāo)本高質(zhì)量、多種分離培養(yǎng)基培養(yǎng)環(huán)境2023/7/3112“正確的微生物學(xué)檢驗(yàn)始自正確的標(biāo)本采取。臨床醫(yī)師、護(hù)師及檢驗(yàn)技師都必須通曉其要領(lǐng)?!?/p>
——著名的臨床微生物檢驗(yàn)專著ManualofClinicalMicrobiology的主編PatrickMurray細(xì)菌學(xué)試驗(yàn)的各種標(biāo)本的運(yùn)送及貯存條件
正常菌群的分布位部常見(jiàn)菌種皮膚表皮葡萄球菌、類白喉?xiàng)U菌、綠膿桿菌、恥垢桿菌等口腔鏈球菌(甲型或乙型)、乳酸桿菌、螺旋體、梭形桿菌、白色念球菌、(真菌)表皮葡萄球菌、肺炎球菌、奈瑟氏球菌、類白喉?xiàng)U菌等鼻咽腔甲型鏈球菌、卡他球菌、肺炎球菌、流感桿菌、乙型鏈球菌、葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、變形桿菌等眼結(jié)膜皮表葡萄球菌、結(jié)膜干燥桿菌、類白喉?xiàng)U菌等胃正常一般無(wú)菌
腸道類桿菌、雙歧桿菌、大腸桿菌、厭氧性鏈球菌、糞鏈球菌、葡萄球菌、白色念球菌、乳酸桿菌、變形桿菌、破傷風(fēng)桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌等陰道乳酸桿菌、白色念球菌、類白喉?xiàng)U菌、大腸桿菌等
尿道表皮葡萄球菌、類白喉?xiàng)U菌、恥垢桿菌等152023/7/31血培養(yǎng)標(biāo)本采集、運(yùn)送標(biāo)準(zhǔn)化操作2023/7/3116一、血培養(yǎng)指征患者出現(xiàn)寒戰(zhàn)、體溫超過(guò)38℃或低體溫,懷疑血流感染時(shí),尤其存在以下情況時(shí),應(yīng)抽血做細(xì)菌和真菌培養(yǎng):醫(yī)院內(nèi)肺炎;留置中心靜脈導(dǎo)管超過(guò)72小時(shí);感染性心內(nèi)膜炎;骨髓炎;有嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病;免疫缺陷伴全身感染癥狀;臨床醫(yī)生懷疑有血液感染可能的其他情況。2023/7/3117二、采血時(shí)機(jī)一旦懷疑有血流感染可能,應(yīng)立即采血做血培養(yǎng),最好在抗生素使用前或停用抗生素24小時(shí)后,以寒戰(zhàn)、發(fā)熱時(shí)采集為宜。2023/7/31182023/7/3119
三、采血流程㈠消毒1、培養(yǎng)瓶消毒程序:用消毒液消毒培養(yǎng)瓶橡皮塞,待干燥后使用。2、皮膚消毒程序:用消毒液從穿刺點(diǎn)向外畫(huà)圈消毒,至消毒區(qū)域直徑達(dá)5cm以上,待消毒液揮發(fā)干燥后(常需30秒以上)穿刺采血。㈡靜脈穿刺和培養(yǎng)瓶接種成人用注射器無(wú)菌穿刺取血后,排盡針頭內(nèi)空氣,直接注入血培養(yǎng)瓶,勿換針頭(如果行第二次穿刺或用頭皮針取血時(shí),應(yīng)換針頭),先注入?yún)捬跖囵B(yǎng)瓶,避免注入空氣,然后注入需氧培養(yǎng)瓶,輕輕混勻以防血液凝固。近年來(lái),臨床普遍采用負(fù)壓血培養(yǎng)瓶,將血從患者靜脈直接吸入血培養(yǎng)瓶,減少污染環(huán)節(jié)。2023/7/3120㈢注意事項(xiàng)1、檢驗(yàn)單需注明抗菌藥物使用情況、血液采集時(shí)間和部位、臨床診斷等患者信息。2、采血部位通常為肘靜脈,疑為細(xì)菌性心內(nèi)膜炎時(shí)以肘動(dòng)脈或股動(dòng)脈采血為宜,切忌在靜滴抗生素的靜脈處采血。除非懷疑有導(dǎo)管相關(guān)的血流感染,否則不應(yīng)從留置靜脈或動(dòng)脈導(dǎo)管取血,因?yàn)閷?dǎo)管易被皮膚正常菌群污染。3、采血次數(shù):對(duì)于成年患者,應(yīng)該同時(shí)分別在兩個(gè)部位采集血標(biāo)本,在兩個(gè)不同部位分離到同樣菌種才能確定是病原菌。2023/7/31224、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎:在24小時(shí)內(nèi)取血3次,每次間隔不少于30分鐘。必要時(shí)次日再做血培養(yǎng)2次。5、采血量:以培養(yǎng)基與血液之比10:1為宜,以稀釋血液中的抗菌藥物、抗體等殺菌物質(zhì)。采血量少會(huì)明顯降低陽(yáng)性率。成人每次每培養(yǎng)瓶采血8~10ml,嬰幼兒每次培養(yǎng)瓶采血2ml。四、運(yùn)送要求1、所有標(biāo)本采集后都應(yīng)立即送往實(shí)驗(yàn)室,最好在2小時(shí)內(nèi),如果不能及時(shí)送檢,宜置于室溫環(huán)境。血培養(yǎng)瓶送到檢驗(yàn)科放入培養(yǎng)箱前,不應(yīng)暫存于冰箱內(nèi)。2、送檢標(biāo)本應(yīng)正確粘貼條形碼,注明采樣時(shí)間和送檢時(shí)間。3、安全防護(hù):放標(biāo)本的容器必須防漏,禁止將滲漏的標(biāo)本送往實(shí)驗(yàn)室。2023/7/3130尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送標(biāo)準(zhǔn)化操作2023/7/3131一、采集時(shí)機(jī)宜為抗菌藥物使用前的清晨第一次尿液。二、采集方法(一)、清潔中段尿1、女性:采集前用肥皂水或0.1%的高錳酸鉀溶液等沖洗外陰,用手指分開(kāi)陰唇,棄其前段尿,不終止排尿,留取中段尿10~20ml于無(wú)菌容器內(nèi)。2、男性:采集前用肥皂水或0.05%~0.1%的碘伏溶液清洗尿道口,擦干后上翻包皮,棄其前段尿,不終止排尿,留取中段尿10~20ml于無(wú)菌容器內(nèi)。(二)、恥骨上膀胱穿刺主要用于厭氧菌培養(yǎng)或留取標(biāo)本困難的嬰兒,脊柱損傷患者的尿液采集。先用0.25%的碘伏消毒穿刺部位皮膚,然后使用無(wú)菌注射器直接從恥骨聯(lián)合與臍連線上高于恥骨聯(lián)合2cm處刺入膀胱吸取尿液10~20ml于無(wú)菌容器內(nèi)。2023/7/3132(三)、導(dǎo)尿管尿1、直接導(dǎo)尿法:使用0.05%~0.1%的碘伏溶液消毒會(huì)陰局部,用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱,先棄其前段尿液約15ml,再留取中段尿10~20ml于無(wú)菌容器內(nèi)。2、留置導(dǎo)尿管法:醫(yī)院內(nèi)尿路感染中,臨床最常用方法。采集前先夾住導(dǎo)尿管,采集時(shí)則松管棄其前段尿液,使用0.25%~0.5%的碘伏消毒導(dǎo)尿管的采樣部位,使用無(wú)菌注射器斜刺入導(dǎo)尿管(從采樣口或靠近尿道的導(dǎo)尿管管壁)抽取10~20ml尿液于無(wú)菌容器內(nèi)。3、回腸造口導(dǎo)尿管法:摘除導(dǎo)管,棄去里面的尿液,先用0.05%~0.1%的碘伏消毒吻合口,再將導(dǎo)尿管插入到清潔的吻合口,直至筋膜的深部采集10~20ml尿液于無(wú)菌容器內(nèi)。2023/7/3133(四)、小兒收集包對(duì)于無(wú)自控能力的小兒可應(yīng)用收集包采集尿液,這種裝置由于很難避免會(huì)陰部菌群污染產(chǎn)生假陽(yáng)性,所以只有在檢驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)才有意義。如果檢驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性,應(yīng)結(jié)合臨床進(jìn)行分析,必要時(shí)可使用恥骨上膀胱穿刺或?qū)蚍羧∧蛞哼M(jìn)行復(fù)檢。三、標(biāo)本運(yùn)送標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)送檢并接種,室溫下保持時(shí)間不宜超過(guò)2小時(shí)(夏季保存時(shí)間應(yīng)適當(dāng)縮短或冷藏保存)。如果不能及時(shí)運(yùn)送或接種,應(yīng)4℃冷藏。但保存時(shí)間也不應(yīng)超過(guò)8小時(shí)。2023/7/3134四、注意事項(xiàng)1.不應(yīng)從集尿袋中采集尿液。2.尿液中不應(yīng)加防腐劑或消毒劑3.若尿液培養(yǎng)前患者曾使用抗菌藥物,應(yīng)反復(fù)多次送檢。4.多次采集或24小時(shí)尿液不應(yīng)用于尿液培養(yǎng)。5.除非進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查,不應(yīng)對(duì)長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿管患者常規(guī)進(jìn)行尿液培養(yǎng)。6.培養(yǎng)結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)、菌落計(jì)數(shù)以及微生物種類等進(jìn)行綜合判斷。手術(shù)部位感染標(biāo)本標(biāo)準(zhǔn)化操作一、一般原則1.在抗菌藥物使用前,且僅在有臨床感染癥狀或傷口惡化或長(zhǎng)期不能愈合時(shí)采集標(biāo)本。2.皮膚或黏膜表面的清潔。⑴閉合傷口和穿刺物標(biāo)本:消毒方法同血培養(yǎng)標(biāo)本的皮膚消毒。⑵開(kāi)放傷口:無(wú)菌生理鹽水充分沖洗傷口部位,不可以用消毒劑。3.采集新鮮的感染組織,避免采集淺表的組織碎屑。4.若可以采集穿刺物或活檢標(biāo)本,應(yīng)避免拭子標(biāo)本。二、容器1.較大的標(biāo)本:含有少量生理鹽水的帶螺紋口的無(wú)菌塑料容器。2.標(biāo)本較小或拭子標(biāo)本:MW&ETRANSWAB運(yùn)輸培養(yǎng)基,適用于需氧和厭氧菌。三、采集方法㈠封閉性膿腫1.注射器穿刺抽取膿液。2.若無(wú)法抽到膿液,應(yīng)先皮下注射少量無(wú)菌生理鹽水,再次穿刺抽吸膿液;若膿液過(guò)多,應(yīng)先切開(kāi)引流,在基底部或膿腫壁采集標(biāo)本。膿液的量以大于1ml為宜。3.排除注射器內(nèi)部及針頭的氣體,用無(wú)菌橡皮塞封閉針頭送檢;或直接打入血培養(yǎng)瓶中。疑為厭氧菌,應(yīng)迅速將膿液打入?yún)捬跹囵B(yǎng)瓶中。㈡組織和活檢標(biāo)本1.采集足夠大的組織,體積以1mm3為宜,避免在壞死區(qū)域采集。2.將小塊的組織放在運(yùn)輸培養(yǎng)基內(nèi);較大的放在無(wú)菌容器中,并加入少量無(wú)菌生理鹽水。㈢開(kāi)放傷口1.無(wú)菌生理鹽水徹底沖洗淺表部位,去除表面的滲出物和碎屑。2.用拭子深入傷口的基底部或傷口-正常組織邊緣部采集兩個(gè)標(biāo)本,分別用于培養(yǎng)和革蘭氏染色。四、標(biāo)本的標(biāo)識(shí)填寫(xiě)患者信息、標(biāo)本類型(深部組織、表淺組織、膿腫和穿刺物等)、標(biāo)本的來(lái)源(腹腔、腿和上臂等),記錄標(biāo)本采集的日期和時(shí)間及是否在使用抗生藥物前采集,選擇檢查項(xiàng)目(需氧培養(yǎng)或厭氧培養(yǎng))。五、標(biāo)本的送檢為了更好地分離病原菌,標(biāo)本應(yīng)在采集后的30分鐘內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室,送檢時(shí)應(yīng)保持標(biāo)本的濕潤(rùn)(盡量采用運(yùn)輸培養(yǎng)基,組織可以放在生理鹽水中)。在送檢前或運(yùn)送過(guò)程中,禁止將標(biāo)本放于冰箱。若不能及時(shí)送檢,運(yùn)輸培養(yǎng)基中標(biāo)本應(yīng)室溫保存。但最長(zhǎng)不可超過(guò)24小時(shí)。2023/7/3139膿及創(chuàng)傷感染標(biāo)本的采
集及運(yùn)送標(biāo)準(zhǔn)化操作
2023/7/31566、折疊一次性吸痰管末端,插入口腔或鼻腔或人工氣道至適宜深度,放開(kāi)吸痰管末端,輕柔、靈活、迅速地左右旋轉(zhuǎn)上提吸痰管吸痰。見(jiàn)吸痰管內(nèi)有痰液吸出,即折疊一次性吸痰管退出。將一次性吸痰管與吸引器分離(使用人工呼吸機(jī)者,一次吸痰時(shí)間不超過(guò)15秒,吸痰前后需吸入高濃度氧氣1——2分鐘)。7、將痰液注入無(wú)菌容器內(nèi),如痰液黏稠可用一次性針筒向吸痰管末端注入少量生理鹽水,將痰液沖洗入無(wú)菌容器內(nèi)。四、運(yùn)送和保存應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室,否則應(yīng)4℃冷藏,但放置時(shí)間不可超過(guò)24小時(shí)。2023/7/3158上呼吸道標(biāo)本的采集、運(yùn)送標(biāo)準(zhǔn)化操作2023/7/3159【標(biāo)本送檢指征】1病毒性普通感冒伴有明顯咽痛時(shí),懷疑為咽部鏈球菌感染,應(yīng)做細(xì)菌培養(yǎng)。2細(xì)菌性咽-扁桃體炎:明顯咽痛、畏寒、發(fā)熱,體溫可達(dá)39℃以上。3上呼吸道感染易并發(fā)鼻竇炎、中耳炎、氣管-支氣管炎,需送相應(yīng)部位分泌物或痰液進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。2023/7/3160【標(biāo)本的采集方法】囑患者先用清水漱口,由檢查者將其舌外拉使懸雍垂盡可能向外牽引,用壓舌板將舌向下向外壓,用無(wú)菌棉拭子越過(guò)舌根到咽后壁或懸雍垂的后側(cè),反復(fù)擦拭數(shù)次然后送檢,拭子應(yīng)避免觸及舌、口腔粘膜和唾液。2023/7/3161生殖道標(biāo)本的采集
1、男性標(biāo)本:(1)如疑為急性淋病奈瑟菌或其他化膿性細(xì)菌感染應(yīng)在清洗龜頭部后,以碘伏或其他非粘膜刺激性消毒劑消毒后,擠出分泌物立即以無(wú)菌棉拭子采取,立即送檢,或以專用的細(xì)拭子插入尿道口1-2cm,停留十余秒鐘輕輕旋轉(zhuǎn)采集標(biāo)本置無(wú)菌容器。(2)如疑為前列腺炎、精囊炎的慢性淋病耐瑟菌感染應(yīng)由醫(yī)師按摩前列腺,以無(wú)菌手續(xù)自尿道口采取前列腺液送檢。2023/7/31622、女性標(biāo)本:(1)成年婦女自宮頸采取標(biāo)本,應(yīng)在擴(kuò)陰器的支持下,選取有炎癥或分泌物部位,先以無(wú)菌棉拭子拭去表淺層分泌物,再用另一拭子取分泌物送檢。如做厭氧或真菌培養(yǎng)應(yīng)另外采取標(biāo)本。外陰糜爛:用生理鹽水清洗后用無(wú)菌棉拭子擦洗,取邊緣的分泌物至無(wú)菌容器,立即送檢。(2)如未成年幼女疑患性病傳播疾病時(shí),不應(yīng)使用擴(kuò)陰器,以一無(wú)菌拭子在陰道口處采取分泌物送檢。2023/7/3163糞便標(biāo)本采集2023/7/3164【標(biāo)本送檢指征】1急性腹瀉:大便次數(shù)明顯增多,腹痛,里急后重,往往伴有發(fā)熱,大便性狀為粘液便或膿血便。2慢性腹瀉:大便次數(shù)多,多為稀便,伴有全身乏力等癥狀。3無(wú)痛性大量水樣便或米泔樣稀便。4先吐后瀉:惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉。有集體發(fā)病史,多為細(xì)菌性食物中毒所致。5抗生素治療后腹瀉:常發(fā)生于長(zhǎng)期抗生素治療后,糊狀便,排便次數(shù)增加。6高熱驚厥:通常為中毒性痢疾,多見(jiàn)于嬰幼兒和小兒。2023/7/3165腸道正常菌群比較復(fù)雜,在腸道中菌群間有共生或過(guò)路、互不相干和制約關(guān)系等現(xiàn)象。一旦失去了正常生態(tài)平衡,在臨床上的一個(gè)表現(xiàn)就是菌群失調(diào)癥。如常住細(xì)菌在種群和數(shù)量上的比例失調(diào)就能引起慢性腹瀉,因此在留取糞便標(biāo)本時(shí)應(yīng)注意防止細(xì)菌污染。2023/7/3166糞便標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)挑取有膿血、粘液部分的糞便2—3g;液狀糞便取絮狀物,盛于滅菌的廣口盒中,并及時(shí)送檢和接種。在無(wú)法獲得糞便時(shí),可用無(wú)菌生理鹽水或增菌液濕潤(rùn)直腸,將棉拭子插入肛門(mén)4~5cm深處(小兒2~3cm),輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)一周擦取直腸表面的粘液后取出,盛入無(wú)菌試管或保存液中送檢。2023/7/3167采集時(shí)間:
1.腹瀉患者于急性期,盡量在用藥前采集糞便;
2.傷寒患者于發(fā)病2w以后采集糞便;
3.懷疑霍亂時(shí)立即采集糞便送檢。2023/7/3168厭氧菌感染培養(yǎng)標(biāo)本
標(biāo)本采集1.要注意避免標(biāo)本污染和與空氣接觸,嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作;2.用注射器抽取胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、膽汁、腦脊液或無(wú)菌手術(shù)抽出膿液;3.抽出液體標(biāo)本后,要盡快排除注射器內(nèi)的空氣。2023/7/3169厭氧菌感染培養(yǎng)標(biāo)本
標(biāo)本運(yùn)送①標(biāo)本采集后不得冰箱儲(chǔ)存,必須盡快(半小時(shí)內(nèi))送實(shí)驗(yàn)室;②運(yùn)送方法:a注射器運(yùn)送(標(biāo)本抽取后盡快排除空氣)或接種到專門(mén)的運(yùn)送培養(yǎng)基中直接運(yùn)送;b含運(yùn)送培養(yǎng)基的無(wú)氧小瓶運(yùn)送;c厭氧罐運(yùn)送(組織塊);d大量液體標(biāo)本運(yùn)送時(shí)要裝滿標(biāo)本瓶并立即驅(qū)氧,加蓋運(yùn)送;e一般不采用棉拭子法。2023/7/3170真菌感染培養(yǎng)標(biāo)本
1)淺部真菌感染標(biāo)本采集①皮膚:常規(guī)消毒皮膚,從皮膚癬菌皮損邊緣刮取鱗屑,置無(wú)菌平皿內(nèi)送檢;皮膚潰瘍則采集病損邊緣膿汁或組織;②指(趾)指甲:消毒指(趾)指甲并去掉其表面部分,取可疑病變部分,用刀片修成小薄片5~6片,置無(wú)菌容器內(nèi)送檢;③毛發(fā):采集根部斷折處,至少5~6根送檢。2023/7/3171真菌感染培養(yǎng)標(biāo)本2
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