茶多酚和咖啡堿綜合提取及初步純化

實驗一茶多酚和咖啡堿綜合提取及初步純化、實驗?zāi)康恼莆斩喾宇悺⒖Х葔A綜合提取分離技術(shù)的原理和方法。并通過薄層層析法對茶多酚和生物堿進(jìn)行初步純化，學(xué)會初步純化的方法與步驟。二、 實驗原理許多研究已表明茶葉中多酚類具有抗氧化性能，使食品的天然抗氧化劑，它對食品油脂的抗氧化能力為VE、BHT（二丁基羥基甲苯）及BHA（丁基羥基茴香醚）的3-9倍，而毒性比BHT和BHA低2-3倍。茶葉中嘌吟堿主要組分是咖啡堿，其含量占整個嘌吟堿99%左右?？Х葔A具有興奮神經(jīng)中樞、消除疲勞、興奮和強心作用，同時咖啡堿還有增加腎臟流血量，提高腎小球過濾率、有利尿等作用。茶葉中咖啡堿易溶于80r熱水和氯仿的。先用熱水浸提，然后用三氯甲烷萃取即可得到咖啡堿粗制品。茶葉中多酚可用乙酸乙酯萃取得到粗制品。三、 實驗設(shè)備、試劑電爐、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、烘箱、分液漏斗、燒杯、量筒試劑1：三氯甲烷、試劑2：乙酸乙酯四、 實驗步驟（1）多酚類、咖啡堿綜合提取技術(shù)1、 取干燥的茶葉10g，按比1:8的比例加沸水，煮沸30min，浸提過程攪拌數(shù)次。8層紗布過濾，合并濾液。2、 用等體積試劑1萃取三次，再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮蒸干得到咖啡堿粗品，然后用約2ml三氯甲烷溶解倒入小燒杯內(nèi)，50°C蒸干?；厥赵噭?，以便重復(fù)利用。稱量計算得率。3、 用等體積試劑2萃取上一步的水層3次，再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮蒸干得到茶多酚粗品，然后用約2ml乙酸乙酯溶解倒入小燒杯內(nèi)，70C蒸干?；厥赵噭?，以便重復(fù)利用。稱量計算得率。流程圖：（2）咖啡堿和茶多酚的薄層層析1、 將濃縮蒸干的咖啡堿粗品用少量三氯甲烷溶解，作為樣品溶液1;蒸干的茶多酚粗品同樣用乙酸乙酯溶解作為樣品溶液2,然后進(jìn)行薄層層析。取出兩塊硅膠板分別在距離薄層板底端1.5?2cm處，用鉛筆劃一條線，作為起點線。用毛細(xì)管吸取樣品溶液1和2,分別垂直地輕輕接觸到薄層板起點線上。樣品量不能太多，否則易造成半點過大。互相交叉或拖尾，不能得到很好的分離效果。2、 將選擇的分別適合溶液1和2的展開劑放在兩個層析缸中，茶多酚展開劑為正丁醇：冰乙酸：水（4:1:5），咖啡堿展開劑為（氯仿：甲醇：甲酸28:10:1）。使層析缸內(nèi)空氣飽和，

再將點好樣品的薄層板放入層析缸中進(jìn)行展開。使用足夠的展開劑使薄層板底部浸入溶劑3-4mm。但溶劑不能太多，否則樣點在液面以下，溶解到溶劑中，不能進(jìn)行層析。當(dāng)展開劑上升到薄層板的前沿（離頂端5?10mm處）或各分組已明顯分開時，取出薄層板。3、在溶劑蒸發(fā)前進(jìn)行顯色。茶多酚用顯色劑噴霧顯色，顯色劑：百分之一香莢藍(lán)鹽酸溶液?？Х葔A在紫外下照射進(jìn)行顯色。用鉛筆的劃出前沿的位置后進(jìn)行測量可觀察。根據(jù)Rf值的不同對各組進(jìn)行鑒別。五、結(jié)果與計算1、咖啡堿的粗提圖1得到的咖啡堿粗品烘干得到的咖啡堿粗品的質(zhì)量為0.02g，經(jīng)計算，咖啡堿的得率為0.2%2、咖啡堿薄層展開結(jié)果圖2咖啡堿的TLC結(jié)果點樣后，在紫外線下照射顯示出兩個點，分別距原點距離為4.5cm，7.0cm，溶劑前沿距離原點為8.5cm；經(jīng)計算，Rf值分別為0.529,0.8233、茶多酚的粗提圖3得到的茶多酚粗品燒杯底部乳黃色的物質(zhì)即為多酚類粗品，烘干得到的茶多酚粗品的質(zhì)量為0.50g,經(jīng)計算，茶多酚的得率為5.00%.4、茶多酚的薄層層析圖4茶多酚TLC顯色結(jié)果原點到溶劑前沿為8.8cm，點樣點到斑點中心1、2、3、4、5距離分別為2.4cm、2.5cm、3.0cm、3.7cm，計算得Rf1=0.273、Rf2=0.284、Rf3=0.341、Rf4=0.420六、結(jié)果分析與討論咖啡堿的薄層層析結(jié)果，在紫外燈下顯示每個點樣有兩個點，距離原點較近的為可可堿，較遠(yuǎn)的為咖啡堿。茶多酚薄層層析結(jié)果，顯色后出現(xiàn)四個點，從原點到溶劑前沿依次為EGCG、E