微生物實驗操作基本要求課件

微生物學基礎

------微生物實驗操作的基本要求微生物學基礎------微生物實驗操作的基本要求1微生物實驗操作的基本要求無菌操作微生物實驗操作的基本要求無菌操作2無菌指在環(huán)境中一切有生命活動的微生物的營養(yǎng)細胞及其芽孢或孢子都不存在的狀態(tài)。無菌操作在微生物的分離、接種、培養(yǎng)操作過程中防止培養(yǎng)物被其他微生物污染的操作技術稱為無菌操作技術。無菌操作創(chuàng)造無菌的培養(yǎng)環(huán)境防止在操作過程中其他微生物的侵入無菌指在環(huán)境中一切有生命活動的微生物的營養(yǎng)細胞及其芽孢或孢子3

無菌的環(huán)境

一無菌的器具、培養(yǎng)基

二無菌操作技術

三基本規(guī)則

四一、無菌操作技術無菌的環(huán)境一無菌的器具、培養(yǎng)基二無菌操作技術4

無菌的環(huán)境一1、無菌室2、超凈工作臺3、生物安全柜4、火焰周圍無菌的環(huán)境一51、無菌室

無菌的環(huán)境一標準無菌室的要求：房間設置（外面有緩沖室）、空氣過濾、墻面、墻角、微生物操作相關設備、紫外燈等。1、無菌室無菌的環(huán)境一標準無菌室的要6

無菌的環(huán)境一如條件有限，可在微生物實驗室內(nèi)專辟一個小房間作為無菌室?？梢杂冒宀暮筒ＡЫㄔ?，面積4-5平方米即可。板材和玻璃隔出的無菌室無菌的環(huán)境一板材和玻璃隔出的無菌室7

無菌的環(huán)境一2、超凈工作臺超凈工作臺是一種提供局部無塵無菌工作環(huán)境的垂直單向流型空氣凈化設備。超凈工作臺無菌的環(huán)境一2、超凈工作臺超凈工作臺83、生物安全柜

無菌的環(huán)境一生物安全柜外形與超凈臺類似，也提供局部無塵無菌工作環(huán)境。但它設置了風槽，氣流不會吹向使用者，可以有效保護使用者。3、生物安全柜無菌的環(huán)境一9一

無菌的環(huán)境4、火焰周圍通常使用酒精燈、煤氣燈，其火焰周圍是無菌區(qū)域（直徑10cm左右）。首先，利用高溫殺死細菌，而后利用酒精燃燒時向上形成的單向氣流形成一個無菌區(qū)域?；鹧嬷車菬o菌區(qū)域一無菌的環(huán)境4、火焰周圍火焰周圍是無10無菌的器具、培養(yǎng)基

二1、玻璃、金屬等器具干熱滅菌法2、玻璃、金屬、含水物品高壓蒸汽滅菌法3、金屬、玻璃器具火焰滅菌法4、液體或水溶性物質(zhì)過濾除菌法無菌的器具、培養(yǎng)基二111、玻璃、金屬等器具--干熱滅菌法設備：電烘箱用途：用于玻璃器皿、金屬器具等耐熱物品的烤干和滅菌。條件：160-165℃，滅菌1-2小時。

1、玻璃、金屬等器具--干熱滅菌法122、玻璃、金屬、含水物品等--高壓蒸汽滅菌法設備：高壓蒸汽滅菌鍋用途：培養(yǎng)基、生理鹽水、廢棄物、采樣器、紗布、衣物的滅菌。條件：121℃水蒸氣20~30分鐘

培養(yǎng)基一般使用高壓蒸汽滅菌法2、玻璃、金屬、含水物品等--高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基一般使用高133、一些金屬、玻璃器具--火焰滅菌法即在火焰外焰上灼燒進行滅菌。用途：接種環(huán)、接種針；涂布器；試管管口、錐形瓶瓶口等的滅菌。3、一些金屬、玻璃器具--火焰滅菌法144、液體或水溶性物質(zhì)--過濾除菌法器具：細菌過濾器用途：不耐高溫的液體、水溶性物質(zhì)的除菌。細菌過濾器4、液體或水溶性物質(zhì)--過濾除菌法細菌過濾器15無菌操作技術

三我們通過一定的技術來保證目的微生物、培養(yǎng)基不被環(huán)境微生物污染，這些技術就是無菌操作技術。包括手部清潔消毒，用接種針、接種環(huán)、吸量管、涂布棒等工具進行各種操作等等。無菌操作技術三161、手部清潔消毒洗手：手部有可見灰塵時、飯前、便后，用水和肥皂洗手；Handrub（揉手）：手部較清潔時，75%乙醇或者醇基消毒劑揉手。1、手部清潔消毒17動作：手掌-手背-指縫-手指-拇指-指尖-手腕動作：手掌-手背-指縫-手指-拇指-指尖-手腕182、培養(yǎng)皿操作培養(yǎng)皿開合：單手打開和蓋上皿蓋，包括持皿法和皿加法兩種。此操作用于制作培養(yǎng)基平板、接種等。持皿法2、培養(yǎng)皿操作持皿法19皿加法皿加法203、接種環(huán)操作包括灼燒接種環(huán)、接種、劃線等。3、接種環(huán)操作21灼燒接種環(huán)先斜放外焰灼燒接種環(huán)，然后垂直放置后繼續(xù)灼燒，再斜燒金屬桿?，F(xiàn)在紅外接種環(huán)滅菌器使用也比較廣泛。微生物實驗操作基本要求課件22用接種環(huán)進行接種用接種環(huán)進行接種23用接種環(huán)進行劃線用接種環(huán)進行劃線244、涂布棒操作灼燒滅菌：可以沾酒精然后灼燒，灼燒范圍要包括其桿部。4、涂布棒操作25涂布：將菌液滴在培養(yǎng)基表面中央。右手拿涂布棒將菌液沿一條直線來回推動，然后沿一垂直線來回推動，平板邊緣處可改變方向再涂幾次。微生物實驗操作基本要求課件265、試管操作單試管操作（注意左右手的使用）5、試管操作單試管操作27雙試管操作5、試管操作無菌操作視頻雙試管操作5、試管操作無菌操作視頻28操作前準備1

必須明確物品的無菌區(qū)和非無菌區(qū)。工作人員需先戴帽子、口罩及洗手，并將手擦干，注意空氣和環(huán)境清潔。操作中2

夾取無菌物品，必須使用無菌持物鉗。

進行無菌操作時，凡未經(jīng)消毒的手、臂，均不可直接接觸無菌物品或超過無菌區(qū)取物。無菌物品管理3

無菌物品必須保存在無菌包或滅菌容器內(nèi)，不可暴露在空氣中過久。無菌物品和非無菌物應分開放置。無菌包一經(jīng)打開即不能視為絕對無菌，應盡早使用。凡已取出的無菌物品雖未使用也不可再放回無菌容器內(nèi)。無菌操作原則操作前1必須明確物品的無菌區(qū)和非無菌區(qū)。操作中229二、微生物實驗室要求（1）實驗室內(nèi)要經(jīng)常保持清潔衛(wèi)生。（2）實驗室應井然有序，不得存放實驗室外及個人物品、儀器等。（3）測試用過的廢棄物要倒在固定的箱筒內(nèi)，并及時處理。（4）實驗室應具有優(yōu)良的采光條件和照明設備。（5）實驗室工作臺面應保持水平和無滲漏，墻壁和地面應當光滑和容易清洗。（6）實驗室布局要合理，一般應有準備間和無菌室。二、微生物實驗室要求（1）實驗室內(nèi)要經(jīng)常保持清潔衛(wèi)生。30三、微生物實驗的安全要求（一）一般要求（1）進入實驗室工作時，衣、帽、鞋必須穿戴整齊。（2）在進行高壓、干燥、消毒等工作時，不得擅自離開現(xiàn)場，認真觀察溫度、時間。蒸餾易揮發(fā)、易燃液體時，不準直接加熱，應置水浴鍋上進行。（3）嚴禁用口直接吸取藥品和菌液，按無菌操作進行，如發(fā)生菌液濺出容器外時，應立即用有效消毒劑進行徹底消毒，安全處理后方可離開現(xiàn)場。（4）工作完畢，兩手用肥皂洗凈，必要時可用新潔爾滅、過氧乙酸泡手，然后用水沖洗。工作服要經(jīng)常清洗，保持整潔，必要時高壓消毒。（5）實驗完畢及時清理現(xiàn)場和實驗用具，對染菌物品進行消毒滅菌處理。（6）實驗結(jié)束后認真檢查水、電和正在使用得儀器設備，關好門窗，方可離去。三、微生物實驗的安全要求（一）一般要求31三、微生物實驗的安全要求（二）消防安全要求（1）注意預防供電線路老化造成的漏電著火。（2）注意設備原因?qū)е碌氖Щ?。設備超出正常使用壽命；設備出現(xiàn)故障未及時發(fā)現(xiàn)和維修?！柽^夜而無人看守的恒溫培養(yǎng)箱和干燥鼓風箱等。儀器操作不當，溫度設置過高，引起失火?！銣馗稍锕娘L箱（3）防止未關電源引起失火。（4）防止操作不慎，使火源接觸易燃物質(zhì)，引起著火。（5）避免出現(xiàn)爆炸事故。——滅菌鍋三、微生物實驗的安全要求（二）消防安全要求32三、微生物實驗的安全要求（三）藥品使用安全擦拭顯微鏡鏡頭的二甲苯——易揮發(fā)——吸入過多影響健康；芽孢染色的孔雀石綠——致癌；常用于顯微鏡鏡頭的香柏油——劇毒；濃硫酸、苯酚等——腐蝕實驗儀器，傷害皮膚，眼睛等。三、微生物實驗的安全要求（三）藥品使用安全擦拭顯微鏡鏡頭的二33三、微生物實驗的安全要求（四）細菌感染和污染

細菌易發(fā)生變異，在某些特定條件下由非致病菌轉(zhuǎn)變?yōu)橹虏【Ｒ虼藨⒁夥婪?，不可麻痹大意。（五）?/p>