色譜柱選擇與維護(hù)

色譜柱選擇與維護(hù)第1頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月

色譜柱的選擇與維護(hù)公司簡介如何選擇色譜柱A、固定相的選擇B、PH的選擇如何維護(hù)色譜柱廣州菲羅門科學(xué)儀器有限公司第2頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月中國全權(quán)總代理廣州菲羅門科學(xué)儀器有限公司第3頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月廣州菲羅門科學(xué)儀器有限公司

我們的宗旨:以最真誠和迅速的態(tài)度替用戶提供優(yōu)質(zhì)服務(wù),解決分析的問題和需要第4頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月1982成立于美國加州提供一系列非常完整的色譜柱極少數(shù)專門提供色譜耗材公司-液相和氣相免費(fèi)提供超過10000應(yīng)用譜圖免費(fèi)提供技術(shù)支持免費(fèi)提供技術(shù)資料第5頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月第6頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月2004LabvisionHPLCColumnReport2004年一月到六月Labvision調(diào)查美國1200實(shí)驗(yàn)室結(jié)果使用柱子數(shù)量的比例Phenomenex 25%W 22.5%A 7.7%S 7.6%其他5%以下第7頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月如何選擇適當(dāng)?shù)纳V柱第8頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月理想的柱子可以適用于分析所有的化合物永遠(yuǎn)不會壞理想分離度第9頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月決定峰分離度的三個(gè)要素峰保留時(shí)間選擇性(出峰的順序)柱效第10頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月如何得到最理想的分析結(jié)果流動(dòng)相,被分析物,和固定相三者之間的作用影響峰保留時(shí)間和峰分離性.峰保留時(shí)間短一般峰型較好,但分離可能不理想.所以為了調(diào)節(jié)最理想的分析結(jié)果,可以改變下列的一項(xiàng)或數(shù)項(xiàng)條件:流動(dòng)相固定相pH溫度

第11頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月固定相的選擇

疏水性的選擇極性的選擇苯基的選擇

第12頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月固定相疏水性考慮的要素

鍵合相的種類(C18,C8,Phenyl,etc)表面積鍵合相的鍵合率第13頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Luna?C18(2)–月神品質(zhì)可靠,世界暢銷的C18柱重復(fù)性高–可以同時(shí)提供3個(gè)不同的批次的柱子第14頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Luna?C18(2)GinsengRootColumn: Luna5μmC18/ODS(2)Dimensions:150x4.6mmIDElutionType:GradientEluentA: Acetonitrile/water(15:85)EluentB: Acetonitrile/water(80:20)

FlowRate:1.5mL/minTemperature:25°CDetection: UV-VisAbs.–VariableWave.@205nmAppID1125第15頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Luna?C8(2)&C5

減少疏水性化合物的保留時(shí)間 減少分析的時(shí)間第16頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Synergi?Max-RP

疏水性和C18柱類似–但這是一支C12柱 提供比C18柱更尖的柱峰,尤其是分析堿性化合物第17頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Synergi?Max-RPBasicDrugsatNeutralpH 第18頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月疏水性的比較C18phasesC8phase300?C18phase第19頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月極性選擇性的考慮首先考慮固定相的極性封尾,封端基團(tuán)分析物的極性官能基

之間的作用第20頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月極性選擇性如何增加極性的選擇性

極性基團(tuán)封端極性基團(tuán)鑲嵌苯基第21頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月極性選擇性Columns: Luna?5mC18(2) YMC-Pack?5mProC18

Synergi?4mPolar-RP?(Ether-linkedPhenyl)

150x4.6mmMobilephase: 75:25Methanol:waterFlowrate: 1mL/minComponents: 1.Estrone 2.Estradiol第22頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月極性選擇性Luna?C18(2)Synergi?Polar-RP?YMC-Pack?ProC181+21+212第23頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月SynergiMax-RP-C12SynergiHydro-RP-C18SynergiFusion-RP–C18SynergiPolar-RP–PhenylSynergi?第24頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月SilicaAdvantageBalancingEfficiency&BackpressureLinearVelocity(mm/sec)PlateHeight(H)5μ4μ3μFlowRate(mL/min)PressureDrop(Bar)higherefficiencieslowerbackpressuresSynergi?第25頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Synergi?第26頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Synergi?Max-RP與C18柱性能類似的C12柱第27頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Synergi?Polar-RP?保留極性和苯基化合物100%水溶液穩(wěn)定增加極性的選擇性第28頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Synergi?Hydro-RP

疏水性非常強(qiáng)..

極性封端100%水溶性穩(wěn)定增進(jìn)極性的選擇性第29頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月SynergiHydro-RPVS.Luna?C18(2)Synergi?Hydro-RP第30頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月

SynergiHydro-RPSynergiMax-RPMobilePhase: A:20mMKH2PO4,pH4.6 B:AcetonitrileGradient: A/B(95:5)toA/B(65:35)in15minFlowrate: 1.5mL/minSample: 1.Morphine 2.Hydromorphone 3.Codeine 4.Nalorphine 5.OxycodoneSynergi?Hydro-RP第31頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Synergi?Fusion-RP

增加極性的選擇性同時(shí)減少疏水性的分析時(shí)間

在水溶液中100%穩(wěn)定在LC-MS下面基本無流失第32頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月min02468101214mAU0100200300400500VWD1A,Wavelength=210nm(S:\HPCHEM\1\DATA\SW1003\TEST0034.D)min02468101214mAU050100150200250300350VWD1A,Wavelength=210nm(S:\HPCHEM\1\DATA\SW1003\FUSI0046.D)RunningConditionsMobilephase:75:2520mMPotassiumphosphatepH2.5:AcetonitrileFlowrate: 1.5ml/minTemperature:AmbientDetection: 210nmInjection: 1.Maleicacid 2.Chlorpheniramine 3.Triprolidine 4.Diphenhydramine Synergi

Fusion-RP480?一般的C18柱極性增大疏水性減少第33頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月SynergiFusion-RPAvgsymm:0.91SynergiMax-RPAvgsymm:0.77LunaC18(2)Avgsymm:0.82RunningConditionsMobilephase:A:25mMTrispH9B:ACNGradient: 40%-70%Bin15minutesFlowrate: 1.0ml/minDetection: 230nmComponents: 1.Scopolamine,LogP= 2.Lidocaine,LogP=2.44 3.Noscapine,LogP=1.97 第34頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月苯基的選擇性影響被分析物和固定相之間產(chǎn)生的作用 Luna?Phenyl-Hexyl使用甲醇可以增加作用效果第35頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Luna?Phenyl-Hexyl具有疏水性和苯基雙重的選擇性 重復(fù)性高和穩(wěn)定的苯基固定相第36頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Luna?Phenyl-HexylGreenTea(綠茶)Column:Luna?5uPhenyl-HexylDimensions:250x4.6mmMobilePhaseA:0.2%AceticacidinWater/Acetonitrile(91:9)B:Water/Acetonitrile(20:80)Gradient:100%Atot=25min,(68:32)t=25mintot=35min,hold100%Bfor10min.FlowRate:1ml/minTemperature:350CAppID14436第37頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月苯基的影響Columns: Luna?5mC18(2)150x4.6mm Luna?5mPhenyl-Hexyl150x4.6mm Synergi?4mmPolar-RP150x4.6mmMobilephase: 50:50Acetonitrile:20mMPotassiumphosphate pH2.5Flowrate: 1.0mL/minComponents: Acidic,aromaticcompounds 1.Indoprofen 2.Ethylparaben 3.Naproxen 4.Diflunisal 5.Indomethacin 6.Ibuprofen第38頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月C18(2)Phenyl-HexylPolar-RP苯基的影響第39頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月pH的影響當(dāng)選擇流動(dòng)相的pH時(shí),我們必需考慮到pH對分析物和柱子兩者的影響第40頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月pH對柱子的影響即使鍵合完美,封端完好,硅膠表面還是會存在Si-O-H的微酸游離基pKa~3.5如果流動(dòng)相的pH是4以上,此Si-O-H的游離基會脫氫,成為帶負(fù)電的Si-O-(這會造成和分析物之間的極性反應(yīng),而造成峰拖尾)如果流動(dòng)相的pH是8(或10)以上,硅膠會被破壞,造成柱子損害第41頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月pH對分析物的影響基本上,反相柱的峰保留時(shí)間長短,主要?dú)w因于疏水性的非極性反應(yīng).所以要增長峰保留時(shí)間,必需選擇流動(dòng)相的pH能夠讓分析物保持中性對酸性分析物(pKa~3-6),基本選擇pH在pKa以下對堿性分析物(pKa~9-11),基本選擇pH在pKa以上第42頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月對堿性分析物的分析建議多數(shù)硅膠柱沒法于高pH條件下穩(wěn)定,所以一般分析堿性化合物時(shí),會選擇于pH~1.5-3下進(jìn)行分析.在此pH條件下,硅膠表面的游離Si-O-H會保持中性,減少離子間的二極反應(yīng),因而減少峰拖尾,峰型較好但是在低pH條件下,堿性化合物的極性增加,疏水性減少,如果要增加峰保留時(shí)間,流動(dòng)相的有機(jī)溶劑比率必需減少第43頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月對堿性分析物的分析建議在高pH條件下,堿性化合物可以保持中性,疏水性因而增加,但是如果峰保留時(shí)間太長,可以將流動(dòng)相的有機(jī)溶劑比率增加,以縮短保留時(shí)間.增加選擇分析條件的彈性流動(dòng)相的有機(jī)溶劑比率增加,以縮短保留時(shí)間外,并可以增進(jìn)峰型(尖)但是問題是:如何在高pH(8以上)條件下分析?第44頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月高pH對堿性分析物的分析選擇使用高分子柱使用最新技術(shù)突破的

雙子星柱(GEMINI)第45頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Gemini?C18–雙子星柱第46頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Gemini?C18–雙子星柱在pH1-12范圍內(nèi)很穩(wěn)定適用于酸,中,堿性化合物,特別是分析中,堿性化合物很理想可以更有彈性的調(diào)節(jié)pH以得到合適的分析條件第47頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月ParticleTechnologyPolymerSilicaTwin第48頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Gemini?C18第49頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月流動(dòng)相pH的影響pH1–12Stability第50頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Gemini?

C18第51頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月pKa第52頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月pKa第53頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月總結(jié)

將固定相和被分析物之間的疏水性,極性,和苯基關(guān)系密切考慮以選擇適當(dāng)?shù)闹雍头治鰌H范圍第54頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月C18phasePhenylphase固定相的影響第55頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月HydrophobicityRankingPhaseDescription&ColumnFingerprintSorbentCharacteristics&ApplicationUse選擇柱子的絕佳參考資料第56頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月方法開發(fā)的絕佳參考資料第57頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月如何保護(hù)柱子和延長柱子的壽命使用保護(hù)柱柱子使用完后,立刻沖洗樣品前處理-過濾,固態(tài)萃取盡可能每一種分析方法使用一支專門柱第58頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月5%原理–C18柱的基本沖洗方法使用柱體積10倍的以下溶液沖洗,以0.1-0.2ml/min流速95/5=水:乙晴5/95=水:乙晴梯度沖洗-于分析結(jié)束后由5%乙晴增加到95%乙晴第59頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月保護(hù)柱套和柱芯第60頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月為何要使用保護(hù)柱將樣品中的顆粒和死吸附的雜質(zhì)攔截以保護(hù)昂貴的分析柱可以增加柱子的壽命和保持柱效第61頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月一般的保護(hù)柱有何缺點(diǎn)增加系統(tǒng)的死體積峰變寬保留時(shí)間改變第62頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月我們的保護(hù)柱套有何不同通用-適用于所有的柱子直接與柱子連接幾乎體積同時(shí)不改變峰保留絕對不與流動(dòng)相作用使用容易價(jià)格合理第63頁，課件共68頁，創(chuàng)作于