實驗五微生物計數(shù)法

實驗五微生物計數(shù)法第1頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月目的要求了解血球計數(shù)板的構(gòu)造、計數(shù)原理和計數(shù)方法，掌握顯微鏡下直接計數(shù)的技能。第2頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗材料活材料：釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）培養(yǎng)液。其他器材：顯微鏡、血球計數(shù)板、蓋玻片、吸水紙、計數(shù)器、滴管、擦鏡紙。第3頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月顯微鏡直接計數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。直接計數(shù)法優(yōu)缺點優(yōu)點：直觀、快速、操作簡單。缺點：不能區(qū)分死菌與活菌，所得為總數(shù)；不適于對運動細菌的計數(shù)。實驗原理第4頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月常用計菌器常用計數(shù)器有血球計數(shù)板(血細胞計數(shù)板)、Petroff-Hauser計菌器以及Hawksley計菌器等。各種計數(shù)板的計數(shù)原理相同，只是血球計數(shù)板較厚，不能使用油鏡觀察，只能計數(shù)較大的霉菌孢子和酵母菌；而后兩種計菌器細菌，可以使用油鏡觀察，因此可以直接計數(shù)細菌。第5頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月

血球計數(shù)板Petroff-Hauser計菌器Hawksley計菌器第6頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月

血球計數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各列有一個方格網(wǎng)。血球計數(shù)板的構(gòu)造第7頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月每個方格網(wǎng)共分為九個大方格，中間的大方格即為計數(shù)室。計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格：一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格；另一種是一個大方格分成16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格。無論是哪一種規(guī)格的計數(shù)板，大方格（計數(shù)室）中的小方格都是400個。大方格邊長為lmm，則每一個大方格的面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.lmm，所以計數(shù)室的容積為0.lmm3(萬分之一毫升)。A.25中格X16小格B.16中格X25小格第8頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月計數(shù)方法使用血球計數(shù)板計數(shù)時，通常數(shù)5個中方格的總菌數(shù)，然后求每個中方格的平均值，再乘上大方格（計數(shù)室）中方格的數(shù)量，就得出一個大方格中的總菌數(shù)。數(shù)兩個大方格總菌數(shù)，平均后，再換算成每毫升菌液中微生物細胞的數(shù)量。第9頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月酵母個體形態(tài)第10頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月制備適當(dāng)濃度的菌懸液取潔凈的血球計數(shù)板蓋上蓋玻片靜置3至5分鐘低倍鏡觀察找到位置加樣品用高倍鏡計數(shù)設(shè)5個中方格的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B計數(shù)板為25個中方格(本次試驗)

：1ml菌液的總菌數(shù)=A/5×25×104×B計數(shù)板為16個中方格：1ml菌液的總菌數(shù)=A/5×16×104×B實驗步驟：酵母菌細胞總數(shù)的測定用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴(不宜過多)，則菌液自行滲入，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。

第11頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月

注意事項取樣時先要搖勻菌液；加樣時計數(shù)室不可有氣泡；一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5-10個菌體為宜；每個計數(shù)室選5個中格（4個角和中央）計數(shù)；位于格線上的菌體一般數(shù)上不數(shù)下，數(shù)右不數(shù)左；若芽體大小達到母細胞的一半，則作為兩個菌體計數(shù)。血球計數(shù)板使用完畢，用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，以免損壞網(wǎng)格刻度；洗凈后自行晾干或吹風(fēng)機吹干。第12頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月1ml菌液中的總菌數(shù)=？

答案：(3+4+4+3+2)／5×25×104=8×105個/ml25中格X16小格第13頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月第14頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月思考題根據(jù)你的體會，說明用血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面？應(yīng)如何盡量減少誤差、力求準(zhǔn)確？

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