性傳播疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷

性傳播疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷第1頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

.

講授內(nèi)容?性病概述（性病的概念、危害、研究范圍）?梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷（臨床、實(shí)驗(yàn)室診斷）?淋病的實(shí)驗(yàn)室診斷（臨床、實(shí)驗(yàn)室診斷）?非淋菌性尿道炎（臨床、實(shí)驗(yàn)室診斷）?生殖器皰疹（臨床、實(shí)驗(yàn)室診斷）?尖銳濕疣的實(shí)驗(yàn)室診斷（臨床、實(shí)驗(yàn)室診斷）第2頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月?????性?。╒enerealdiseases,VD）是指通過性交傳染的、具有明顯生殖器損害癥狀的全身性疾病，亦稱為經(jīng)典性病。包括梅毒、淋病、軟下疳和性病性淋巴肉芽腫。性傳播疾?。╯exuallytransmitteddiseases,STD）：是指通過性接觸可以傳染的一組傳染病，在我國，人們簡稱為性病。其概念不同于經(jīng)典性病，包容的病種20余種。《性病防治管理辦法》:梅毒，淋病，尖銳濕疣，非淋菌性尿道炎，生殖器皰，軟下疳，性病性淋巴肉芽腫，艾滋病。STD是自古就有的，只是由于人類活動(dòng)范圍的擴(kuò)大，交流增多，性行為更隨意，性病的范圍在不斷擴(kuò)大。性病在我國廣泛流行，它不僅危害個(gè)人健康，也殃及家庭，遺害后代，同時(shí)還危害社會(huì),成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生和社會(huì)問題。.性傳播疾病的概念第3頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

性病的危害(1)?感染性病后不及時(shí)發(fā)現(xiàn)并徹底治療，不僅可損害 人的生殖器官，導(dǎo)致不孕不育、異位妊娠、早產(chǎn)、 流產(chǎn)和死胎等，有些性病還可損害心臟、腦等人 體的重要器官，甚至導(dǎo)致死亡。有些性病一旦染 上是難以治愈的，如尖銳濕疣、生殖器皰疹。?有相當(dāng)一部分的性病患者癥狀較輕或沒有任何明 顯的癥狀，但卻可以通過各種性病傳播途徑傳給 其他健康人。第4頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

性病的危害(2)?性病的流行還給家庭帶來嚴(yán)重危害。例如 淋病，通常情況是，夫婦中的一方由于某 種原因而感染上淋病，然后通過夫妻間的 性生活，傳染給對(duì)方，家中的孩子或是通 過母嬰途徑傳播，或是通過日常生活的接 觸而被感染，使得一家人都深受其害。?性病還能促進(jìn)艾滋病的傳播和流行。第5頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月陜西省皮膚性病防治所朱參勝1.臨床：–早期、準(zhǔn)確診斷，發(fā)現(xiàn)無癥狀感染者––評(píng)估治療效果，判斷治愈指導(dǎo)臨床用藥，耐藥性監(jiān)測(cè)2.流行病學(xué)監(jiān)測(cè)：

– – –2011.7病例報(bào)告患病率調(diào)查耐藥監(jiān)測(cè)3.科研：

–基礎(chǔ)性 –應(yīng)用型研究

GeneratedbyFoxitPDFCreator?FoxitSoftware

Forevaluationonly.性病實(shí)驗(yàn)室診斷的應(yīng)用第6頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

.

性病研究范圍《性病防治管理辦法》指定的8種性病1.梅毒2.淋病3.尖銳濕疣4.非淋菌性尿道炎5.生殖器皰疹6.軟下疳7.性病性淋巴肉芽腫8.艾滋病第7頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月?梅毒概念：梅毒（英文名稱：syphilis）是由蒼白（梅毒）螺旋體(Treponemapallidum)引起的慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病(VD,STD)。絕大多數(shù)是通過性途徑傳播，臨床上可表現(xiàn)為一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒和潛伏梅毒。臨床上以陰部糜爛，外發(fā)皮疹，筋骨疼痛，皮膚起核而潰爛，神情癡呆為主要表現(xiàn)的傳染病。是《中華人民共和國傳染病防治法》中，列為乙類防治管理的病種。

.一、梅毒syphilis第8頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

??

一期梅毒：標(biāo)志性臨床 特征是硬下疳，潛伏期 2～4周，外生殖器部位 發(fā)生暗紅色硬腫塊、淺 潰瘍，有軟骨樣硬度， 周圍淋巴結(jié)腫大。二期梅毒：在一期梅毒1～2個(gè)月之后，全身皮膚、粘膜發(fā)生對(duì)稱泛發(fā)皮疹、斑疹、丘疹、膿皰疹等。粘膜可發(fā)生粘膜斑、扁平濕疣，傳染性強(qiáng)。.第9頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

三期梅毒：發(fā)生在感染后2～3年乃至10年，皮膚為樹膠樣腫，還可涉及骨、關(guān)節(jié)、心、血管，表現(xiàn)為主動(dòng)脈炎、主動(dòng)脈瓣閉鎖不全和主動(dòng)脈瘤等，侵及神經(jīng)為脊髓癆，全身麻痹。第10頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

梅毒流行簡況（1）?全球每年約有1200萬新發(fā)病例，主要集中在南亞、東南亞 和非洲。?于1505年經(jīng)印度傳入我廣東，至今已500多年。?解放前是中國四大性病之首，60年代初基本被消滅，80年 代再次發(fā)生和流行。?1991年報(bào)告病例數(shù)為1870例，1995年11336例，1997年 33668例。呈明顯增多趨勢(shì)，臨床經(jīng)?？梢娨?、二期梅 毒，也已發(fā)現(xiàn)三期梅毒和先天梅毒。?在義務(wù)獻(xiàn)血員中發(fā)現(xiàn)隱性梅毒。第11頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

梅毒流行簡況（2）?梅毒患者的皮膚、粘膜中含梅毒螺旋體，未患病者在與 梅毒患者的性接觸中，皮膚或粘膜若有細(xì)微破損則可得 病。?極少數(shù)可通過輸血或其它途徑傳染。?獲得性梅毒（后天）的早期梅毒病人是傳染源，95%是 通過不潔性交傳染，少數(shù)通過接吻、握手、輸血、接觸 污染的內(nèi)衣、濕毛巾、茶杯、煙斗、哺乳、尿布等傳染。?胎兒梅毒（先天）：孕婦體內(nèi)螺旋體，一般在妊娠3~4 月通過胎盤感染嬰兒。第12頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

?病因：梅毒螺旋體侵入人體后經(jīng)過2~3周潛伏期，即發(fā)生 皮膚損害(典型損害為硬下疳)這是一期梅毒。發(fā)生皮膚損 害后機(jī)體產(chǎn)生抗體，梅毒初期的組織學(xué)特征是單核細(xì)胞侵 潤，在感染的第6天，即有淋巴細(xì)胞浸潤，此時(shí)梅毒螺旋 體見于硬下疳中的上皮細(xì)胞間隙中，以及位于上皮細(xì)胞的 內(nèi)陷或吞噬體內(nèi)，或成纖維細(xì)胞、漿細(xì)胞、小的毛細(xì)血管 內(nèi)皮細(xì)胞之間及淋巴管和局部淋巴結(jié)中。由于免疫的作用 使梅毒螺旋體迅速地從病灶中消除。感染的第24天后，免 疫熒光檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)梅毒螺旋體的存在，螺旋體大部分被殺 死，進(jìn)入無癥狀的潛伏期此即一期潛伏梅毒。第13頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

梅毒的暗視野顯微鏡檢查（1）?暗視野顯微鏡檢查：是一種檢查梅毒螺旋體的方法。暗視 野，顧名思義即是顯微鏡下沒有明亮的光線，它便于檢查 蒼白的螺旋體。這是一種病原體檢查，對(duì)早期梅毒的診斷 有十分重要的意義。?早期皮膚粘膜損害（一期、二期）可查到蒼白螺旋體。一 期梅毒蒼白螺旋體多在硬下疳的硬結(jié)、潰瘍的分泌物和滲 出液中存在，腫大的淋巴結(jié)穿刺也可檢出。二期梅毒蒼白 螺旋體可在全身血液和組織中檢出，但以皮膚檢出率最高。 早期先天性梅毒，可以通過皮膚或粘膜損害處刮片發(fā)現(xiàn)梅 毒蒼白螺旋體。第14頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月???基本原理：皮損滲出液、淋巴結(jié)穿刺液→涂片→暗視野顯微鏡下觀察→形態(tài)，運(yùn)動(dòng)方式。暗視野顯微鏡（darkfieldmicroscope）：聚光鏡中央有擋光片，使照明光線不直接進(jìn)人物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡，因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的。利用這種顯微鏡能見到小至4~200nm的微粒子，分辨率可比普通顯微鏡高50倍。標(biāo)本采集：

–皮膚黏膜組織液：帶乳膠手套，擦去去污物，鈍刀輕刮、擠壓， 避免出血，取滲出液，預(yù)先有生理鹽水的載玻片上，加蓋玻片。 –淋巴液：無菌穿刺，注入生理鹽水，反復(fù)抽吸，取少量淋巴液， 滴加至載玻片上，加蓋玻片。

GeneratedbyFoxitPDFCreator?FoxitSoftware

Forevaluationonly.暗視野顯微鏡檢查（2）第15頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月??操作步驟：

–加鏡油至聚光器上(不要 將鏡油加載蓋玻片上) –聚光 –鏡檢結(jié)果判讀：

–形態(tài)：纖細(xì)、白色、有 折光、螺旋狀–運(yùn)動(dòng)方式：旋轉(zhuǎn)、蛇行、 伸縮結(jié)果報(bào)告：

陽性：見到上述特征的螺旋體 陰性：未見到上述特征的螺旋體

.暗視野顯微鏡檢查（3）第16頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

.

暗視野顯微鏡檢查（4）?臨床意義：

–陽性：確診梅毒 –陰性：復(fù)檢，血清學(xué)檢查?注意事項(xiàng):

–避免出血 –及時(shí) –對(duì)廢棄物及時(shí)處理，梅毒病原體為蒼白螺旋體，對(duì)外界抵抗力 弱，離體后一般1-2小時(shí)內(nèi)死亡，對(duì)干燥和熱敏感，但對(duì)冷抵 抗力較強(qiáng)，低效消毒劑也可將其消滅。第17頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

鍍銀染色法（1）?基本原理：

–梅毒螺旋體親銀性→銀溶液染色→鏡下觀察。?標(biāo)本采集（同暗視野顯微鏡檢查）：

–皮膚黏膜組織液 –淋巴液第18頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

GeneratedbyFoxitPDFCreator?FoxitSoftware

Forevaluationonly.

鍍銀染色法（2）?操作步驟：

–涂片干燥（空氣中自然干燥） –固定：羅吉固定液（甲醛，乙酸）2~3min –洗滌：無水酒精 –媒染：鞣酸媒染劑，微加熱，染30sec，水洗 –銀染：銀染液，微加熱，染30sec，水洗 –鏡檢：油鏡第19頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

鍍銀染色法（3）?結(jié)果判讀：

–棕褐色梅毒螺旋體?結(jié)果報(bào)告：

–陽性：見到棕褐色梅毒螺旋體 –陰性：未見到棕褐色梅毒螺旋體?臨床意義：

–陽性：確診梅毒 –陰性：復(fù)檢，血清學(xué)檢查?注意事項(xiàng):

–與其它螺旋體的鑒別第20頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月.第21頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

.

梅毒的血清學(xué)檢測(cè)方法?梅毒血清學(xué)檢查對(duì)于診斷二期、三期梅毒，以及 判定梅毒的發(fā)展和痊愈，判斷藥物的療效都有十 分重要的意義。梅毒血清學(xué)檢查包括非梅毒螺旋 體抗原血清學(xué)試驗(yàn)和梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)。 前者常用于臨床篩選及判定治療的效果，抽血后1 小時(shí)即可出結(jié)果，費(fèi)用也低廉。后者主要是用于 判定試驗(yàn)，但是它不能判定治療效果，一旦患有 梅毒，這一試驗(yàn)將終身陽性。第22頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

.

梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法的分類?非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)

–VDRL試驗(yàn) –RPR試驗(yàn)

–TRUST試驗(yàn)?梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)

–TPPA試驗(yàn) –TPHA試驗(yàn) –FTA-ABS試驗(yàn) –TP-ELISA試驗(yàn) –TP-WB試驗(yàn)第23頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月???VenerealDiseaseResearchLaboratory基本原理：梅毒螺旋體感染→宿主產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體→與心磷脂、卵磷脂、膽固醇混合物（抗原）→凝集反應(yīng)標(biāo)本采集:

–血清：靜脈血2~5ml，及時(shí)離 心，保存于2~8℃，長期保存于- 20℃。

–腦脊液：專業(yè)人員操作，有血 細(xì)胞，2000rpm離心。?操作步驟：

–VDRL抗原配制

–VDRL玻片定性實(shí) 驗(yàn)

?滅活 ?吸樣 ?加抗原 ?反應(yīng),低倍顯微 鏡觀察

.VDRL試驗(yàn)（1）第24頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

弱陽性或可疑（滴度）， 或陰性但有臨床癥狀時(shí)需 做定量試驗(yàn)（前帶現(xiàn)象）?VDRL定量試驗(yàn)

–加稀釋液 –樣本稀釋：系列稀 釋 –加抗原 –反應(yīng)凝集反應(yīng)強(qiáng)度分級(jí)：–3+~4+：中到大絮狀物，液體清亮–2+：絮狀物較小，液體較清亮–1+：小凝集物，均勻分布，液體渾 濁–±：抗原抗體復(fù)合物顆粒稍粗–-：抗原顆粒均勻、細(xì)小

VDRL試驗(yàn)（2）?當(dāng)VDRL定性試驗(yàn)為陽性、?結(jié)果判讀第25頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

VDRL試驗(yàn)（3）滅活：血清是在56oC加熱30分鐘，除去非特異性抑制劑（如補(bǔ)體）。

VDRL用于腦脊液的測(cè)定：對(duì)腦脊液的測(cè)定診斷神經(jīng)梅毒,首選定量VDRL。測(cè)試中有一些變化:用等量的10％鹽水稀釋樣品，腦脊液不能被加熱（或滅活），樣品體積為0.01毫升，旋轉(zhuǎn)時(shí)間為8分鐘。其余的程序同血清。第26頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

.

VDRL試驗(yàn)（4）?結(jié)果報(bào)告：

–定性

?陽性：1+~4+ ?陰性

–定量

?滴度：最高稀釋倍數(shù)?臨床意義：

–腦脊液VDRL陽性對(duì)神經(jīng)梅毒有診斷意義。 –患有其它疾病可能產(chǎn)生假陽性結(jié)果，包括一些病毒感染（單核細(xì) 胞增多，肝炎）、藥物、懷孕、風(fēng)濕熱、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、紅斑狼 瘡、麻風(fēng)。 –滴度與病情相關(guān)（即滴度下降表明成功的治療），用于預(yù)后判定。第27頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月???RapidPlasmaReagin(RPR)基本原理：VDRL試驗(yàn)的改良?？乖?活性炭顆粒+抗體→黑色絮狀物（肉眼可見）。反應(yīng)素：Tp（梅毒病毒）侵入人體破壞組織后，組織中的磷脂粘附于螺旋體表面形成復(fù)合抗原。從而使機(jī)體產(chǎn)生抗磷脂的自身抗體，這種抗體稱為反應(yīng)素。??標(biāo)本采集:

–血清：新鮮分離或凍存 –血漿：各種抗凝劑操作步驟：

–定性實(shí)驗(yàn)

?加樣 ?加抗原 ?反應(yīng)

RPR試驗(yàn)（1）第28頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

RPR試驗(yàn)（2）?定量實(shí)驗(yàn)

–稀釋液準(zhǔn)備 –加樣：系列稀釋 –加抗原 –反應(yīng)（旋轉(zhuǎn)8min）?結(jié)果判讀

凝集反應(yīng)強(qiáng)度分級(jí)： –3+~4+：中到大黑色絮狀物，液體清亮 –2+：黑色絮狀物小到中，液體較清亮 –1+：小黑色凝集物，液體渾濁 –-：碳顆粒集中于中央一點(diǎn)或均勻分散第29頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

RPR試驗(yàn)（3）?結(jié)果報(bào)告：

–定性

?陽性：1+~4+ ?陰性

–定量

?滴度：最高稀釋倍數(shù)?臨床意義：

–比VDRL簡便（血清不需滅活，加有氯化膽堿） –適用于篩查、療效觀察、復(fù)發(fā)或再感染 –未經(jīng)治療的一期、二期和潛伏梅毒的敏感性：86%、100%和98%第30頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

指示物，陽性結(jié)果為紅色絮 狀物?標(biāo)本采集：

–血清 –血漿操作步驟： 定性： 加樣（50μL) 加抗原（一滴） 反應(yīng)（8min)

TRUST試驗(yàn)（1）?（Tolulizedredunheated serumtest,TRUST）?基本原理：用甲苯胺紅代替 RPR試驗(yàn)中的碳顆粒，作為第31頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月??定量：

–稀釋液（50μL生理鹽水) –加樣（50μL血清/血漿)，倍比稀釋 –加抗原（一滴） –反應(yīng)（8min)結(jié)果判讀

–凝集反應(yīng)強(qiáng)度分級(jí)： ?3+~4+：中到大凝集物，液體清亮 ?2+：小到中凝集物，液體較清亮 ?1+：小凝集物，液體渾濁 ?-：甲苯胺紅集中于中央或均勻分散

.TRUST試驗(yàn)（2）第32頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月??結(jié)果報(bào)告：

–定性:陽性：1+~4+;陰性 –定量:滴度：最高稀釋倍數(shù)臨床意義：

–適用于篩查、療效觀察、復(fù)發(fā)或再感染 –用正常牛心肌的心類脂作為抗原，而不是用螺旋體作為抗原，來測(cè)定病人血 清中的反應(yīng)素（非特異性抗體---抗心磷脂抗體）。 –用來初步篩查梅毒螺旋體感染。反應(yīng)素在初期梅毒病灶出現(xiàn)后1~2周就可測(cè) 出，在二期梅毒滴度最高，三期梅毒較低。 –所用抗原不具有特異性，除梅毒病人外，一些非梅毒疾患也可暫時(shí)或長期地 存在反應(yīng)素。例如麻風(fēng)、結(jié)核、傳染性單核細(xì)胞增多癥、紅斑狼瘡、類風(fēng)濕 性關(guān)節(jié)炎、回歸熱、以及一些發(fā)熱性疾病。 –此外，在孕婦、老年人和吸毒者有生物學(xué)假陽性反應(yīng)。

.TRUST試驗(yàn)（3）第33頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月?????凡確診為梅毒者，治療前最好做定量試驗(yàn)。兩次定量試驗(yàn)滴度變化相差2個(gè)稀釋度以上時(shí)，才可判定滴度下降。梅毒患者在經(jīng)過正規(guī)治療以后，頭三個(gè)月應(yīng)當(dāng)每月復(fù)查一次滴度，以后可改為每三個(gè)月復(fù)查一次，第二年每三個(gè)月或每半年復(fù)查一次，以觀察比較當(dāng)次與前幾次的滴度變化的情況。梅毒患者治療后的隨訪觀察一般在兩年的時(shí)間。如果每次檢測(cè)的RPR的滴度呈現(xiàn)不斷下降的趨勢(shì)，說明抗梅治療是有效的。如果連續(xù)三次到四次檢測(cè)的結(jié)果都是陰性，則可以認(rèn)為該患者的梅毒已經(jīng)治愈。

.梅毒療效判定第34頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月??前帶現(xiàn)象：一種抗原—抗體反應(yīng)的現(xiàn)象。以定量抗原檢測(cè)抗體，若抗體過剩，可使所形成的免疫復(fù)合物反而減少，而不出現(xiàn)凝集。非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)中，有時(shí)血清中存在高濃度的抗體時(shí)出現(xiàn)的弱陽性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又表現(xiàn)為二期梅毒，此時(shí)將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)，出現(xiàn)了陽性的結(jié)果，該現(xiàn)象稱為前帶現(xiàn)象。耐血清性（血清固定）：晚期耐血清性與梅毒的類型及開始治療的時(shí)間早晚有關(guān)。晚期耐血清性病人已經(jīng)足夠量的治療后，即使再予更多地或無限制地治療也不能使血清滴度降低。對(duì)于這種病人，需經(jīng)過詳細(xì)的檢查，排除神經(jīng)、心臟與其他內(nèi)臟梅毒后，作定期隨訪。

.非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)第35頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月?treponema pallidumparticle agglutination assay(TPPA).?基本原理：超聲裂 解梅毒抗原+明膠粒 子+血清抗梅毒抗 體，凝集反應(yīng)?標(biāo)本采集：

–血清 –血漿?操作步驟：

–試劑準(zhǔn)備 –加稀釋液 –樣品稀釋 –加致敏明膠粒子和對(duì)照液 （4個(gè)孔） –混合：震蕩30秒 –反應(yīng)：2小時(shí)

.TPPA試驗(yàn)（1）第36頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月??結(jié)果判讀:

–陰性對(duì)照：未致敏粒子不出現(xiàn)凝集 –凝集反應(yīng)強(qiáng)度分級(jí)： ?4+：粒子光滑，覆蓋整個(gè)孔底 ?3+：粒子光滑，覆蓋大部分孔底 ?2+：粒子光滑覆蓋孔底，周圍有一環(huán) ?1+：粒子光滑覆蓋孔底，周圍有一明顯環(huán) ?±：粒子沉集孔底，中央形成一個(gè)小點(diǎn) ?-：粒子緊密沉積孔底中央結(jié)果報(bào)告：

–陽性：第3孔不出現(xiàn)凝集，第4孔出現(xiàn)凝集1+~4+ –陰性：第3孔和第4孔均未出現(xiàn)凝集

.TPPA試驗(yàn)（2）第37頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

.

TPPA試驗(yàn)（3）?臨床意義：

–初篩陽性的確證 –治療后，TPPA試驗(yàn)仍可為陽性，不能作為療效 觀察 –結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果，區(qū)分既 往和現(xiàn)癥感染?注意事項(xiàng)：

–“可疑”：其他方法復(fù)檢 –非特異性凝集：稀釋復(fù)檢或其他方法復(fù)檢第38頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月?Treponemapallidum haemagglutination assay?基本原理：超聲裂解 梅毒抗原+羊紅細(xì)胞+ 血清抗梅毒抗體--凝 集反應(yīng)?標(biāo)本采集：

–血清 –血漿?操作步驟：

–試劑準(zhǔn)備 –加稀釋液（5個(gè)孔） –樣品稀釋（5個(gè)孔） –加對(duì)照液 –混合：震蕩30秒 –反應(yīng)：4小時(shí)

TPHA試驗(yàn)（1）第39頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月?結(jié)果判讀:

–陰性對(duì)照：未致敏血球不出現(xiàn)凝集 –凝集反應(yīng)強(qiáng)度分級(jí)： ?4+：凝集物光滑，覆蓋整個(gè)孔底 ?3+：凝集物光滑，覆蓋大部分孔底 ?2+：凝集物光滑覆蓋孔底，周圍有一細(xì)胞 環(huán) ?1+：凝集物光滑覆蓋孔底，周圍有一明顯 細(xì)胞環(huán) ?±：凝集物沉集孔底，中央形成一個(gè)小點(diǎn) ?-：凝集物緊密沉積孔底中央

TPHA試驗(yàn)（2）第40頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月???結(jié)果報(bào)告：

–陽性：第三孔不出現(xiàn)凝集，第4孔出現(xiàn)凝集1+~4+ –陰性：第3孔和第4孔均未出現(xiàn)凝集臨床意義：

–初篩陽性的確證 –治療后，TPHA試驗(yàn)仍可為陽性，不能作為療效觀察 –結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果，區(qū)分既往和現(xiàn)癥感染注意事項(xiàng)：

–“可疑”：其他方法復(fù)檢 –非特異性凝集：稀釋復(fù)檢或其他方法復(fù)檢

TPHA試驗(yàn)（3）第41頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

.

FTA-ABS試驗(yàn)（1）?Fluorescenttreponemalantibody absorptiontest?基本原理：血清+稀釋劑（Reiter株螺旋體制備 而成）--吸收--完整梅毒抗原+第二抗體（FITC 標(biāo)記)，熒光顯微鏡下觀察--蘋果綠色熒光?標(biāo)本采集：

–血清 –腦脊液第42頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月?操作步驟：

–血清滅活：56℃，30min –血清稀釋：血清用吸收劑稀釋，陽性血清用PBS稀釋 –加樣：設(shè)置6種對(duì)照(PBS,吸收劑，PBS+陽性對(duì)照，PBS+ 陰性對(duì)照，吸收劑+陽性對(duì)照，吸收劑+陰性對(duì)照；樣品血 清10ul（稀釋后） –洗滌： –加熒光抗體：37℃，30min –洗滌： –封片、讀片

FTA-ABS試驗(yàn)（2）第43頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

.

FTA-ABS試驗(yàn)（3）?結(jié)果判讀:

–陽性對(duì)照：綠色熒光的螺旋 體 –陰性對(duì)照和空白對(duì)照：不產(chǎn) 生熒光?結(jié)果報(bào)告：

–陽性：綠色熒光的螺旋體 –陰性：無熒光或淡綠色螺旋 體第44頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

.

FTA-ABS試驗(yàn)（4）?臨床意義：

–FTA-ABS:梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)” –初篩陽性的確證 –治療后，F(xiàn)TA-ABS仍可為陽性，不能作為療效觀察 –結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果，區(qū)分既往和現(xiàn)癥感染 –用于神經(jīng)梅毒的診斷?注意事項(xiàng)：

–洗滌：干凈，除去雜質(zhì)，以免影響結(jié)果判讀 –高質(zhì)量熒光顯微鏡，技術(shù)熟練第45頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

.

TP-ELISA試驗(yàn)（1）?基本原理：

–包被抗原+血清抗體+第二抗體（酶標(biāo)記)---底 物顯色?標(biāo)本采集：

–血清 –血漿第46頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

.

TP-ELISA試驗(yàn)（2）?操作步驟：

–加稀釋液： –加樣：陽性、陰性對(duì)照，待檢血清 –孵育：37℃，60min，洗板 –加酶結(jié)合物：37℃，60min，洗板 –加顯色劑：37℃，15min， –終止反應(yīng)：終止，比色第47頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

TP-ELISA試驗(yàn)（3）?結(jié)果判讀:

–閾值：公式 –陽性對(duì)照： –陰性對(duì)照和空白對(duì)照?結(jié)果報(bào)告：

–陽性 –陰性第48頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

TP-ELISA試驗(yàn)（4）?臨床意義：

–適用于流行病學(xué)調(diào)查和大量樣品的檢查 –治療后，TP-ELISA仍可為陽性，不能作為療效觀察 –結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果，區(qū)分既往和現(xiàn) 癥感染 –用于篩查?注意事項(xiàng)：

–不同批號(hào)試劑不能混用 –溫度和時(shí)間必須嚴(yán)格控制第49頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

TP-WB試驗(yàn)（1）?基本原理：

–抗原印跡（硝酸纖維膜）+酶聯(lián)反應(yīng)，檢測(cè)多 種成分的抗體?標(biāo)本采集：

–血清 –血漿第50頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

TP-WB試驗(yàn)（2）?操作步驟：

–反應(yīng)：工作緩沖液，樣品，搖45min –洗滌：工作緩沖液，洗滌3次 –加酶結(jié)合物：30min –洗滌 –顯色：37℃，15min –終止：第51頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

.

TP-WB試驗(yàn)（3）?結(jié)果判讀:

–陽性參比圖 –觀察45kD,17kD,15.5kD顯色帶?結(jié)果報(bào)告：

–陽性：45kD,17kD,15.5kD均出現(xiàn)顯色帶 –陰性：45kD,17kD,15.5kD無顯色帶第52頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月第53頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月第54頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月第55頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

TP-WB試驗(yàn)（4）?臨床意義：

–初篩陽性的確證 –治療后，TP-WB試驗(yàn)仍可為陽性，不能作為療效觀察 –結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果，區(qū)分既往和現(xiàn)癥感染?注意事項(xiàng)：

–洗滌要充分，否則背景偏深 –對(duì)照條帶應(yīng)顯示 –當(dāng)45kD,17kD,15.5kD出現(xiàn)1~2個(gè)顯色帶，其他方法復(fù)檢第56頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

.

快速免疫色譜法（1）?基本原理：免疫色譜原理，采用吸附有顯色標(biāo)記 的梅毒螺旋體重組抗原的試劑條，快速監(jiān)測(cè)標(biāo)本 中的梅毒螺旋體抗體。?標(biāo)本采集：

–血清 –血漿 –全血第57頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月???操作步驟：

–加樣： –加緩沖液： –觀察結(jié)果：結(jié)果判讀:

–質(zhì)控條帶 –標(biāo)本條帶結(jié)果報(bào)告：

–陽性：質(zhì)控條帶+標(biāo)本條帶 –陰性：質(zhì)控條帶

快速免疫色譜法（1）第58頁，課件共67頁，創(chuàng)作于2023年2月

快速免疫色譜法（1）?臨床意義：

–用于標(biāo)本的快速篩查 –結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果，區(qū)分既 往和現(xiàn)癥感染?注意事項(xiàng)：

–試劑平衡至室溫 –假陽性和假陰性第59