微生物分離培養(yǎng)

微生物分離培養(yǎng)第1頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月MixedcultureSeparationofsingleculturesPureculture研究思路CellCycleInhibitionApoptosisNecrosisP388.K562CellsbioactivemicrobeDereplication第2頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月CultivationOptimizationActiveAxtractCC,PTLC,PHPLCSephadexLH20IR,UV,MS,NMRCD,ORD,X-RayBioactivityReassayEvaluationofanticanceractivitiesFromMicrobeHosttoStructure第3頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月微生物分離篩選路線樣品稀釋平板涂布

平板劃線純化斜面保藏預(yù)處理選擇性培養(yǎng)基第4頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月·初篩（5ml液體試管培養(yǎng)）復(fù)篩（100ml三角瓶培養(yǎng)）菌株照相（菌落形態(tài)、顯微形態(tài)）代謝產(chǎn)物指紋圖譜（TLC、HPLC）保藏（斜面一支，砂土兩支，甘油四支，大發(fā)酵菌株發(fā)酵種子液甘油管兩支）菌株登記菌株第5頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月菌株編號分離菌株時格式：樣品編號+兩位序號（如從SY01樣品中分離的菌株，編號依次為SY01-01,SY01-02等）活性菌株編號由四部分組成：單位+研究室+分離人姓名首字母+序號組成（如QD-NP-ABC-01）?；钚院Y選工作結(jié)束后，上交活性菌株（斜面、砂土、甘油）、活性菌株浸膏、薄層照片、HPLC指紋圖譜、微生物培養(yǎng)形態(tài)、顯微形態(tài)照片，分離的活性菌株詳細填寫菌株登記表（Access表格）。第6頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月倒制平板①將融化的瓊脂培養(yǎng)基，冷卻至50℃左右。②在酒精燈火焰旁，以右手的無名指、小指夾持棉塞，左手掀開皿蓋。右手持三角瓶向皿內(nèi)注入培養(yǎng)基。③將培養(yǎng)皿稍加以旋轉(zhuǎn)搖動后，置于水平位置待凝。第7頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月稀釋第8頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月①將菌種用無菌水制成懸液。②取若干只無菌試管，每只內(nèi)盛9ml無菌水。③吸取上述菌懸液lml加入第1只含有無菌水的試管內(nèi)。這樣就使第1只試管細菌濃度為原菌懸液的l/lO，也就是10-1。④從第1只試管內(nèi)(10-1)吸取lml注入第2只含有無菌水的試管內(nèi)，這樣試管內(nèi)的細菌濃度為原菌懸液的1/100，也就是10-2。⑤用同樣方法，制成10-3～10-8的菌懸液。第9頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月涂布第10頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月斜面接種第11頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月①操作前，先用75％乙醇擦手，待乙醇揮發(fā)后才能點燃酒精燈。②將斜面菌種管和欲接種的斜面試管同時拿在左手的大拇指和其它四指之間，長有菌苔的一面向上，并處于水平位置。③先將菌種管和試管的棉塞旋松，便于接種時取出。④右手拿接種環(huán)，與通常拿筆一樣。將要伸入管內(nèi)部分的金屬柄和金屬絲在酒精燈焰上灼燒滅菌。⑤用右手小指、無名指及手掌將菌種管和試管的棉塞同時拔出，并把棉塞握住，不隨意放在桌上或與其它物品相接觸，再以火焰燒管口。⑥將上述在火焰上滅菌過的接種環(huán)伸入菌種管內(nèi)，接取菌種前先在管內(nèi)壁上或未長苔的培養(yǎng)基面上接觸一下，使接種環(huán)充分冷卻，以免燙死菌種。用接種環(huán)輕輕刮取少許苔后，自菌種管內(nèi)抽出。抽出時勿與管壁相碰，也勿再通過火焰。迅速將沾有菌種的接環(huán)伸入待接種的斜面培養(yǎng)基試管內(nèi)，由里到外劃折線，使菌體粘附于培養(yǎng)基上。劃線時，勿用力劃破培養(yǎng)基。⑦接種完畢后將接種環(huán)抽出，灼燒管口，塞上棉塞。加棉塞時，不要用試管口去迎塞，以免試管在移動時污染雜菌。⑧接種環(huán)在放回原位前，要經(jīng)火焰灼燒滅菌。第12頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月①在酒精燈火焰上灼燒接種環(huán)，待冷卻，取一環(huán)菌液。②左手握住瓊脂平板，用大拇指和食指稍抬起皿蓋，同時靠近火焰周圍，右手持接種環(huán)伸入皿內(nèi)，在平板上一個區(qū)域作“之”形來回劃線。劃線時使接種環(huán)與平板表面成30o～40o角輕輕接觸，以腕力在表面作較快的滑動，勿使平板表面劃破或嵌進培養(yǎng)基內(nèi)。③灼燒接種環(huán)，冷卻后，再將平皿轉(zhuǎn)動一定的角度，接種環(huán)通過劃過線的區(qū)域，在第二區(qū)域繼續(xù)劃線。④劃后再灼燒接種環(huán)，冷卻后用同樣的方法在其它區(qū)劃線。⑤全部劃線完畢后，在平皿底注明菌種、姓名和日期等。將培養(yǎng)皿倒置放入恒溫箱培養(yǎng)。⑥適當溫度培養(yǎng)一段時間后，取出觀察。平板劃線第13頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月第14頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月newmarinegenusSalinisporatropicaMarinisporasp.第15頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月第16頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月檢查冷凝桶內(nèi)水位是否高于最高位置或低于最低位置，打開鍋蓋檢查鍋內(nèi)水位是否漫過低盤。待滅菌完畢后，等溫度降至60℃以下，壓力表顯示為零后方可打開鍋蓋，