動(dòng)物細(xì)胞制藥培訓(xùn)課件

動(dòng)物細(xì)胞制藥二、動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞的生理特點(diǎn)1、細(xì)胞的分裂周期長(zhǎng)：一般需要12-48h，隨不同的種屬不同而不同。2、細(xì)胞生長(zhǎng)需貼附于基質(zhì)，并有接觸抑制現(xiàn)象。細(xì)胞生長(zhǎng)需要于基質(zhì)上貼附，伸展后才能生長(zhǎng)繁殖。3、正常二倍體細(xì)胞的壽命是有限的。隨著年齡增大而細(xì)胞的培養(yǎng)代數(shù)會(huì)減少。4、對(duì)周?chē)沫h(huán)境十分敏感。5、對(duì)培養(yǎng)基的要求高：需要12種必需氨基酸、8種以上的維生素、多種無(wú)機(jī)鹽和微量元素、葡萄糖、多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、貼壁因子等才能生長(zhǎng)。6、蛋白質(zhì)的合成途徑和修飾功能與細(xì)菌不同。2動(dòng)物細(xì)胞制藥第二節(jié)

生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞的獲得一、生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞的獲得

什么樣的細(xì)胞才能允許用以生產(chǎn)人用的藥品，這一直是一個(gè)引起人們爭(zhēng)論的熱點(diǎn)。用于生產(chǎn)的動(dòng)物細(xì)胞有：原代細(xì)胞、已建立的二倍體細(xì)胞系、可無(wú)限期傳代的轉(zhuǎn)化細(xì)胞系、以及用這些細(xì)胞進(jìn)行融合和重組的工程細(xì)胞。

1、原代細(xì)胞：直接取動(dòng)物組織、器官，經(jīng)過(guò)粉碎、消化而獲得的細(xì)胞懸液。

2、二倍體細(xì)胞系：原代細(xì)胞經(jīng)過(guò)傳代、篩選、克隆，而從多種細(xì)胞成分的組織中挑選并純化出某種具有一定特征的細(xì)胞株。3動(dòng)物細(xì)胞制藥二倍體細(xì)胞株仍具有正常細(xì)胞的特點(diǎn)：

A、2n染色體核型

B、具有明顯的貼壁依賴(lài)和接觸抑制

C、只有有限的增殖能力、一般可連續(xù)傳代培養(yǎng)50代。

D、無(wú)致瘤性3、轉(zhuǎn)化細(xì)胞系：是通過(guò)某個(gè)轉(zhuǎn)化過(guò)程形成的，常常由于染色體的斷裂變成了異倍體，而失去了正常細(xì)胞的特點(diǎn)，獲得了無(wú)限增殖的能力。4動(dòng)物細(xì)胞制藥二、基因工程細(xì)胞的構(gòu)建和篩選1、真核細(xì)胞基因表達(dá)載體的構(gòu)建目前一般選擇的載體有：（1）病毒載體：牛痘病毒、腺病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒和桿狀病毒等。牛痘病毒：構(gòu)建多價(jià)疫苗；腺病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒：用于基因治療；桿狀病毒：作載體用于外源基因表達(dá)。桿狀病毒作為載體的優(yōu)點(diǎn)：①是雙DNA，易于重組；②插入7-8個(gè)bp的DNA不會(huì)影響正常病毒粒子的形成；③多角體蛋白質(zhì)和病毒粒子的形成無(wú)直接關(guān)系，因此用外源基因更換多角體蛋白基因，仍能形成有感染力的病毒粒子；④多角體蛋白基因有強(qiáng)啟動(dòng)子，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)可占全部蛋白質(zhì)的20-30%；⑤用顯微鏡可以看到多角體，可以此為標(biāo)記物來(lái)挑選陽(yáng)性克隆；⑥如果用家蠶桿狀病毒，可以在家蠶體內(nèi)直接表達(dá)外源基因。5動(dòng)物細(xì)胞制藥（2）質(zhì)粒載體常用穿梭質(zhì)粒載體：能在細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)都能擴(kuò)增。2、基因載體的導(dǎo)入和高效表達(dá)工程細(xì)胞株的篩選融合法化學(xué)法物理法病毒法細(xì)胞融合染法DNA-磷酸鈣沉淀法電穿孔法重組反轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)法脂質(zhì)體介導(dǎo)法DEAE-葡聚糖法顯微注射法重組DNA病毒介導(dǎo)法原生質(zhì)融合法染色體介導(dǎo)法基因槍法多瘤病毒樣顆粒介導(dǎo)法微細(xì)胞介導(dǎo)法鬼影紅細(xì)胞介導(dǎo)法DNA導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞的常用方法6動(dòng)物細(xì)胞制藥高效表達(dá)工程細(xì)胞株的篩選：①依靠構(gòu)建載體內(nèi)的選擇標(biāo)記采用相應(yīng)的篩選系統(tǒng)：HAT選擇系統(tǒng)：篩選tk+、hgprt+的轉(zhuǎn)化細(xì)胞；G418（geneticin）選擇系統(tǒng)：篩選neor的轉(zhuǎn)化細(xì)胞；MTX選擇系統(tǒng)：篩選dhfr+的轉(zhuǎn)化細(xì)胞。②對(duì)選出的細(xì)胞要進(jìn)行克隆和亞克隆使其純化③在多數(shù)情況下要利用其擴(kuò)增系統(tǒng)，不斷增加其基因拷貝數(shù)，從而獲得能高效表達(dá)的穩(wěn)定的工程細(xì)胞株。三、常用生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞的特性（自學(xué)）

7動(dòng)物細(xì)胞制藥四、細(xì)胞庫(kù)的建立

除原代細(xì)胞外，其他的細(xì)胞株、細(xì)胞系，無(wú)論是二倍體細(xì)胞、轉(zhuǎn)化細(xì)胞、融合細(xì)胞還是經(jīng)重組的工程細(xì)胞，一旦建立后都要建立細(xì)胞庫(kù)加以保存。按照我國(guó)和美國(guó)FDA的規(guī)定，用于生產(chǎn)的工程細(xì)胞必須建立2個(gè)細(xì)胞庫(kù)：

（1）原始細(xì)胞庫(kù)（mastercellbank,MCB）；

（2）生產(chǎn)用細(xì)胞庫(kù)（manufacturer’sworkingcellbank,MWCB）或叫工作細(xì)胞庫(kù)（workingcellbank,WCB）。8動(dòng)物細(xì)胞制藥貯藏細(xì)胞的檔案資料：①細(xì)胞系歷史：來(lái)源、動(dòng)物的年齡、性別、細(xì)胞分離方法、所用培養(yǎng)材料（來(lái)源于人的還需該人的病史）②細(xì)胞的特性：形態(tài)、生長(zhǎng)特性—增倍時(shí)間、分種批；種源的特性：核型、同功酶、細(xì)胞抗原、特異的標(biāo)記染色體；用于生產(chǎn)用的重組細(xì)胞：載體構(gòu)建的資料、基因拷貝數(shù)、表達(dá)產(chǎn)物的性質(zhì)、產(chǎn)量及其穩(wěn)定性。③各種有害因子的檢查結(jié)果：細(xì)菌、真菌、支原體、各種病毒，包括反轉(zhuǎn)錄病毒。④MWCB細(xì)胞還需確定其最高使用的傳代數(shù)。9動(dòng)物細(xì)胞制藥一、動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件1、器材的清洗和消毒（1）器材的清洗：用過(guò)的器材需要經(jīng)過(guò)浸泡、刷洗、泡酸、沖洗4個(gè)步驟。用3%磷酸三鈉日夜浸泡過(guò)夜。新玻璃器材必須先泡酸。（2）器材的消毒滅菌：所有培養(yǎng)用的器材和液體必須進(jìn)行嚴(yán)格的消毒滅菌處理，方法有：物理消毒---紫外線、干熱、濕熱、過(guò)濾；化學(xué)法---化學(xué)消毒劑和抗生素。第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基10動(dòng)物細(xì)胞制藥2、水質(zhì)

由于動(dòng)物細(xì)胞對(duì)微量的有毒元素、過(guò)多的金屬離子、微生物的污染很敏感。所以細(xì)胞培養(yǎng)用的水必須經(jīng)過(guò)特殊處理，才能使用。方法有：蒸餾、離子交換、電滲析、反滲透、中空纖維過(guò)濾。3、pH

最適pH7.2—7.4，常在培養(yǎng)基中加入緩沖系統(tǒng)：Na2HPO4/NaH2PO4，NaHCO3/CO2，Tricine-glycine等。4、滲透壓

理想滲透壓為290-300mOsm/kg，一般用NaCl的增減來(lái)調(diào)節(jié)。每增加或減少1mg/ml，可使培養(yǎng)基的滲透壓增加或減少32mOsm/kg。5、溫度

哺乳動(dòng)物最佳溫度為37±0.5℃，昆蟲(chóng)為27℃。6、空氣

必須給以足夠的氧氣，一般低于空氣中氧的飽和值的60%。11動(dòng)物細(xì)胞制藥二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi)和組成動(dòng)物細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基的要求較高，且隨著細(xì)胞的種屬不同而差異很大。常常需要花很多的時(shí)間和精力去對(duì)個(gè)別的細(xì)胞系進(jìn)行研究，以便配置適宜于這一細(xì)胞特殊需要的培養(yǎng)基。用動(dòng)物細(xì)胞制藥之所以成本高，培養(yǎng)基的復(fù)雜和昂貴是其主要原因。培養(yǎng)基包括1、天然培養(yǎng)基指在細(xì)胞培養(yǎng)的早期使用，如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸液、羊水、腹水。2、合成培養(yǎng)基采用成分明確的化學(xué)試劑配成的培養(yǎng)基。優(yōu)點(diǎn)：成分明確，組分穩(wěn)定，可大量生產(chǎn)供應(yīng)。12動(dòng)物細(xì)胞制藥合成培養(yǎng)基的組成：①氨基酸類(lèi)：12種必須氨基酸。它們是：精氨酸、胱氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴(lài)氨酸、甲硫氨酸、奔丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸。②維生素：

A、脂溶性的：VA、VD、VE、VK。

B、水溶性的：VB族、VC等③糖類(lèi)：C源，是能量來(lái)源。葡萄糖、谷氨酰胺。使用葡萄糖時(shí)，要加入丙酮酸鈉；有些還要加入核糖和脫氧核糖、醋酸鈉。④無(wú)機(jī)鹽：主要是保持滲透壓、緩沖pH的變化，并積極參與細(xì)胞代謝。一般加入NaCl,KCl,MgSO4,CaCl2,NaH2PO4,NaHCO3等。還有FeSO4,CuSO4,ZnSO4等13動(dòng)物細(xì)胞制藥⑤其他成分：合成核酸的前體物質(zhì)，如腺苷、鳥(niǎo)苷、胞苷、尿苷、胸苷。還要加入動(dòng)物血清，如5-10%的小牛血清，作用機(jī)理不明。

加入動(dòng)物血清可能主要是為了：A提供細(xì)胞生長(zhǎng)增殖所需要的各種生長(zhǎng)因子和激素；B提供有利于細(xì)胞貼壁所需要的貼附因子和伸展因子；C提供可識(shí)別金屬、激素、維生素、脂類(lèi)的結(jié)合蛋白；D提供細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的脂肪酸和微量元素；E提供良好的pH緩沖系統(tǒng)。14動(dòng)物細(xì)胞制藥3、無(wú)血清培養(yǎng)基優(yōu)點(diǎn)：A、提高細(xì)胞培養(yǎng)的可重復(fù)性避免了由于血清批次之間的差異；B、避免了由于血清帶來(lái)的病毒、真菌、支原體微生物等的污染；C、供應(yīng)充足、穩(wěn)定；D、產(chǎn)品易于純化；E、避免了血清中某些因素對(duì)有些細(xì)胞的毒性；F、減少了血清中某些蛋白對(duì)生物測(cè)定的干擾，便于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析。15動(dòng)物細(xì)胞制藥無(wú)血清培養(yǎng)基中一般需要加入：A、激素和生長(zhǎng)因子；B、結(jié)合蛋白；C、貼附和伸展因子；D、其他利于細(xì)胞生長(zhǎng)的因子和元素：如消除氧自由基損害的谷胱苷肽，微量元素如硒等。16動(dòng)物細(xì)胞制藥一、動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的種類(lèi)分為原代細(xì)胞培培養(yǎng)和傳代細(xì)胞培養(yǎng)，也可以根據(jù)培養(yǎng)容器和方式的不同分為靜止培養(yǎng)、旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)、攪拌培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、中空纖維培養(yǎng)、固體床和流化床培養(yǎng)等。1、懸浮培養(yǎng)：適用于一切非貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)，也適應(yīng)于兼性貼壁細(xì)胞。

優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便。培養(yǎng)條件比較均一，傳質(zhì)和傳氧較好，容易擴(kuò)大培養(yǎng)規(guī)模。缺點(diǎn)：由于細(xì)胞體積小，很難采取灌流培養(yǎng)，因此細(xì)胞密度一般比較低。第四節(jié)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的方式和操作方法17動(dòng)物細(xì)胞制藥3、貼壁—懸浮培養(yǎng)（也稱(chēng)假懸浮培養(yǎng)）是將貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)二者結(jié)合，優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，形成更理想、更適應(yīng)于工業(yè)化生產(chǎn)的培養(yǎng)方法。（1）微載體培養(yǎng)采用葡聚糖SephadexA50微顆小粒培養(yǎng)貼壁細(xì)胞。

優(yōu)點(diǎn)：可創(chuàng)造相當(dāng)大的貼附面積，供細(xì)胞貼附生長(zhǎng)增殖。由于載體體積小，比重輕，可經(jīng)輕度攪拌即可微小顆粒攜帶細(xì)胞自由地懸浮在培養(yǎng)基內(nèi)，充分發(fā)揮懸浮培養(yǎng)的一切優(yōu)點(diǎn)。

葡聚糖凝膠專(zhuān)用柱

19動(dòng)物細(xì)胞制藥理想的微載體應(yīng)該具備的條件：A、微載體表面性質(zhì)與細(xì)胞有良好的相容性，適于細(xì)胞附著、伸展和增殖；B、微載體的材料無(wú)毒性。對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞無(wú)毒性，還要不會(huì)產(chǎn)生影響產(chǎn)品和人體健康的有害因子；C、微載體的材料是惰性的，不與培養(yǎng)基成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，也不會(huì)吸收培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分；D、微載體的比重在1.030—1.045g/ml，使載體在低速攪拌下可以懸浮，而靜止時(shí)又可很快沉淀，便于換液和收集；E、粒徑在60-250μm（溶脹后）之間為好，且要盡可能均一，差異不大于20μm。有利于細(xì)胞均勻分布在各微載體表面；F、具有良好的光學(xué)透明性，適于在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞在載體上的生長(zhǎng)情況；G、基質(zhì)是軟的，避免在攪拌中載體互相摩擦而損傷細(xì)胞；H、可耐120℃高溫。便于采用高壓蒸汽滅菌；I、經(jīng)簡(jiǎn)單的適當(dāng)處理后，可以反復(fù)多次使用；J、原料充分。制作簡(jiǎn)便，廉價(jià)。20動(dòng)物細(xì)胞制藥目前微載體的材料有兩類(lèi)：一類(lèi)在載體中加入鈦，增加比重，適用于流化床反應(yīng)器。一類(lèi)不加鈦，比重較輕，可與固體微載體一樣，用于攪拌罐式生物反應(yīng)器或氣升式生物反應(yīng)器。（2）包埋和微囊培養(yǎng)細(xì)胞不是貼附在載體表面。而是包裹在或包埋在凝膠載體或微囊內(nèi)。如果包埋的凝膠載體較大，就稱(chēng)為巨載體培養(yǎng)。微囊培養(yǎng)是在包埋培養(yǎng)的基礎(chǔ)上衍生而來(lái)的，即將包埋的顆粒經(jīng)液化處理而成為微囊。21動(dòng)物細(xì)胞制藥包埋材料的類(lèi)型：A、人工合成的高分子聚合物：聚丙烯酰胺、環(huán)氧樹(shù)脂、聚氨基甲酸酯、聚乙烯醇等。B、糖類(lèi)：纖維素、瓊脂、瓊脂糖、K—卡拉膠、海藻酸鈣、脫乙酰幾丁質(zhì)等。C、蛋白質(zhì)：膠原、明膠、纖維蛋白等。這些材料是靠溫度的變化來(lái)變相的，如海藻酸鈣，在鈉鹽時(shí)是液態(tài)。形成鈣鹽時(shí)則形成凝膠。凝膠的制備常常是在形成凝膠后，再用另外一種電荷相反的材料與之作用，使載體外形成一層聚合膜，然后再使膜內(nèi)的載體液化。22動(dòng)物細(xì)胞制藥包埋和微囊培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：A、包埋或包裹在載體或微囊內(nèi)的細(xì)胞可獲得保護(hù)，避免了剪切力的損害；B、可獲得較高的細(xì)胞密度。一般在107—108細(xì)胞/ml；C、控制微囊膜的孔徑，可使產(chǎn)物濃縮在微囊內(nèi)，有利于下游產(chǎn)物的純化；D、可采用多種上午反應(yīng)器進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，如攪拌罐式生物反應(yīng)器、氣升式生物反應(yīng)器。用包埋法，當(dāng)顆粒直徑較大時(shí)，可采用固定床式生物反應(yīng)器。23動(dòng)物細(xì)胞制藥（3）結(jié)團(tuán)培養(yǎng)利用貼壁細(xì)胞有結(jié)團(tuán)的特點(diǎn)，用攪拌反應(yīng)器和罐流培養(yǎng)的方式獲得高密度的細(xì)胞，開(kāi)創(chuàng)了細(xì)胞結(jié)團(tuán)培養(yǎng)的新方法。其實(shí)質(zhì)是用細(xì)胞本身作為基質(zhì)，相互貼附后，再用懸浮的方法進(jìn)行培養(yǎng)，也是一種貼附—懸浮培養(yǎng)。為了加速細(xì)胞結(jié)團(tuán)，往往加入一些直接較小的微粒，促使細(xì)胞先附著其上，再相互附著。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，節(jié)省了用于微載體的成本。24動(dòng)物細(xì)胞制藥二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的操作方式1、分批式操作有兩種情況：一是將細(xì)胞和培養(yǎng)基一次性加入反應(yīng)器內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，使細(xì)胞增殖到一定密度，產(chǎn)物達(dá)到一定量后將培養(yǎng)基和細(xì)胞一并取出。另一種方式是先將細(xì)胞和培養(yǎng)基加入反應(yīng)器，待細(xì)胞生長(zhǎng)至一定密度后，向反應(yīng)器內(nèi)加入誘導(dǎo)劑或病毒，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間作用后，取出反應(yīng)物。2、半連續(xù)式操作將細(xì)胞和培養(yǎng)基一起加入反應(yīng)器后，在細(xì)胞增長(zhǎng)和產(chǎn)物形成過(guò)程中，每間隔一段時(shí)間，取出部分培養(yǎng)物，然后補(bǔ)充同樣數(shù)量的新鮮培養(yǎng)基，或另加新鮮載體，繼續(xù)培養(yǎng)。該方法被廣泛采用，優(yōu)點(diǎn)是：操作簡(jiǎn)單、生產(chǎn)效率高，可長(zhǎng)期進(jìn)行生產(chǎn)，反復(fù)收獲產(chǎn)品，能使細(xì)胞密度和產(chǎn)品產(chǎn)量一直保持在較高的水平25動(dòng)物細(xì)胞制藥3、灌流式操作將細(xì)胞和培養(yǎng)基一起加入反應(yīng)器后，在細(xì)胞增長(zhǎng)和產(chǎn)物形成過(guò)程中，不斷將條件培養(yǎng)基取出，同時(shí)不斷補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基。它與連續(xù)式操作不同之處是取出部分條件培養(yǎng)基時(shí)，絕大部分細(xì)胞仍保留在反應(yīng)器內(nèi)，而連續(xù)式培養(yǎng)則同時(shí)也取出了部分細(xì)胞。

優(yōu)點(diǎn)：A、細(xì)胞可處在較穩(wěn)定的良好環(huán)境中，培養(yǎng)條件較好，有害代謝廢物濃度低；B、可極大地提高細(xì)胞密度，使產(chǎn)量大大提高；C、產(chǎn)品在罐內(nèi)停留時(shí)間縮短可及時(shí)收留在低溫下保存，有利于產(chǎn)品質(zhì)量的提高；D、培養(yǎng)基的比消耗率較低，且產(chǎn)量質(zhì)量提高，生產(chǎn)成本明顯降低。26動(dòng)物細(xì)胞制藥一、理想的動(dòng)物細(xì)胞反應(yīng)器必須具備的要求1、制造生物反應(yīng)器所采用的一切材料，尤其是與培養(yǎng)基、細(xì)胞直接接觸的材料必須無(wú)毒性；2、生物反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)必須使之具有良好的傳熱、傳質(zhì)和混合性能；3、密封性能良好，可避免一切外來(lái)微生物的污染；4、對(duì)培養(yǎng)環(huán)境中多種物理化學(xué)參數(shù)能自動(dòng)檢測(cè)和調(diào)控；5、可長(zhǎng)期連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)；6、容器內(nèi)表面要求光滑，無(wú)死角，以減少細(xì)胞或微生物的沉積；7、拆裝、連接和清潔方便，能耐高壓蒸汽消毒，便于操作維修；8、設(shè)備成本低。第五節(jié)動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器及其檢測(cè)控制系統(tǒng)27動(dòng)物細(xì)胞制藥二、動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器的類(lèi)型1、攪拌罐式反應(yīng)器：是借鑒細(xì)菌發(fā)酵罐改造而來(lái)，是最早的動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器。特點(diǎn)：能供氧、攪拌速度慢、采用無(wú)氣泡系統(tǒng)、配置有進(jìn)出料系統(tǒng)。2、氣升式生物反應(yīng)器特點(diǎn)：氣體從罐底的導(dǎo)流管進(jìn)入，使液體形成循環(huán)流。具有剪切力小、混合均勻、氧和營(yíng)養(yǎng)的傳遞好、利于密封等優(yōu)點(diǎn)。3、中空纖維式生物反應(yīng)器該反應(yīng)器由數(shù)百至數(shù)千根中空纖維集束組成。材料為聚砜或丙烯共聚物。4、透析袋或透析膜式生物反應(yīng)器主要是能夠?qū)⒎肿恿啃《鴮?duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和產(chǎn)物的產(chǎn)生有抑制作用的乳酸、氨等透析或?yàn)V掉。5、固定床或流化床式生物反應(yīng)器特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，添裝材料是對(duì)細(xì)胞無(wú)毒、又有利于細(xì)胞貼附的材料?，F(xiàn)用于大量生產(chǎn)疫苗和基因工程產(chǎn)品。

28動(dòng)物細(xì)胞制藥一、改進(jìn)表達(dá)載體，提高表達(dá)水平和產(chǎn)量1、采用雜交瘤技術(shù)，提高細(xì)胞表達(dá)量。2、采用更強(qiáng)的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子。3、更好地利用擴(kuò)增系統(tǒng)或?qū)ふ腋弑磉_(dá)位點(diǎn)。4、采用