尿液化學檢驗專家講座

尿液化學檢驗Chemicalexaminationofurine尿液化學檢驗專家講座第1頁2.pH試紙法:1.試帶法:模塊有甲基紅(pH4.6-6.2),溴麝香草酚藍(pH6.0-7.6).變色范圍：黃5.0-綠7.0-藍9.0，儀器或肉眼判讀各種混合指示劑(棕紅色-深黑色),與標準色板比較。（一）測定原理一、尿酸堿度測定（urineacidity）尿液化學檢驗專家講座第2頁3.指示劑法:5.pH計法:4.滴定法:0.4g/L溴麝香草酚藍→滴于尿液→黃-酸性,綠-中性,藍-堿性.受黃疸尿及血尿影響.pH電極.準確度較高,需儀器,煩瑣,少用.標準NaOH滴定,測總酸度.復雜,少用（一）測定原理一、尿酸堿度測定（urineacidity）尿液化學檢驗專家講座第3頁（二）尿酸度測定方法學評價方法評價試帶法√配套應用于尿液分析儀，是當前滿足臨床對尿pH檢驗需要最廣泛應用一個篩檢方法pH試紙法操作簡便，采取pH精密試紙可提升檢測靈敏度，但試紙易吸潮而失效指示劑法溴麝香草酚藍變色范圍為pH6.0～7.6，當尿pH偏離此范圍時，檢測結果不準確；黃疸尿、血尿將直接影響結果判讀滴定法可測定尿酸度總量。臨床上用于尿酸度動態(tài)監(jiān)測，但操作復雜pH計結果準確可靠,需特殊儀器，操作繁瑣?？捎糜谀I小管性酸中毒定位診療、分型、判別診療時尿pH準確測定尿液化學檢驗專家講座第4頁標本新鮮;操作規(guī)范;試帶保留;試劑配制標準;pH計校準.（三）質量確保一、尿酸堿度測定（urineacidity）尿液化學檢驗專家講座第5頁正常飲食晨尿pH：5.5～6.5，平均6.0;隨機尿pH：4.6～8.0；可滴定酸度：20～40mmol/24h尿（四）參考值一、尿酸堿度測定（urineacidity）尿液化學檢驗專家講座第6頁(1)生理改變:①食物影響：蛋白類→酸性;果蔬類→堿性.堿潮:餐后胃酸↑,腎泌H+↓,Cl-重吸收↑→尿pH一過性↑.②生理活動：運動,饑餓,出汗,應急,夜間入睡呼吸變慢→體內(nèi)酸性代謝產(chǎn)物↑→pH↓.（五）臨床意義一、尿酸堿度測定（urineacidity）尿液化學檢驗專家講座第7頁(2)病理改變:①酸性尿：酸中毒,高熱,慢性腎炎,白血病,糖尿病酮癥酸中毒,低鉀血癥,痛風②堿性尿：堿中毒,嘔吐,尿路感染,Ⅱ型腎小管性酸中毒,原發(fā)性醛固酮增多癥

一、尿酸堿度測定（urineacidity）（五）臨床意義尿液化學檢驗專家講座第8頁（3）藥品影響：①NaHCO3,K2CO3,枸櫞酸鈉→堿化尿液→預防酸性結晶(尿酸及胱氨酸)形成;促進酸性藥品排泄.②氯化鈣(銨、鉀)、稀鹽酸→酸化尿液→預防堿性結晶(磷/碳/草酸鈣)形成;促進堿性藥品排泄;預防細菌生長.③溶血時口服NaHCO3堿化尿液→促進溶解及排泄Hb.一、尿酸堿度測定（urineacidity）（五）臨床意義尿液化學檢驗專家講座第9頁表5-6常見影響尿液pH原因影響原因尿酸性尿堿性食物肉類、高蛋白及混合食物（含硫、磷）蔬菜、水果（含鉀、鈉）生理活動猛烈運動、應激、饑餓、出汗用餐后堿潮藥品氯化銨、氯化鉀、氯化鈣、稀鹽酸等小蘇打、碳酸鉀、碳酸鎂、枸櫞酸鈉、酵母、利尿劑等腎功效腎小球濾過增加而腎小管保堿能力正常腎小球濾過功效正常而腎小管保堿能力喪失尿液化學檢驗專家講座第10頁表5-6常見影響尿液pH原因影響原因尿酸性尿堿性疾?、偎嶂卸尽l(fā)燒、慢性腎小球腎炎。②代謝性疾病：如糖尿病、痛風、低血鉀性堿中毒（腎小管分泌H＋增強，尿酸度增高）。③其它：如白血病、呼吸性酸中毒（因CO2潴留）。④尿酸鹽或胱氨酸尿結石①堿中毒：如呼吸性堿中毒，丟失CO2過多。②嚴重嘔吐（胃酸丟失過多）。③尿路感染：如膀胱炎、腎盂腎炎、變形桿菌性尿路感染（細菌分解尿素產(chǎn)生氨）。④腎小管性酸中毒：腎小球雖濾過正常，但遠曲小管形成氨和H＋交換功效受損，腎小管泌H＋、排H＋及H＋-Na＋交換能力減低，機體顯著酸中毒，尿pH呈相對偏堿性。⑤草酸鹽或磷酸鹽或碳酸鹽尿結石其它尿液含酸性磷酸鹽尿內(nèi)混入多量膿、血、細菌尿液化學檢驗專家講座第11頁二、尿液蛋白質檢驗

健康人尿液中蛋白含量極少，定性為陰性。尿液中蛋白質含量＞150mg/24h或尿中蛋白質濃度＞100mg/L蛋白定性為陽性，即

proteinuria.

1.蛋白尿(proteinuria,PRO)※(一)概述尿液化學檢驗專家講座第12頁二、尿液蛋白質檢驗2.蛋白尿形成原因(1)腎小球濾過膜破壞或電荷屏障改變(2)腎小管重吸收障礙(3)溢出性(4)腎組織性(一)概述尿液化學檢驗專家講座第13頁【原理】

指示劑蛋白質誤差原理※溴酚藍─→陰離子(1)干化學試帶法【評價】

肉眼和儀器；對清蛋白靈敏(70-100mg/L)，與Hb/Mb/BJP基本不反應；簡便快速，易標準化，應用普遍。健康普查、腎病篩查。pH3.2＋pro+→復合物(淡黃→綠色→蘭色)(二)尿蛋白定性檢驗1.測定原理與評價尿液化學檢驗專家講座第14頁表5-7試帶法檢測干擾原因及評價干擾原因評價標本原因尿pH＞9，可假陽性；尿pH＜3，可假陰性。最適尿pH5～6，故必要時可先調標本pH值。尿液新鮮。食物原因尿酸堿度與攝入食物有系，檢驗前1天應防止單一攝入過多肉類或蔬菜、水果，進食應均衡藥品原因假陽性：服奎寧、奎寧丁、嘧啶等或尿中含聚乙烯、吡咯酮、洗必泰、磷酸鹽、季胺鹽消毒劑等，尿呈強堿（pH≥9.0）。假陰性：大劑量滴注青霉素或用慶大霉素、磺胺、含碘造影劑操作過程假陽性：試帶浸漬時間過長，反應顏色變深。假陰性：試帶浸漬時間過短反應不完全或浸漬時間過長膜塊中試劑流失(二)尿蛋白定性檢驗尿液化學檢驗專家講座第15頁【評價】

(2)磺基水楊酸法【原理】pro++磺基水楊酸根-→不溶性蛋白沉淀簡便快速，靈敏度高0.05-0.1g/L；與清/球/本周蛋白反應；假陽性。干化學法參考方法，NCCLS推薦

確證試驗。H+(二)尿蛋白定性檢驗1.測定原理與評價1尿2-3ml+試劑0.1ml，馬上混勻，1min內(nèi)觀察結果.尿液化學檢驗專家講座第16頁(2)磺基水楊酸法【干擾原因】

(二)尿蛋白定性檢驗1.測定原理與評價干擾因素假陽性①高濃度尿酸、尿酸鹽、草酸鹽②碘造影劑、大劑量青霉素③混入生殖系統(tǒng)分泌物假陰性pH>9或<3尿液化學檢驗專家講座第17頁陰性(－)：不渾濁微量(±)：輕微渾濁，PRO約0.1-0.15g/L弱陽性(＋)：顯著白霧狀，PRO約0.2-0.5g/L陽性(2＋)：渾濁，顯著顆粒，PRO約0.6-2.0g/L強陽性(3＋)：大量絮片沉淀，渾濁，PRO約2-5g/L最強陽性(4＋)：凝塊，大量絮片沉淀，PRO＞5g/L(3)加熱乙酸法【原理】加熱→PRO變性凝固，加酸→pH靠近PRO等電點;溶解堿性鹽類結晶.【評價】(二)尿蛋白定性檢驗特異性高，干擾少，靈敏度0.15g/L；與全部蛋白發(fā)生沉淀反應。經(jīng)典準確、定性確證試驗.※1.測定原理與評價尿液化學檢驗專家講座第18頁(3)加熱乙酸法【干擾原因】(二)尿蛋白定性檢驗※1.測定原理與評價干擾因素假陽性①混入生殖系統(tǒng)分泌物假陰性①pH>9或<3②無鹽或低鹽飲食者，測定前加入少許鹽溶液定性：陰性2.參考值尿液化學檢驗專家講座第19頁

干化學測定尿蛋白原理R-CHNH2COOHH+R-CHNH3+COOH+指示劑顯色指示劑蛋白誤差原理pH3.6(二)尿蛋白定性檢驗尿液化學檢驗專家講座第20頁(1)檢測前：患者正常飲食;(2)檢測中：※

①室內(nèi)質控；陽性及陰性對照。

②試帶法：按規(guī)程操作，浸漬時間適宜；陰涼干燥；使用期。③加熱乙酸法：鹽類→渾濁→假陽性；遵照加熱-加酸-再加熱；5%乙酸為尿液1/10.④加熱乙酸法和磺基水楊酸法：調尿液pH為5-6

3.質量確保(二)尿蛋白定性檢驗(3)檢測后：匯報審核;結果與臨床不符，分析原因尿液化學檢驗專家講座第21頁(1)加熱乙酸法：

①加酸要適當;②無鹽或低鹽飲食，先加1～2滴飽和NaCL;③PRO極少時，加酸后出現(xiàn)沉淀。(2)磺基水楊酸法：

①尿液渾濁，應先離心或過濾;

②強堿性尿加5%乙酸數(shù)滴;

③碘造影劑、青霉素及尿酸或尿酸鹽→假陽性。(3)干化學法：①尿液新鮮②超大劑量青霉素→假陰性。3.質量控制(二)尿蛋白定性檢驗尿液化學檢驗專家講座第22頁(1)沉淀法【原理】

pro+生物堿→沉淀物【評價】(三)

尿蛋白定量檢驗費時、準確性差，已淘汰H+1.測定方法與評價尿液化學檢驗專家講座第23頁【評價】

(2)雙縮脲比色法【原理】

鎢酸沉淀蛋白質，雙縮脲法定量。蛋白質定量經(jīng)典方法。(三)尿蛋白定量檢驗1.測定方法與評價尿液化學檢驗專家講座第24頁【原理】

(3)染料結正當【評價】

后兩種靈敏高，簡便快速，呈色穩(wěn)定，干擾少，但易污染。第一個煩瑣，沉淀不完全-影響結果。（1）麗春紅S法：三氯乙酸和麗春紅S+pro→離心沉淀→溶于堿比色（2）考馬斯亮藍法：G-250(紅)+pro→蘭色→595nm比色（3）鄰苯三酚紅鉬酸絡正當:鄰苯三酚紅+鉬酸→紅色化合物+PROH+H+(三)尿蛋白定量檢驗1.測定方法與評價藍色（600nm比色）尿液化學檢驗專家講座第25頁【原理】單克隆抗體技術(4)免疫法【評價】

定量：≤0.15g/24h＜0.1g/L靈敏度和特異性更高，臨床普遍應用【原理】SDS、瓊脂糖電泳(5)電泳法【評價】

靈敏度和特異性更高(三)尿蛋白定量檢驗1.測定方法與評價2.參考值尿液化學檢驗專家講座第26頁(三)尿蛋白定量檢驗定量：≤0.15g/24h＜0.1g/L2.參考值尿液化學檢驗專家講座第27頁(1)結合靈敏度和線性范圍選擇方法；

(2)離心取上清

(3)冷藏保留(4)更換試劑重做標準曲線3.質量控制(三)尿蛋白定量檢驗尿液化學檢驗專家講座第28頁(1)生理性蛋白尿

功效性(2)病理性蛋白尿腎后性腎性腎小球性:腎小管性:混合性:溢出性:腎前性體位性偶然性:血、膿、粘液Albβ2、α1-MAlb、β2-MHb,Mb,BJPTH糖蛋白＜+；≤0.5g/24h；青少年++～+++，臥床后(-)；青少年(三)尿蛋白定量檢驗※4.臨床意義組織性:尿液化學檢驗專家講座第29頁蛋白尿選擇性腎小球濾過膜損傷程度及尿中蛋白組分不一樣:選擇性蛋白尿：非選擇性蛋白尿：MW4～9萬,Alb,Tf;AT,前Alb.3+～4+;>3.5g/24h;腎病綜合癥.MW＞9萬,Ig(G,A,M),C3；Alb,T-H.1+～4+;0.5～3.0g/24h.連續(xù)→腎衰；原/繼發(fā)腎小球疾病.(三)尿蛋白定量檢驗尿液化學檢驗專家講座第30頁腎小球性：腎小球腎炎+～++，極少＞+++；腎小管性：±～+，極少＞++.混合性性：腎病綜合征≥+++.組織性：±～+，極少＞++.(三)尿蛋白定量檢驗尿液化學檢驗專家講座第31頁三、尿液葡萄糖檢驗正常人尿內(nèi)含糖量極少，0.56～5.0mmol/24h，定性試驗陰性?！悄?glucosuria,GLU)血糖＞8.88mmol/L，＞腎糖閾值，或近端腎小管重吸收功效障礙時尿糖↑，定性試驗陽性尿液.尿液化學檢驗專家講座第32頁(1)試帶法【原理】※葡萄糖+H2O

葡萄糖氧化酶

葡萄糖酸內(nèi)酯+H2O2

H2O2+色素原

過氧化物酶

有色物質+H2O（glucoseoxidase-peroxidasemethod）【評價】特異性強,靈敏度高(1.67～2.78mmol/L→弱陽性),簡便快速,自動分析.1.測定方法與評價(一)尿糖定性檢驗尿液化學檢驗專家講座第33頁(1)干化學試帶法【干擾原因】葡萄糖氧化酶試帶法1.測定方法與評價(一)尿糖定性檢驗標本原因假陽性：容器殘留強氧化劑.假陰性：標本放置過久,高SG尿,尿酮體>0.4g/L.藥品原因假陰性：VitC、左旋多巴.尿液化學檢驗專家講座第34頁(2)班氏法(Benedict法)【原理】

Cu2+→Cu+

蘭色

黃色至磚紅色.【評價】缺乏特異性,靈敏度低(8.33mmol/L→弱陽性)-CHO△,OH－1.測定方法與評價班氏試劑1ml,煮沸不變色+尿2滴→煮沸1-2min→冷卻后觀察.(一)尿糖定性檢驗尿液化學檢驗專家講座第35頁(2)班氏法(Benedict法)【干擾原因】1.測定方法與評價(一)尿糖定性檢驗標本原因假陽性：還原性糖假陰性：①大量銨鹽，預先加堿煮沸去氨后再檢驗；②PRO＞0.5g/L,加熱乙酸法去蛋白取濾液檢驗;藥品原因假陽性：VitC,青/鏈霉素,頭孢菌素,異煙肼,水楊酸鹽,氨芐西林尿液化學檢驗專家講座第36頁(3)薄層層析法(thin-layerchromatography,TLC)【評價】判別、確證尿糖種類特異、靈敏方法；操作煩瑣，極少應用。(一)尿糖定性檢驗1.測定方法與評價【原理】吸附劑作固定相；有機溶劑作流動相；兩相間作相對移動。各組分→流動相→固定相→重復吸附-解析-親和作用→展開→分離。比移值（Rf）=斑點距離/溶劑距離尿液化學檢驗專家講座第37頁假陽性多尿液化學檢驗專家講座第38頁(1)檢驗前：(2)檢測中：①容器清潔，不含氧化性物質；一次性尿杯.②消除VitC干擾：尿液煮沸幾分鐘.(3)檢測后：①匯報審核,結果不符查找原因;②與臨床溝通.2.質量控制(一)尿糖定性檢驗①室內(nèi)質控.②試帶法注意反應時間和溫度;陰涼干燥,保質期.班式法恪守操作規(guī)程,注意判讀時間.定性：陰性3.參考值尿液化學檢驗專家講座第39頁(1)檢驗前質量控制(2)試帶法：①試帶避光干燥保留；②VitC,高SG尿,酮尿,左旋多巴→假陰性;③尿液污染過氧化物或次氯酸鹽→假陽性.(3)班氏法：①VitC,青/鏈霉素,頭孢菌素水楊酸鹽,氨芐西林→假陽性；②大量銨鹽，預先加堿煮沸去氨后再檢驗；③PRO＞0.5g/L,加熱乙酸法去蛋白取濾液檢驗;④大量尿酸鹽→綠色渾濁→灰藍色;

2.質量控制(一)尿糖定性檢驗尿液化學檢驗專家講座第40頁【測定方法】葡萄糖氧化酶法,己糖激酶法(二)尿糖定量檢驗【評價】測血糖方法。藥品和尿液中自然物質對己糖激酶法幾乎無干擾；對葡萄糖氧化酶法有不一樣程度干擾。2.參考值：0.56～5.0mmol/L1.測定方法與評價尿液化學檢驗專家講座第41頁非葡萄糖尿葡萄糖尿血糖增高性糖尿血糖正常性糖尿-腎性糖尿病-代謝性內(nèi)分泌性糖尿飲食性糖尿應激性糖尿饑餓-糖耐量糖尿糖尿乳糖尿：半乳糖尿果糖尿肝功障礙哺乳期※

(三)臨床意義暫時性尿液化學檢驗專家講座第42頁(胰島素分泌不足)饑餓-糖耐量糖尿：見于晚期食道腫瘤、低營養(yǎng)狀態(tài)和妊娠劇吐者做糖耐量試驗。尿液化學檢驗專家講座第43頁表5-10內(nèi)分泌性糖尿常見原因及檢驗結果疾病原因檢驗結果甲狀腺功效亢進甲狀腺素分泌過多，食欲亢進、腸壁血流加速，葡萄糖吸收率增加餐后血糖增高，餐后尿糖陽性空腹血糖、餐后2h血糖正常垂體前葉功效亢進生長激素分泌過多,反抗胰島素作用血糖增高,尿糖陽性嗜鉻細胞瘤腎上腺素、去甲腎上腺素大量分泌，肝糖原降解為葡萄糖加速血糖增高,尿糖陽性Cushing綜合征糖皮質激素大量分泌,糖原異生作用旺盛,葡萄糖磷酸激酶和反抗胰島素作用受抑制血糖增高,尿糖陽性尿液化學檢驗專家講座第44頁表5-11血糖正常性糖尿常見原因及檢驗結果疾病原因檢驗結果家族性糖尿先天性近曲小管對糖重吸收功效缺損（<5.51mmol/L或1g/L）見于Fanconi綜合癥.空腹血糖、糖耐量試驗正常；空腹尿糖陽性新生兒糖尿腎小管對葡萄糖重吸收功效不完善空腹血糖、糖耐量試驗正常；尿糖陽性妊娠或哺乳期細胞外液容量增高，腎濾過率增高而近曲小管重吸收能力受抑制，腎糖閾減低空腹血糖、糖耐量試驗正常；尿糖陽性后天取得性腎性糖尿：慢性腎盂腎炎、藥品中毒、腎病綜合癥尿液化學檢驗專家講座第45頁血糖起源與去路單糖轉化尿液化學檢驗專家講座第46頁四、尿液酮體定性檢驗β-羥丁酸78%乙酰乙酸20%丙酮2%腦心臟肌肉1.酮體(ketonebodies,KET)尿酮體定性為陽性，即ketonuria.正常血漿含量2～4mg/L正常24h尿含量:乙酰乙酸＜25mg,

β-羥丁酸＜9mg,丙酮＜3mg尿液化學檢驗專家講座第47頁(2)乙酰乙酸測定法(Gerhardt法)※

2.檢測原理四、尿液酮體定性檢驗+亞硝基鐵氰化鈉→紫色化合物丙酮乙酰乙酸OH－(1)亞硝基鐵氰化鈉法乙酰乙酸+氯化高鐵→乙酰乙酸鐵

(赭/酒紅色)

尿液化學檢驗專家講座第48頁表5-12基于亞硝基鐵氰化鈉尿酮體檢測方法方法類別檢測過程試帶法含甘氨酸、堿緩沖劑、亞硝基鐵氰化鈉。在堿性條件下，后者與尿乙酰乙酸、丙酮起紫色反應。朗格法尿中先加固體亞硝基鐵氰化鈉后,后加少許冰乙酸,反復振蕩使其溶解、混勻，再沿管壁漸漸加入氫氧化銨液，尿中丙酮或乙酰乙酸與亞硝基鐵氰化鈉反應，在與氨接觸面上形成紫色環(huán)。Rothera法尿中加50%乙酸溶液,再加200g/L亞硝基鐵氰化鈉溶液,混勻,沿管壁漸漸加入濃氫氧化銨溶液,尿中丙酮或乙酰乙酸與亞硝基鐵氰化鈉反應，尿液表面出現(xiàn)紫色環(huán)改良Rothera法又稱酮體粉法，將亞硝基鐵氰化鈉、硫酸銨、無水碳酸鈉混合研磨成粉。在堿性條件下，丙酮或乙酰乙酸與亞硝基鐵氰化鈉和硫酸銨作用，生成紫色化合物。片劑法含甘氨酸（與丙酮反應）和其它物質，可檢測尿液、血清、血漿或全血酮體。于片劑上加尿1滴,片劑呈色在要求時間內(nèi)與標準色板進行比色。尿液化學檢驗專家講座第49頁3.方法學評價四、尿液酮體定性檢驗片劑法本法對乙酰乙酸靈敏度50～100mg/L，丙酮為200～250mg/L

Rothera法本法對乙酰乙酸靈敏度10～50mg/L，丙酮為100～250mg/L

Gerhardt法本法對乙酰乙酸靈敏度250～700mg/L尿液化學檢驗專家講座第50頁表5-13尿酮體不一樣檢測方法靈敏度比較化學成份朗格法Rothera法改良Roth-era法片劑法試帶法Gerhardt法乙酰乙酸（mg/L）5010～508050～l0050～l00250～700丙酮（mg/L）200100～2501000200～250400～700不反應β-羥丁酸（mg/L）不反應不反應不反應不反應不反應不反應3.方法學評價【靈敏度】四、尿液酮體定性檢驗尿液化學檢驗專家講座第51頁【干擾原因】假陽性較多肌酐、肌酸，高色素尿，酞、苯丙酮、左旋多巴代謝物假陰性標本搜集和保留不妥；亞硝基鐵氰化鈉對溫度、熱度或光線很靈敏；試帶受潮失活。3.方法學評價四、尿液酮體定性檢驗尿液化學檢驗專家講座第52頁(1)檢測前：標本新鮮,及時檢測；密閉冷藏/冷凍(2)檢測中：①陰陽對照；②加入少許冰乙酸預防肌酐、肌酸過多引發(fā)假陽性③試帶陰涼干燥，保質期。4.質量確保四、尿液酮體定性檢驗(3)檢測后：①注意方法靈敏度.

②不一樣病程酮體成份影響.尿液化學檢驗專家講座第53頁(1)早期診療：糖尿病酮癥酸中毒昏迷四、尿液酮體定性檢驗※

5.臨床意義酮體陽性見于:判別:①低血糖、心腦血管病酸中毒、高血糖滲透性糖尿病昏迷→酮體不增高.②糖尿病酮癥者腎功效嚴重障礙而腎閾值↑→尿酮體↓-消失.②糖尿病酮癥酸中毒緩解時,β-羥丁酸→乙酰乙酸,分析結果時必須親密結合臨床.(2)治療監(jiān)測:①糖尿病酮癥酸中毒早期主要為β-羥丁酸;測定血β-羥丁酸有利于早期診療.※

5.臨床意義酮體陽性見于:四、尿液酮體定性檢驗※

5.臨床意義酮體陽性見于:尿液化學檢驗專家講座第54頁四、尿液酮體定性檢驗※

5.臨床意義酮體陽性見于:(5)藥品影響：降糖藥抑制細胞呼吸作用(3)非糖尿病性酮癥：感染、嚴重嘔吐腹瀉、長久饑餓、禁食、子癇(4)中毒:氯仿、乙醚、磷中毒尿液化學檢驗專家講座第55頁五、尿液膽紅素(BIL)定性檢驗1.膽紅素代謝Y蛋白膽紅素-Y蛋白膽紅素膽紅素葡萄糖酸酯(結合膽紅素)UDP-GuUDP20%尿液化學檢驗專家講座第56頁尿液化學檢驗專家講座第57頁(2)

氧化法(1)試帶法（重氮法）膽紅素+二氯苯胺重氮鹽-→紫紅色偶氮化合物強酸膽紅素+氯化鋇→沉淀+三氯化鐵→膽青/綠/黃素

(藍/黃綠色)H+2.檢測原理※五、尿液膽紅素定性檢驗①Harrison法②Smith碘環(huán)法膽紅素+碘→膽綠素(綠色)（接觸面）尿液化學檢驗專家講座第58頁(1)試帶法：簡單，分析儀，定性篩檢2,4-二氯苯胺試帶靈敏度5-10mg/L二氯重氮氟化硼酸鹽試帶靈敏度2-5mg/L3.方法學評價五、尿液膽紅素定性檢驗【干擾原因】假陽性大量氯丙嗪治療，尿含有鹽酸苯偶氮吡啶代謝產(chǎn)物假陰性標本保留不妥，BIL遇光分解；高VitC和亞硝酸鹽抑制偶氮反應尿液化學檢驗專家講座第59頁②Harrison法:煩瑣,靈敏度高(0.9umol/L)/0.5mg/L3.方法學評價五、尿液膽紅素定性檢驗(2)

氧化法:①Smith碘環(huán)法:簡便,靈敏度低(17.1umol/L)，少用【干擾原因】假陽性水楊酸、阿司匹林、牛黃→紫紅色→干擾Harrison法.假陰性標本保留不妥（未避光）尿液化學檢驗專家講座第60頁(1)檢測前：標本新鮮,棕色瓶避光保留.(2)檢測中：

①試帶避光干燥；規(guī)范，高低質控，定檢。

②Harrison法:加入FeCl3后未見足夠鋇鹽沉淀,可加適量硫酸銨。

五、尿液膽紅素定性檢驗4.質量控制※5.參考值(3)檢測后：試帶法定性，可疑用Harrison法驗證陰性尿液化學檢驗專家講座第61頁

(1)肝細胞性黃疸(2)梗阻性黃疸hepatocellularjaundiceobstructjaundice(3)溶血性黃疸hemolyticjaundice(+)(++)(-)五、尿液膽紅素定性檢驗6.臨床意義黃疸診療與判別診療尿液化學檢驗專家講座第62頁六、尿膽原和尿膽素定性檢驗※(1)改良Ehrlich法(濕化學法)

(2)干化學試帶法尿膽原+對二甲氨基苯甲醛→櫻紅色化合物

①Ehrlich醛反應※②尿膽原+重氮化合物→紅色化合物1.尿膽原(URO)測定方法H+Urobilinogen,URO/UBG＋＋＋

馬上呈深紅色＋＋

放置10min呈櫻紅色＋

放置10min呈微紅色－

放置10分鐘后不顯色尿液化學檢驗專家講座第63頁2.尿膽素(urobilin)測定方法無膽紅素尿液+碘液尿膽原尿膽素Zn2++

復合物(綠色熒光)六、尿膽原和尿膽素定性檢驗※

Schleisinger法:氧化尿液化學檢驗專家講座第64頁

(1)試帶法：改良Ehrlich法：簡單快速，分析儀，定性或定量；不一樣試帶靈敏度不一樣（1-4mg/L）。偶氮反應試帶不受膽紅素影響，對尿膽原特異。(2)尿膽素最低檢出量為0.05mg/L。3.方法學評價六、尿膽原和尿膽素定性檢驗尿液化學檢驗專家講座第65頁干擾原因評價標本原因標本久置，尿膽原氧化為尿膽素。藥品原因假陽性：吩噻嗪類、氯丙嗪類、磺胺類、普魯卡因假陰性：大量VitC、長久服用廣譜抗生素。內(nèi)源性物質假陽性：卟膽原、吲哚、膽紅素→紅色。

【干擾原因】Ehrlich醛反應偶氮法：尿甲醛>2g/L,亞硝酸鹽>0.05g/L→靈敏度↓尿液化學檢驗專家講座第66頁(1)檢測前：標本新鮮,避光保留；口服NaHCO3堿化尿液,午餐后2-4h尿標本。(2)檢測中:口服NaHCO3堿化尿液,先用乙酸調整為弱酸性.試帶法:規(guī)范,高低室內(nèi)質控,定檢.陰涼干燥,密閉避光,使用期.※4.質量控制六、尿膽原和尿膽素定性檢驗(3)檢測后：正確評價尿三膽;尿膽原陰性可疑→尿膽素定性驗證.尿液化學檢驗專家講座第67頁尿膽原：陰性或弱陽性；

1:20稀釋陰性.尿膽素：陰性(1)判別黃疸種類.尿二膽正常溶血性黃疸肝細胞性黃疸阻塞性黃疸尿膽紅素––+++尿膽原少許↑↑(++)↑(+)↓(-)(2)反應肝細胞損傷敏感指標.(3)長久便秘易使尿膽原陽性程度增加.六、尿膽原和尿膽素定性檢驗5.參考值6.臨床意義尿液化學檢驗專家講座第68頁表5-15不一樣類型黃疸判別診療標本指標正常人溶血性黃疸肝細胞性黃疸梗阻性黃疸血清總膽紅素正常增高增高增高

未結合膽紅素正常增高增高正常/增高

結合膽紅素正常增高/正常增高增高尿液顏色淺黃深黃深黃深黃

尿膽原1:20陰性強陽性陽性陰性

尿膽素陰性陽性陽性陰性

膽紅素陰性陰性陽性陽性糞便顏色黃褐深色黃褐/變淺變淺/白陶土色

糞膽素正常增高減低/正常減低/消失尿液化學檢驗專家講座第69頁尿液中Hb起源：①血管內(nèi)溶血②尿路出血七、尿血紅蛋白定性檢驗正常人血漿中游離Hb微量(50mg/L),與結合珠蛋白形成Hb-Hp復合物，在單核-巨噬細胞系統(tǒng)代謝，故尿中Hb極微。定性：陰性驗證尿液潛在出血試驗:隱血試驗(occultbloodtest)1.概述尿液化學檢驗專家講座第70頁(1)試帶法(2)濕化學法(3)免疫法：單克隆抗體法利用膠體金標識抗人Hb單克隆抗體檢測。2.測定方法原理相同※七、尿血紅蛋白定性檢驗H2O2

───→亞鐵血紅素O鄰甲苯胺─→鄰甲偶氮苯(藍色)尿液化學檢驗專家講座第71頁HbY1-Hb-Y2Y1=膠體金標識抗人Hb單克隆抗體Y2=抗人Hb單克隆抗體Y3=羊抗鼠IgG抗體膠體金單克隆抗體法:尿液化學檢驗專家講座第72頁(1)試帶法：(2)濕化學法：(3)免疫法：試劑穩(wěn)定性差,特異性較低,假陽性多.0.3-0.6mg/L簡便快速,靈敏度高(0.15-0.3mg/L),影響多,篩檢.簡便,靈敏度高(0.2mg/L),特異性強，驗證3.方法學評價七、尿血紅蛋白定性檢驗尿液化學檢驗專家講座第73頁3.方法學評價七、尿血紅蛋白定性檢驗方法干擾原因試帶法假陽性：熱不穩(wěn)定酶、氧化劑污染、尿路感染假陰性：大量VitC、甲醛、亞硝酸鹽，還原劑化學法假陽性：熱不穩(wěn)定酶及過氧化物酶，鐵劑、硝酸、銅鋅、碘化物免疫法不受雞牛豬羊兔Hb(500ug/ml)、辣根過氧化物酶(200ug/ml)干擾.【干擾原因】尿液化學檢驗專家講座第74頁陰性(1)檢測前：標本新鮮,煮沸2分→破壞WBC過氧化物酶和其它對熱不穩(wěn)定酶.(2)檢測中：高低室內(nèi)質控，陽性對照；3%H2O2或試帶驗證所用試劑使用期和可靠性?！?.質量控制5.參考值七、尿血紅蛋白定性檢驗(3)檢測后：審核，溝通，驗證。尿液化學檢驗專家講座第75頁(2)輔助診療泌尿系統(tǒng)疾病.(1)輔助診療腎前性溶血性疾病.各種血管內(nèi)溶血性疾病:PNH,血型不合輸血,AIHA,行軍性Hb尿;各種病毒感染、瘧疾;大面積燒傷、體外循環(huán)、術后所致RBC大量破壞.隱匿性腎炎尿中少許RBC破壞→隱血試驗(＋);鏡檢時RBC少.6.臨床意義七、尿血紅蛋白定性檢驗尿液化學檢驗專家講座第76頁八、亞硝酸鹽(NIT)硝酸鹽亞硝酸鹽(nitrate)(nitrite)硝酸鹽還原酶G—桿菌對氨基苯磺(砷)酸重氮鹽＋a-萘胺偶氮化合物(紅色)1.檢測原理：亞硝酸鹽還原法尿液化學檢驗專家講座第77頁(1)亞硝酸鹽檢出率3個影響原因：①尿中G-桿菌要有硝酸鹽還原酶;②尿潴留時間＞4h;③尿中有硝酸鹽.八、亞硝酸鹽(NIT)2.方法學評價(2)靈敏度：0.3-0.6mg/L(3)干擾原因尿液化學檢驗專家講座第78頁表5-16亞硝酸鹽檢測干擾原因及評價因素評價標本高比重尿使試驗靈敏度降低；假陽性：陳舊尿、偶氮劑污染尿食物尿中硝酸鹽主要起源于正常飲食、體內(nèi)蛋白質代謝、或由氨內(nèi)源性合成。不能正常飲食患者，體內(nèi)缺乏硝酸鹽，即使有細菌感染，也可出現(xiàn)陰性致病菌常見致病菌：大腸桿菌屬（致病率最高）、Klebs桿菌屬、變形桿菌屬、葡萄球菌屬、假單胞菌屬等。陽性：大腸埃希菌感染符合率約為80%。陰性：腸球菌屬、糞鏈球菌屬感染藥物假陽性：非那吡啶假陰性：利尿劑、硝基呋喃、大量維生素C；尿停留膀胱內(nèi)時間晨尿標本很好，尿在膀胱內(nèi)停留時間長，細菌有充分作用時間，不然，試驗呈假陰性尿液化學檢驗專家講座第79頁(1)檢測前：晨尿，盡快檢測。八、亞硝酸鹽(NIT)※3.質量控制(2)檢測中：高低室內(nèi)質控,定時陽性標本驗證;試帶干燥避光，使用期。(3)檢測后：審核,結合LEU、鏡檢分析。陰性4.參考值尿液化學檢驗專家講座第80頁快速篩檢尿路感染NIT陽性:泌尿系統(tǒng)有細菌感染.(排除假陽性)NIT陰性:不能排除泌尿系統(tǒng)有細菌感染.八、亞硝酸鹽(NIT)※5.臨床意義NIT＋試帶LEU＋鏡檢→準確診療.確證試驗：尿細菌培養(yǎng)陽性尿液化學檢驗專家講座第81頁九、白細胞(WBC,LEU)(leukocyte)1.檢測原理：酯酶(esterase)法吲哚酚酯吲哚酚+有機酸粒細胞酯酶

+重氮鹽↓重氮色素（紫紅色縮合物）尿液化學檢驗專家講座第82頁九、白細胞(WBC,LEU)2.方法學評價(1)靈敏度10～25個/ul或5～15個/HPF.特異性強：中性粒細胞.(2)【干擾原因】假陽性污染陰道分泌物、甲醛；高濃度BIL、非那吡啶、呋喃坦啶.假陰性WBC<10～25/μl,PRO＞5g/L,GLU≥30g/L;大量青霉素、先鋒霉素Ⅳ、慶大霉素；VitC?尿pH<4.4時草酸過多尿液化學檢驗專家講座第83頁九、白細胞(WBC,LEU)※3.質量控制(1)檢測前：標本新鮮,久置后WBC破壞→試帶法與鏡檢結果差異過大。(2)檢測中：規(guī)范操作和質控。(3)檢測后：審核,結合NIT、LEU、鏡檢分析，提升尿路感染診療可靠性。陰性4.參考值尿液化學檢驗專家講座第84頁LEU陽性:泌尿系統(tǒng)感染.(排除假陽性)※5.臨床意義LEU陽性＋鏡檢陰性→？

九、白細胞(WBC,LEU)診療泌尿系統(tǒng)感染。LUE陰性:鏡檢為淋巴細胞或單核細胞。見于腎移植排斥反應、泌尿系結核。中性粒細胞溶解，見于腎臟病人。尿液化學檢驗專家講座第85頁十、維生素C(VitC或ASG)1.反應原理：甲基綠＋磷鉬酸＋噻嗪化合物

＋VitC

鉬藍(藍色→紫色)檢測VitC用于提醒尿液OB、BIL、GLU、NIT及LEU檢測結果是否準確，預防出現(xiàn)假陰性結果。(1)還原法(2)吲哚酚法尿液化學檢驗專家講座第86頁2.方法學評價(1)靈敏度：50-100mg/L.特異性：只檢測還原性抗壞血酸.(2)【干擾原因】假陽性龍膽酸、L-多巴；尿pH