動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)概念原理課件

資料：燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植，但對(duì)于大面積燒傷病人來(lái)講，健康皮膚很有限，請(qǐng)同學(xué)們想一想如何來(lái)治療該病人？取該患者的皮膚進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),獲得足量的細(xì)胞后再移植。1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)2.動(dòng)物細(xì)胞融合3.制備單克隆抗體4.細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)2.2動(dòng)物細(xì)胞工程2.2.1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后,放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)概念：原理：細(xì)胞增殖胰蛋白酶處理取出組織胚胎或幼齡動(dòng)物器官組織剪碎單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)（細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)增殖長(zhǎng)成單層細(xì)胞。2、過(guò)程分化程度低，增殖能力強(qiáng)，有絲分裂旺盛，容易培養(yǎng)加培養(yǎng)液組織細(xì)胞靠在一起，彼此限制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖；分散為單個(gè)細(xì)胞后：保證細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)有害代謝產(chǎn)物的及時(shí)排出。強(qiáng)調(diào)一：細(xì)胞貼壁過(guò)程■細(xì)胞貼壁：在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁?！雠囵B(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求：表面光滑、無(wú)毒、易于貼附。胰蛋白酶處理取出組織胚胎或幼齡動(dòng)物器官組織剪碎單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)（貼壁生長(zhǎng)長(zhǎng)成單層細(xì)胞。至有接觸抑制現(xiàn)象）。2、過(guò)程加培養(yǎng)液■當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。強(qiáng)調(diào)二：接觸抑制細(xì)胞的接觸抑制定義：人們通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。胰蛋白酶處理取出組織胚胎或幼齡動(dòng)物器官組織剪碎單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)（貼壁生長(zhǎng)長(zhǎng)成單層細(xì)胞。至有接觸抑制現(xiàn)象）。①原代培養(yǎng)2、過(guò)程原代培養(yǎng)加培養(yǎng)液接觸抑制10代細(xì)胞10~50代分瓶傳代培養(yǎng)胰蛋白酶原代培養(yǎng)無(wú)限傳代（等同于癌細(xì)胞，沒(méi)有接觸抑制）傳代培養(yǎng)

定義：當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞處于接觸抑制后,用胰蛋白酶處理,使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來(lái),然后加入新的培養(yǎng)液,將細(xì)胞分離稀釋,并從原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),這個(gè)過(guò)程稱傳代培養(yǎng).（分瓶培養(yǎng)的過(guò)程）②傳代培養(yǎng)嘗試完成動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境（對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理；添加一定量的抗生素；定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（要與體內(nèi)基本相同）葡萄糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素（合成培養(yǎng)基）+動(dòng)物血清血漿等3、溫度和PH（與動(dòng)物體溫和PH相近）

溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、氣體環(huán)境

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件離體培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)微生物和有毒物質(zhì)沒(méi)有防御能力4.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用:1.蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體2.應(yīng)用于基因工程主要用于作為受體細(xì)胞3.檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性

4.細(xì)胞的生理、藥理、病理研究

培養(yǎng)正?；蚋鞣N病變的細(xì)胞：如用于篩選抗癌藥物課堂反饋練習(xí)：1、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是------（）

A.動(dòng)物細(xì)胞融合B.單克隆抗體C.胚胎移植D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)2、用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞（）

A.容易產(chǎn)生各種變異B具有更強(qiáng)的全能性

C.取材十分方便D分裂增殖的能力強(qiáng)3、下列屬于動(dòng)物細(xì)胞工程中的工具是（）

A.限制性內(nèi)切酶B.DNA連接酶C．胰蛋白酶D．果膠胃蛋白酶4、下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述中，錯(cuò)誤的是 （）A．用于培養(yǎng)的細(xì)胞大多取自胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織B．將所取的組織先用胰蛋白酶等進(jìn)行處理使其分散成單個(gè)細(xì)胞C．在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液D．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培養(yǎng)的細(xì)胞都衰老死亡5、一般來(lái)說(shuō)，動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿足以下條件（）①無(wú)毒的環(huán)境②無(wú)菌的環(huán)境③合成培養(yǎng)基需加血漿④溫度與動(dòng)物體溫相近⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能調(diào)培養(yǎng)液pHA．①②③④⑤⑥B．①②③④C．①③④⑤⑥D(zhuǎn)．①②③④⑥D(zhuǎn)DCDD6、下圖是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過(guò)程示意圖。請(qǐng)據(jù)此圖回答

(1)容器A中放置的是動(dòng)物器官或組織。它一般取自___________。(2)容器A中的動(dòng)物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是__________，然后用

酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開(kāi)來(lái)。這樣做的目的是_______________.(3)培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行。瓶中的培養(yǎng)基成分有_______

___等。在此瓶中培養(yǎng)一段時(shí)間后，有許多細(xì)胞衰老死亡，到這時(shí)的培養(yǎng)稱為_(kāi)__________.(4)為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中，用_____處理，然后配置成___________，再分裝。(5)在C瓶中正常培養(yǎng)了一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全部死亡。原因是_________________________。幼齡動(dòng)物的器官或組織、動(dòng)物胚胎用剪刀剪碎胰蛋白使每個(gè)細(xì)胞能與培養(yǎng)液接觸葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、微量元素和動(dòng)物血清原代培養(yǎng)胰蛋白酶細(xì)胞懸浮液細(xì)胞沒(méi)有發(fā)生癌變植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖培養(yǎng)基性質(zhì)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖、促生長(zhǎng)因子、

動(dòng)物血清培養(yǎng)結(jié)果植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無(wú)病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物1、定義：

動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中.使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎,這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體.3、分類：

胚胎核移植、體細(xì)胞核移植。胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易。動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難2、原理：

動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性卵細(xì)胞黑面母綿羊白面母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂第三只母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過(guò)程融合后的卵細(xì)胞◆注意：克隆動(dòng)物性狀與供體動(dòng)物完全一樣嗎？

◆取供體細(xì)胞傳代培養(yǎng)10代以內(nèi)的細(xì)胞.為什么？◆用的是去核的減數(shù)第二次分裂中期細(xì)胞（MⅡ中期）為什么？◆激活方法：◆激活目的：◆促融方法：電刺激◆胚胎移植至代孕受體內(nèi)

妊娠、分娩體細(xì)胞核移植流程供體：優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)奶牛受體：普通奶牛（卵母細(xì)胞的采集與培養(yǎng)）

1.體積大，易操作。2.含有促使細(xì)胞核表達(dá)全能性的物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)條件。有人說(shuō)它三個(gè)母親，對(duì)嗎？去核卵母細(xì)胞供體細(xì)胞電刺激使兩細(xì)胞融合重組細(xì)胞重組胚胎新個(gè)體代孕母牛胚胎移植卵母細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞的核移植過(guò)程高產(chǎn)奶牛（供體）供體細(xì)胞培養(yǎng)（受體）供卵奶牛四、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景1、加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育2、保護(hù)瀕危物種，增加存活數(shù)量3、克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白4、可以作為異種移植的供體，可以用于組織器官的移植五、體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題胚胎移植－動(dòng)物幼體產(chǎn)出概率＜10％克隆動(dòng)物存在著健康問(wèn)題克隆動(dòng)物的食品安全性問(wèn)題存在爭(zhēng)議2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合1、定義：指用自然或人工方法使兩個(gè)或多個(gè)不同的細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。一、動(dòng)物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜交）◆2.原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核病毒顆粒黏附細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合、形成雜種細(xì)胞意義：細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。人們獲得抗體的傳統(tǒng)方法是?將抗原注入動(dòng)物體,然后從動(dòng)物血清中提取抗體這種方法的缺點(diǎn)是什么?效率低，產(chǎn)量有限，純度低，而且制備的抗體特異性差。怎樣獲得單一類型的抗體？二：動(dòng)物細(xì)胞融合的成功應(yīng)用

——單克隆抗體的制備思考單克隆抗體的制備—極富創(chuàng)造性的方案

米爾斯坦(阿根廷)和科勒(德國(guó))的設(shè)想：將能夠產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞和具有無(wú)限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合在一起，形成