疑難血型鑒定與疑難配血

關(guān)于疑難血型鑒定與疑難配血第1頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三血型----血液中各種成分的遺傳多態(tài)性標(biāo)志----血型包括紅細(xì)胞血型、白細(xì)胞血型、血小板血型、血清蛋白型……等----稀有血型-----按美國稀有血型供者庫規(guī)定，在人群中的頻率<1‰者，稱稀有血型；在人群中的頻率<1/萬者，稱極稀有血型-----我國對稀有血型尚無明確標(biāo)準(zhǔn)，一般認(rèn)為Rh陰性就屬稀有血型。第2頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三疑難血型----疑難血型是一種血型難以檢定或判定的現(xiàn)象----在血型分類中沒有疑難血型，文獻(xiàn)中也查不到疑難血型的定義。----一份樣本的血型檢定是否疑難，除了樣本本身的特殊性外，還與實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，技術(shù)人員水平和經(jīng)驗(yàn)等多種因素有關(guān)。----臨床輸血中，一般只涉及ABO和RhD血型，不涉及其他血型系統(tǒng)的疑難血型。第3頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三ABO血型：根據(jù)紅細(xì)胞膜上有無A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種。A型人血清中含抗B抗體，B型人血清中含抗A抗體，O型人血清中含抗A和抗B抗體，AB型人血清中不含ABO抗體。正定型：采用抗A和抗B試劑血清以凝集實(shí)驗(yàn)來檢定紅細(xì)胞上有無對應(yīng)的A抗原或B抗原。反定型：采用A型試劑紅細(xì)胞和B型試劑紅細(xì)胞檢測血清中有無相應(yīng)的抗A抗體和抗B抗體。同時(shí)從正定型和反定型兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)來檢定樣本的ABO血型。第4頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三O型紅細(xì)胞的作用可以提示抗-H(如孟買型)、某些IgM類不規(guī)則抗體，冷凝素或自身抗體。第5頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三ABO血型檢定方法----玻片法簡單、快速，基本沒有實(shí)驗(yàn)條件的限制----試管法準(zhǔn)確可靠----微板法適用于大批量樣本實(shí)驗(yàn)不同的方法用途不同，實(shí)驗(yàn)條件不同第6頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三玻片法:把混合物均勻涂開，使其覆蓋面積大約20mm×20mm。緩慢連續(xù)傾斜轉(zhuǎn)動(dòng)玻片或紙片1分鐘～5分鐘，觀察結(jié)果。試管法：細(xì)胞的濃度2%-5%、最佳離心力（既不能大也不能小）結(jié)果觀察：上清液有無溶血現(xiàn)象，細(xì)胞扣有無凝集塊。微板法：細(xì)胞的濃度2%-5%、離心力（既不能大也不能?。┙Y(jié)果觀察：上清液有無溶血現(xiàn)象，細(xì)胞扣有無凝集塊。第7頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三用洗滌充分的紅細(xì)胞----可以去除紅細(xì)胞上黏附的蛋白的干擾----可以去除樣本血漿中含對試劑成分反應(yīng)的物質(zhì)。試管方法為經(jīng)典方法離心機(jī)離心力校正。第8頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三疑難血型的特點(diǎn)--------正定型凝集弱于2+或反定型弱于1+（正常凝集3+—4+）----正反定型不一致----

抗-A，B與抗-A/抗-B的凝集強(qiáng)弱不平行或凝集呈mf。第9頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三干擾血型正確檢定的常見因素生理因素----年齡----ABO亞型----先天無抗體----冷凝集素第10頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三實(shí)驗(yàn)技術(shù)原因----樣本混淆----靜脈輸液處采樣----試劑質(zhì)量問題或漏加試劑----實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范第11頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三臨床治療----大量輸液----靜脈輸入高分子藥物

靜脈輸入高分子藥物如甘露醇、右旋糖酐，羥乙基淀粉等，可導(dǎo)致紅細(xì)胞呈錢串狀，干擾結(jié)果判定。----近期輸過異型紅細(xì)胞（包括宮內(nèi)輸血）或異型血漿----異基因造血干細(xì)胞移植

第12頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三疾病原因----白血病或某些其他造血系統(tǒng)惡性疾患，白血病血型“變異”變少不變多，疾病緩解后，血型抗原恢復(fù)。----肝臟疾病、結(jié)核病等血漿蛋白紊亂干擾ABO正定型呈錢串樣。----丙球蛋白過低血癥----真性紅細(xì)胞增多癥、多發(fā)性骨髓瘤等----不規(guī)則抗體----感染

革蘭陰性（G－）菌感染第13頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三第14頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三第15頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三啟動(dòng)疑難血型分析思路推薦方法：三步法參考《輸血免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)》人衛(wèi)社第一步：排除人為因素或操作失誤。首先需要排除在技術(shù)上可能發(fā)生的錯(cuò)誤，規(guī)范地做重復(fù)試驗(yàn)----重新采集血樣----核對試劑、器材

核對試劑----復(fù)檢ABO血型第16頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三第二步：了解臨床資料，分析可能的原因----病人年齡小于1歲或大于60歲嗎？----病人的丙球蛋白濃度減低嗎？----病人的診斷是白血病、腸道阻塞、胃癌、結(jié)腸或直腸癌瘤嗎？----病人做過骨髓移植手術(shù)嗎？----病人是一位經(jīng)產(chǎn)婦嗎？----病人近期輸過血嗎？第17頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三第三步：排除不可能的原因，歸納不能排除的原因，設(shè)計(jì)驗(yàn)證試驗(yàn)。舉例說明紅細(xì)胞抗原減弱或丟失----ABO亞型----正定型ABO抗原減弱紅細(xì)胞額外反應(yīng)----亞型抗體----自身抗體----獲得性B抗原（類B）混合凝集（mf）第18頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三紅細(xì)胞抗原減弱或丟失----ABO亞型實(shí)驗(yàn)結(jié)果：正定型與反定型不一致，正定型被檢紅細(xì)胞凝集弱解決辦法----加抗-AB、抗A1、抗-H（抗-AB、-H與抗-A或抗-B的凝集強(qiáng)弱不一致）第19頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三第20頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三第21頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三----吸收/放散試驗(yàn)----高效價(jià)的人源血清----血型物質(zhì)檢測----DNA鑒定亞型統(tǒng)計(jì)？第22頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三2.正定型ABO抗原減弱實(shí)驗(yàn)結(jié)果：正定型與反定型不一致，或正定型被檢紅細(xì)胞凝集弱，或正定型呈mf樣。提示：臨床診斷白血病或其他造血系統(tǒng)惡性疾患（如MDS），一般反定型不受干擾，（不會(huì)增強(qiáng)或出現(xiàn)額外反應(yīng)）偶見RhD抗原減弱者。一般病情緩解后血型抗原強(qiáng)度恢復(fù)第23頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三解決辦法----抗原-抗體增強(qiáng)技術(shù)（4℃孵育1小時(shí)替代離心看結(jié)果）-----加抗-AB----吸收/放散試驗(yàn)----血型物質(zhì)檢測----DNA鑒定與亞型的區(qū)別第24頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三第25頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三紅細(xì)胞額外反應(yīng)1.亞型抗體實(shí)驗(yàn)結(jié)果：抗-Aw+，抗-B0，AC2+，BC4+，OC0，正定型被檢紅細(xì)胞凝集弱解決辦法----加抗-AB、抗A1、抗-H----吸收/放散試驗(yàn)----血型物質(zhì)檢測----DNA鑒定第26頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三第27頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三2.不規(guī)則抗體實(shí)驗(yàn)結(jié)果：抗-A4+，抗-B0，AC0，BC3+，OC2+，臨床提示：有輸血史或妊娠史解決辦法：----加-H和抗-AB----抗體篩選與鑒定第28頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三第29頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三3.自身抗體實(shí)驗(yàn)結(jié)果：抗-A+，抗-B+，AC+，BC+，OC+，直抗+。臨床提示：AIHA，自身紅細(xì)胞被自身抗體致敏后在含蛋白的ABO定型血清中可能發(fā)生非特異性凝集解決辦法：----37℃鹽水洗滌紅細(xì)胞至直抗陰性后檢定血型。----紅細(xì)胞經(jīng)甘氨酸/HCl或二磷酸氯喹放散至直抗陰性后檢定血型。第30頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三2.紅細(xì)胞額外反應(yīng)----獲得性B抗原（類B）臨床提示：細(xì)菌感染（尤其是腸道細(xì)菌感染），以前為O型或A型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：解決方法----用酸化（pH6.0）抗-B檢測（無凝集）----吸收放散實(shí)驗(yàn)，吸收抗-B的能力弱，區(qū)別于亞型*臨床追蹤，感染控制后“類B”現(xiàn)象消失第31頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三第32頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三混合凝集（mf）混合凝集（mf）：部分紅細(xì)胞凝集（大凝集塊）部分紅細(xì)胞均勻分布（背景渾濁）----近期輸異型血----造血干細(xì)胞移植第33頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三ABO血型不同的造血干細(xì)胞移植后，如果植入存活，受者逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)楣┱哐偷倪^程中，可能呈嵌合體狀態(tài)。如果供者O型，受者非O型，受者的A或B抗原逐漸減弱，抗體逐漸被檢出。是移植物存活的指標(biāo)之一。第34頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三三個(gè)月內(nèi)輸異型血，一般直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAT）陽性血型鑒定：毛細(xì)管離心法（分離年輕和衰老紅細(xì)胞）DNA鑒定（供者白細(xì)胞在受者外周血中存活期短，一般不干擾受者DNA鑒定）第35頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三RhD誤定----D抗原陽性誤定陰性，D抗原陰性誤定陽性----特例弱D----D抗原遮斷

第36頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三解決疑難血型攻略采用最經(jīng)典的試管方法用洗滌充分的紅細(xì)胞制備懸液增加高效價(jià)人源抗血清檢測增加抗-AB、抗-H和抗A1檢測吸收放散實(shí)驗(yàn)DNA檢測直抗試驗(yàn)*。第37頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三血型檢定，抗體篩查和交叉配血三步也是確保安全有效輸血的三關(guān)，交叉配血是最后一關(guān)，也是“三關(guān)”中最重要的一關(guān)。只要交叉配血真正相合（相容），將血液輸給患者才是安全的。第38頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三主側(cè)配血----患者血清與供者紅細(xì)胞配血次側(cè)配血----供者血清與患者紅細(xì)胞配血----全血要求交叉配血----血漿則只要求ABO同型輸注。----不含血漿的紅細(xì)胞只要求主側(cè)配血第39頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三一般情況下，只要ABO、RhD血型檢定正確供/受者ABO、RhD同型配血，多數(shù)情況是相合的如果不相合，則視為“疑難配血”一般只有配血相合，才能輸血配血不相合，不能輸血特殊情況例外第40頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三交叉配血的方法聚凝胺配血？抗球蛋白試劑配血？卡式配血？第41頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三AABB推薦方法TheAntiglobulinTestOtherMethodstoDetectAntigen-AntibodyReactionsSolid-PhaseRedCellAdherenceTestsColumnAgglutinationTechnologyEnzyme-LinkedImmunosorbentAssay第42頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三

《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第二篇臨床血液學(xué)檢驗(yàn)第六章血型血清學(xué)檢查p246-271第七節(jié)交叉配血試驗(yàn)p262一、交叉配血方法p262-264（一）鹽水介質(zhì)配血法（二）酶技術(shù)配血法（三）抗人球蛋白配血法(四)LISS配血法(五)微柱凝膠卡配血法詳見本章第四節(jié)第六部分。第四節(jié)血清學(xué)常用檢查六、凝聚膠試驗(yàn)P258第八節(jié)微柱凝膠試驗(yàn)可用于交叉配血p265第43頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三抗球蛋白試驗(yàn)(也成Coombs試驗(yàn)），它是以抗人球蛋白試劑作為連接橋，使不完全抗體致敏的紅細(xì)胞連接并發(fā)生凝集。第44頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三微柱凝膠實(shí)驗(yàn)（簡稱MCGT）1986年法國的YvesLapierre首先發(fā)明此方法,1994年獲美國FDA批準(zhǔn)使用----凝膠過濾技術(shù)和免疫學(xué)的產(chǎn)物----是抗人球蛋白試驗(yàn)的技術(shù)延伸原理：一定濃度的凝膠如篩子，把產(chǎn)生凝集的細(xì)胞團(tuán)塊阻擋于凝膠頂部，沒有產(chǎn)生凝集的單個(gè)細(xì)胞則能夠通過離心沉降于微管底部。第45頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三微柱凝膠實(shí)驗(yàn)

4+ 3+

2+

1+

+/- - 溶血雙群第46頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三；陽性陰性第47頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三微管凝膠檢測技術(shù)的關(guān)鍵是凝膠，通過凝膠的濃度來控制凝膠間隙的大小；凝膠試劑中已經(jīng)加好了抗球蛋白，從而簡化了操作過程，只需加入樣本即可；高敏感性、高特異性和可重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn)；假陰性？假陽性？質(zhì)量的可靠性?LISS的應(yīng)用？第48頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三聚凝胺是一種由四個(gè)銨聚合而成的高陽離子聚合體。紅細(xì)胞血型抗原與相應(yīng)的抗體在低離子介質(zhì)中快速孵育致敏后，加入帶正電荷的聚凝胺大分子聚合物后，中和紅細(xì)胞表面唾液酸所帶的負(fù)電荷，減弱紅細(xì)胞間的靜電斥力，縮短紅細(xì)胞間的距離，促使紅細(xì)胞凝集或聚集。它可使正常紅細(xì)胞聚集，而在加入檸檬酸鹽時(shí)又可使聚集的紅細(xì)胞散開。當(dāng)紅細(xì)胞上有IgG抗體結(jié)合時(shí)，聚凝胺所造成的凝集是不可逆的，加入檸檬酸鹽時(shí)不會(huì)散開，呈現(xiàn)出肉眼可見的凝集現(xiàn)象。第49頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三凝聚胺不是一個(gè)特異性的試驗(yàn),如果凝聚胺結(jié)果陽性，必須用抗球蛋白試驗(yàn)做確認(rèn)。用凝聚胺試驗(yàn)技術(shù)交叉配血，出現(xiàn)不配合時(shí)，要用抗人球蛋白試驗(yàn)重復(fù)。結(jié)果不一致，以抗人球蛋白試驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)。參考文獻(xiàn)：中國輸血叢書《輸血免疫血液學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)》，人民衛(wèi)生出版社，2011，：75-76第50頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三任何一種實(shí)驗(yàn)方法都不可能百分之百準(zhǔn)確無誤，都有假陽性或假陰性。假陰性可能導(dǎo)致患者被輸入并非真正相合的紅細(xì)胞，從而導(dǎo)致患者發(fā)生免疫學(xué)反應(yīng)，（急性或遲發(fā)生性溶血性輸血反應(yīng)，或紅細(xì)胞輸進(jìn)體內(nèi)后壽命縮短）。假陽性則造成人力和資源的浪費(fèi)。第51頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三聚凝胺試劑漏檢抗體舉例骨髓瘤患者有多次輸血史，因抗篩陽性送檢（抗球蛋白卡法）。血型鑒定：

B型,CcDEe直抗：1+抗篩結(jié)果：

抗體鑒定是-Jka抗體，提供Jka抗原陰性血液。第52頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三抗球蛋白試劑漏檢抗體舉例溶血性貧血患者有多次輸血史，因抗篩（卡式）陰性，凝聚胺配血不合送檢。血型鑒定：

O型,CcDEE直抗：1+

抗篩Ⅰ

Ⅱ

Ⅲ

陰性對照陽性對照鹽水00000poly2+02+03+AHG00003+MGT00003+在聚凝胺介質(zhì)中試驗(yàn)反應(yīng)結(jié)果符合抗-e格局抗體鑒定證明是-e，提供e抗原陰性血液。第53頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三不同的情況采取不同的檢測技術(shù)----常規(guī)----急診----輸血無效----輸血反應(yīng)建立適合本實(shí)驗(yàn)室的免疫血液學(xué)檢測技術(shù)----醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室----血站實(shí)驗(yàn)室第54頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三鹽水法：IgM抗體、ABO血型的復(fù)核；凝聚胺試驗(yàn)和抗人球蛋白試驗(yàn)：IgG抗體篩查抗人球蛋白試驗(yàn)仍然不可替代，遇到異常的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，應(yīng)以抗人球蛋白法為準(zhǔn)。第55頁，講稿共62頁，2023年5月2日，星期三主側(cè)配血不相合的原因

1.患者血清的原因----針對供者紅細(xì)胞的同種抗體。----自身抗體----冷凝集素：實(shí)驗(yàn)