微生物檢驗(yàn)基本要求

關(guān)于微生物檢驗(yàn)基本要求第1頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三內(nèi)容微生物學(xué)基本知識(shí)微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量保證微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的生物安全第2頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三微生物基本知識(shí)微生物的概念微生物的種類微生物的特點(diǎn)微生物學(xué)的主要分支學(xué)科第3頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三微生物基本知識(shí)◆

微生物的概念

是一群形體微小、結(jié)構(gòu)簡單的低等生物的統(tǒng)稱。需借助光鏡或顯微鏡測(cè)量單位為微米或納米第4頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三微生物基本知識(shí)微生物的種類§真核細(xì)胞型：(eucaryotae)

真菌（霉菌、酵母、蕈類)、藻類§原核細(xì)胞型：

(procaryotae)

細(xì)菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次氏體、螺旋體§

非細(xì)胞類：（nocell)

病毒、類病毒、朊病毒等第5頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三微生物的相對(duì)大小可見范圍肉眼光學(xué)顯微鏡電鏡真核細(xì)胞型原核細(xì)胞型病毒第6頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三◆微生物的特點(diǎn)體積小，面積大吸收多，轉(zhuǎn)化快生長旺，繁殖快適應(yīng)強(qiáng)，變異頻分布廣，種類多微生物基本知識(shí)第7頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三

體積小面積大微生物的個(gè)體極其微小必須借助顯微鏡放大幾倍、幾百倍、上千倍，乃至數(shù)萬倍才能看清。表示微生物大小的單位是微米（1米＝106微米）或納米（1米＝109納米）。如：桿菌的寬度是0.5微米，80個(gè)桿菌“肩并肩”地排列成橫隊(duì)，也只有一根頭發(fā)絲的寬度。桿菌的長度約2微米，故1500個(gè)桿菌頭尾銜接起來僅有一顆芝麻長。第8頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三吸收多轉(zhuǎn)化快如大腸桿菌在合適條件下，每小時(shí)可以消耗相當(dāng)于自身重量2000倍的糖而人要完成這樣一個(gè)規(guī)模則需要40年之久第9頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三生長旺繁殖快大腸桿菌(E.coli)§

37℃培養(yǎng)在牛奶中，12.5min即可分裂一次；一般培養(yǎng)液的菌濃度為108-109個(gè)/ml§如各方面的條件都合適，大腸桿菌每12.5-20（有說20-30）分鐘分裂一次按20分鐘來算，則1晝夜分裂72次，那么1個(gè)菌體就會(huì)產(chǎn)生272（即4722366500萬億）個(gè)，重達(dá)4722噸第10頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三

適應(yīng)強(qiáng)變異頻耐熱：在250℃-300℃的高溫條件下正常生長

耐寒：多數(shù)細(xì)菌能耐0℃到－196℃的低溫

耐鹽：嗜鹽細(xì)菌甚至能在飽和鹽水中正常生活

耐干：產(chǎn)芽孢細(xì)菌和真菌孢子在干燥條件下能保藏幾十年、幾百年甚至上千年

耐酸耐堿耐壓:

突變頻率一般為10-5-10-10第11頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三

分布廣種類多§在地球上幾乎無處不有，無孔不入

85公里的高空、11公里深的海底、2000米深的地層、近100℃（甚至300℃）的溫泉、零下250℃的環(huán)境下，均有微生物存在§微生物種類繁多

迄今為止，微生物約有10萬種，估計(jì)目前已知的種只占地球上實(shí)際存在的微生物總數(shù)的20%第12頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三微生物學(xué)的主要分支學(xué)科第13頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三一、微生物學(xué)檢驗(yàn)的目的

◆臨床微生物檢驗(yàn)：為診斷提供病原學(xué)依據(jù)為治療提供參考用藥的信息為醫(yī)院感染提供病原微生物及其耐藥性動(dòng)態(tài)信息改進(jìn)或更新臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的方法

◆

衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)：判斷水、空氣、食品、日用品以及各類公共場(chǎng)所的衛(wèi)生狀況

指標(biāo)性微生物微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)第14頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三

指標(biāo)性微生物

指標(biāo)菌可以歸納為以下三種類型：◆一般衛(wèi)生狀況指標(biāo)菌最常用的是菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)意義：評(píng)價(jià)被檢樣品的一般衛(wèi)生質(zhì)量、污染程度以及安全性◆糞便污染指標(biāo)菌主要指大腸菌群，其他還有腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、噬菌體以及脊髓灰質(zhì)炎病毒等意義：標(biāo)志著檢品受過人、禽畜糞便的污染，同時(shí)也可表明有腸道致病菌存在的可能第15頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三指標(biāo)性微生物◆致病菌（控制菌）包括某些特定環(huán)境不能檢出的菌類食品、化妝品或藥品等樣品中規(guī)定一些不得檢出的致病菌例如金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、破傷風(fēng)芽胞桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、副溶血性弧菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、空腸彎曲菌、溶血性鏈球菌、肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、蠟樣芽胞桿菌等第16頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)一般衛(wèi)生狀況指標(biāo)菌檢驗(yàn)

菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌糞便污染指標(biāo)菌檢驗(yàn)

大腸菌群、類大腸菌群控制菌檢驗(yàn)沙門氏菌、志賀氏菌、致瀉大腸埃希氏菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、蠟樣芽胞桿菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、空腸彎曲菌、肉毒梭菌及肉毒毒素、產(chǎn)氣莢膜梭菌、椰毒假單胞菌酵米面亞種、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、變形桿菌

第17頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三化妝品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)一般衛(wèi)生狀況指標(biāo)菌檢驗(yàn)

菌落總數(shù)檢測(cè)霉菌和酵母菌檢測(cè)糞便污染指標(biāo)菌檢驗(yàn)糞大腸菌群檢驗(yàn)控制菌檢驗(yàn)綠膿桿菌檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)第18頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)三、標(biāo)本采集與處理不同的樣品采集、保存、運(yùn)送的要求都是不同的第19頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三標(biāo)本采集原則§無菌操作

無菌采集、采樣用具、容器必須要經(jīng)過滅菌處理

早期安全足量§采樣前、后都應(yīng)及時(shí)做好標(biāo)記采集的樣品要有代表性§采樣后應(yīng)及時(shí)將樣品送到微生物檢驗(yàn)室第20頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三標(biāo)本的運(yùn)送標(biāo)本采集后最好及時(shí)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室若不能，應(yīng)儲(chǔ)存在合適的一定環(huán)境條件

細(xì)菌:病毒:感染性樣本應(yīng)注意安全防護(hù)運(yùn)送過程防止泄漏和破碎第21頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三微生物檢驗(yàn)技術(shù)四、微生物學(xué)檢查形態(tài)學(xué)檢查人工培養(yǎng):接種分離純化培養(yǎng)技術(shù)分離鑒定及增菌培養(yǎng)毒力鑒定及抗菌藥物敏感試驗(yàn)生化試驗(yàn)免疫檢測(cè)技術(shù)：抗原檢測(cè)抗體檢測(cè)核酸檢測(cè)技術(shù)：核酸分子雜交PCR

動(dòng)物試驗(yàn)

自動(dòng)化技術(shù)第22頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三形態(tài)學(xué)檢查

直接鏡檢顯微鏡觀察：光學(xué)顯微鏡電鏡第23頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三人工培養(yǎng)分離培養(yǎng)與鑒定：

革蘭氏染色陰性成魚群狀排列的弧菌

霍亂弧菌接種技術(shù)分離純化技術(shù)培養(yǎng)技術(shù)第24頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三霍亂分離培養(yǎng)分離用的培養(yǎng)基有強(qiáng)、弱2種選擇培養(yǎng)基弱選擇培養(yǎng)基：堿性瓊脂和堿性膽鹽瓊脂強(qiáng)選擇培養(yǎng)基：常用的有慶大霉素瓊脂、4號(hào)瓊脂和TCBS瓊脂等現(xiàn)多采用堿性蛋白胨水增菌，再用強(qiáng)選擇培養(yǎng)基進(jìn)行分離第25頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三生化試驗(yàn)霍亂紅試驗(yàn)

陽性霍亂弧菌氧化酶試驗(yàn)

粘絲試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)第26頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三免疫檢測(cè)技術(shù)抗血清凝集技術(shù)乳膠凝集實(shí)驗(yàn)熒光抗體檢測(cè)技術(shù)協(xié)同凝集試驗(yàn)（COA）酶聯(lián)免疫測(cè)試技術(shù)第27頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三微生物檢驗(yàn)技術(shù)

霍亂檢驗(yàn)程序第28頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三分子生物學(xué)檢測(cè)核酸探針雜交技術(shù)PCR技術(shù):PCR&RT-PCRReal-timePCRQβ復(fù)制酶法連續(xù)擴(kuò)增反應(yīng)法（Lar）轉(zhuǎn)錄放大系統(tǒng)（TAS/3SR/NASBATM）放大信號(hào)檢測(cè)法

……第29頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三分子生物學(xué)技術(shù)在病原菌檢測(cè)上的應(yīng)用

細(xì)菌:沙門氏菌李斯特桿菌葡萄球菌假單胞菌屬大腸桿菌志賀氏菌耶爾森氏菌彎曲桿菌弧菌病毒:流感&禽流感肝炎SARSNorovirusAdenovirusEnterovirusDenguevirusRinovirus……第30頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三

自動(dòng)化技術(shù)微生物自動(dòng)鑒定商品名稱分析手段

生產(chǎn)商AutomicrobicBiochemicaltestsBioMerieuxVitek,Hazelwood,MOBactometerConductanceBioMerieuxVitek,Hazelwood,MOATBCarbonassimilationBioMerieuxVitekHazelwood,MOVIDASAutomatedEIAcBioMerieuxVitekHazelwood,MOMISFattyacidprofileMicrobialIDNewark,DEMaalthusdConductanceRadiometerAmericaWestlake,OHSensititreFluorogenicdnzymeReactionsRadiometerAmericaWestlake,OHBiologCarbonutilizationBiologHayward,CAWalkAwayBiochemicalBaxterDiagnosticsW.Sacramento,CAAutoSCANBiochemicalBaxterDiagnosticsW.Sacramento,CAALADINBiochemicalAnalytabProductsPlainview,NYUniSceptBiochemicalAnalytabProductsPlainview,NYAutoSceptorBiochemicalBectonDickinsonCockeysville,MD第31頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證的措施室內(nèi)質(zhì)控室間質(zhì)評(píng)微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證的目標(biāo)

可靠性可重復(fù)性實(shí)際效果及時(shí)性微生物檢驗(yàn)中的質(zhì)量保證

及實(shí)驗(yàn)室管理第32頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三過程控制文件微生物學(xué)檢驗(yàn)過程試驗(yàn)過程控制樣品采集樣品標(biāo)記樣品運(yùn)輸培養(yǎng)基染料儀器樣品接收和登記檢驗(yàn)分析研究準(zhǔn)備相關(guān)檢驗(yàn)報(bào)告試劑熟練程度第33頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制試驗(yàn)前試驗(yàn)中試驗(yàn)后正確的病人正確的取樣正確的條件適當(dāng)?shù)膬x器合適的試驗(yàn)材料正確的方法正確的資料合適的時(shí)間第34頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三微生物培養(yǎng)基的質(zhì)量控制檢測(cè)所有培養(yǎng)基的性能自行配制：所有批次商業(yè)制備：只檢測(cè)新批號(hào)第35頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三培養(yǎng)基質(zhì)量要求微生物污染生長特性生長率選擇性生理生化特性選擇性和特異性外觀、色澤和均一性瓊脂凝膠的硬度水份含量pH緩沖能力

對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量控制的主要內(nèi)容第36頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三培養(yǎng)基的質(zhì)量控制檢查

pH，無菌性，支持生長的能力，培養(yǎng)基的選擇或抑制特性(目標(biāo)微生物生長，非目標(biāo)微生物不生長)，生化反應(yīng)，瓊脂凝膠的硬度，水份含量，外觀和色澤的均一性檢測(cè)頻率檢測(cè)各個(gè)批次或各批號(hào)將結(jié)果記錄在培養(yǎng)基質(zhì)量控制表格

含人血的血平板不適于微生物檢測(cè)第37頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三配制培養(yǎng)基時(shí)的質(zhì)量控制

嚴(yán)格按培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)基配制操作程序進(jìn)行配制

每批培養(yǎng)基均應(yīng)有配制記錄如名稱、配制量（各種成分用量）、配制者、配制日期、有效期以及性能和無菌試驗(yàn)無菌實(shí)驗(yàn):第38頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三配制培養(yǎng)基時(shí)的質(zhì)量控制性能試驗(yàn)培養(yǎng)基的儲(chǔ)存應(yīng)放在冷暗、干燥處

含有血液和其他有機(jī)添加劑抗菌素的培養(yǎng)基要儲(chǔ)存在冰箱里第39頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三培養(yǎng)基的貯存

培養(yǎng)基種類保存條件保存時(shí)間三角瓶（棉塞）培養(yǎng)基

室溫一周三角瓶（螺旋蓋）培養(yǎng)基室溫三周平板培養(yǎng)基室溫當(dāng)天平板培養(yǎng)基（裝袋密封）4℃

一周第40頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三培養(yǎng)基使用中應(yīng)避免的問題污染了的培養(yǎng)基已失水的培養(yǎng)基使用過期的培養(yǎng)基第41頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三培養(yǎng)基配制記錄的快速提示

實(shí)驗(yàn)室制備的所有培養(yǎng)基都必須記錄：

配制日期和配制人培養(yǎng)名稱，批號(hào)，培養(yǎng)基粉名稱所配平板、試管、瓶的數(shù)量分裝的批號(hào)顏色、一致性、外表用于質(zhì)量控制的平板數(shù)量24/48小時(shí)無菌實(shí)驗(yàn)生長實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基的pH第42頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三我國培養(yǎng)基相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)1.YYT0557-2005營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2.YYT0578-2005沙門、志賀菌屬瓊脂培養(yǎng)基3.SNT1538.1-2005培養(yǎng)基制定指南第一部分：實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則4.SNT1538.1-2007培養(yǎng)基制定指南第2部分:培養(yǎng)基性能測(cè)試實(shí)用指南第43頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三M-H瓊脂板的質(zhì)量控制無菌（每批平板隨機(jī)選擇一個(gè)樣本作無菌試驗(yàn)，培養(yǎng)48-72h）厚度：4mm，且厚度必須均勻（9cm平板傾注瓊脂量25-30ml；16cm平板需60ml左右）調(diào)節(jié)pH到7.2-7.4（pH過低---氨基糖苷類，大環(huán)內(nèi)酯類失效，而青霉素活力增強(qiáng)。）胸腺嘧啶核苷或胸腺嘧啶的影響：含過量的胸腺嘧啶核苷或胸腺嘧啶的培養(yǎng)基可能逆轉(zhuǎn)磺胺類甲氧芐氨嘧啶的抑菌效應(yīng)，使抑菌圈模糊變小，甚至消失。用TMP-SMZ紙片可測(cè)定培養(yǎng)基中的磺胺嘧啶得含量，當(dāng)抑菌圈清晰、直徑≥20mm，說明該培養(yǎng)及合格第44頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三二價(jià)陽離子含量變化的影響Ca++、Mg++：影響氨基糖苷類、四環(huán)素的抑菌圈Zn++：影響碳頭孢烯類平板表面應(yīng)干燥：使用前干燥平板平板有效期為5天使用含血的M-H培養(yǎng)基特別注意項(xiàng)M-H瓊脂板的質(zhì)量控制第45頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三診斷血清的質(zhì)量控制注明收到的日期，如為凍干制品，還應(yīng)注明配成水溶液的日期使用前檢查外觀應(yīng)清澈，如出現(xiàn)混濁則表示已被雜菌污染使用時(shí)應(yīng)注意各種診斷血清的有效期和效價(jià)每月用標(biāo)準(zhǔn)菌株試驗(yàn)其敏感性和特異性第46頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三

染色液的質(zhì)量控制染色液配制后，必須用適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)菌株作陽性及陰性對(duì)照試驗(yàn)在使用期內(nèi)每隔一段時(shí)間進(jìn)行監(jiān)測(cè)其監(jiān)控頻率隨染色液的穩(wěn)定性和使用頻率而定

第47頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三染液的質(zhì)量控制革蘭氏染料質(zhì)量控制使用革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌株析出晶體檢測(cè)污染細(xì)菌檢測(cè)定期參加能力驗(yàn)證進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)比對(duì)

其他染料抗酸性染色真菌的KOH染色吖啶黃腸道寄生蟲染色瘧疾涂片染色

第48頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三染料和試劑準(zhǔn)備標(biāo)簽內(nèi)容名稱濃度制備日期使用時(shí)間過期時(shí)間/保質(zhì)期制備者

第49頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三質(zhì)量控制菌株什么是質(zhì)控菌株？在染液和培養(yǎng)基中有預(yù)期反應(yīng)的已知菌株菌株的來源？ATCCAmericanTypeCultureCollection美國菌種保藏中心NTCC NationalTypeCultureCollection(UK)國際菌種保藏中心(英國)CIPPasteurInstituteCollection(France)巴斯德保藏中心(法國）質(zhì)控菌株如何使用？確保培養(yǎng)基，試劑和用品有預(yù)期的效能

設(shè)置陰性和陽性對(duì)照株

第50頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三質(zhì)控菌株的保存儲(chǔ)備檢測(cè)所有培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的質(zhì)控菌株

例如：大腸桿菌(ATCC#25922)–麥康凱培養(yǎng)基或EMB，藥敏試驗(yàn)金黃色葡萄球菌(ATCC#25923)–血瓊脂，甘露醇高鹽瓊脂培養(yǎng)基，藥敏試驗(yàn)淋病奈瑟氏菌(ATCC#49226）–巧克力培養(yǎng)基，T-M培養(yǎng)基所需要的其他質(zhì)控菌株第51頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三質(zhì)控菌株的使用在每批培養(yǎng)基及新的藥敏片使用時(shí)同時(shí)做質(zhì)控，標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑菌環(huán)或MIC值在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)E.coliATCC25922S.aureusATCC25923P.aeruginosaATCC27853根據(jù)抑菌環(huán)直徑分析變化根據(jù)你的檢測(cè)使用不同的標(biāo)準(zhǔn)株（ATCC,IP或其他）第52頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三藥敏試驗(yàn)常用質(zhì)控菌株常規(guī)藥敏標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸埃希菌 ATCC25922金黃色葡萄球菌 ATCC25923銅綠假單胞菌 ATCC27853流感嗜血桿菌 ATCC49247 ATCC49766肺炎鏈球菌 ATCC49619β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)菌株

肺炎克雷伯菌ATCC700603，大腸埃希菌ATCC35218培養(yǎng)基磺胺嘧啶測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)菌株糞腸球菌ATCC29212第53頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三儀器設(shè)備-微生物學(xué)監(jiān)控溫度培養(yǎng)箱冰箱冷凍柜 進(jìn)行功能檢測(cè)移液器高壓鍋酸度計(jì)秤重保存記錄第54頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三顯微鏡保持鏡頭清潔保證至少一個(gè)油鏡(X100)使用轉(zhuǎn)扭調(diào)節(jié)鏡頭非油鏡不要浸入油中

移動(dòng)樣本時(shí)不能使樣本高于鏡頭確保照明系統(tǒng)

第55頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三消毒與滅菌培養(yǎng)基試劑材料廢物滅菌（Sterilization）：殺滅物體上所有的微生物（包括病原體和非病原體的繁殖體和芽胞）的方法消毒(Disinfection）：殺滅病原微生物的方法第56頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三兩階段滅菌控制過程控制化學(xué)指示劑生物指示劑滅菌產(chǎn)品控制生長實(shí)驗(yàn)(生物驗(yàn)證）第57頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三滅菌指示物高壓濕熱滅菌指示膠帶（121℃，132℃）干熱滅菌指示膠帶環(huán)氧乙烷滅菌指示膠帶γ射線滅菌指示標(biāo)簽生物指示劑第58頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三滅菌指示物化學(xué)指示物

僅指示滅菌溫度，但不涉及滅菌時(shí)間和壓力生物學(xué)指示物指示滅菌需要的溫度、時(shí)間和壓力注意：指示物在以下情況下不保證滅菌的效果：高壓鍋內(nèi)東西放的過多；培養(yǎng)液體積過大；滅菌后的生物驗(yàn)證試驗(yàn)十分重要第59頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三藥敏實(shí)驗(yàn)為選擇合適的抗生素進(jìn)行治療提供依據(jù)監(jiān)測(cè)耐藥趨勢(shì)第60頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三體外藥敏實(shí)驗(yàn)無明顯的生長有明顯的生長敏感不敏感藥物目標(biāo)菌肉湯稀釋法第61頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三藥敏試驗(yàn)中可能出現(xiàn)的錯(cuò)誤培養(yǎng)基不好——太陳舊，厚度，pH過期或保存不當(dāng)?shù)乃幤钚越档湾e(cuò)誤的接種——細(xì)菌接種量太多或太少錯(cuò)誤的孵育——溫度太熱/太冷，時(shí)間太長/太短錯(cuò)誤的儀器設(shè)備——讀錯(cuò)區(qū)帶錯(cuò)誤的解釋——曲解區(qū)帶第62頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三

藥敏檢測(cè)

孵育條件、溫度和時(shí)間腸桿菌科：35℃±2℃，空氣，16-18h葡萄球菌屬：33-35℃,空氣，16-18h，苯唑西林和萬古霉素需24h觀察腸球菌屬：35℃±2℃，空氣，16-18h， 萬古霉素需24h觀察嗜血桿菌屬：35℃±2℃，5%CO216-18h鏈球菌屬：35℃±2℃，5%CO2，

20-24h第63頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三藥敏實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量控制質(zhì)控菌株必須有可靠的來源

使用特定的質(zhì)控菌株去檢測(cè)不同的藥物-目標(biāo)菌組合

按照廠家的說明儲(chǔ)存抗生素試劑

第64頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三藥敏試驗(yàn)質(zhì)量控制培養(yǎng)基抗生素菌液培養(yǎng)箱菌種藥片M-H培養(yǎng)基保存溫度McFarland0.5(108bacteria/ml)溫度氣壓 保存條件，使用要求保存條件（溫度、干燥）ATCC標(biāo)準(zhǔn)株，4mm厚，pH-20oC以下分光光度計(jì)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的溫度計(jì)氣壓計(jì)標(biāo)準(zhǔn)菌株、待測(cè)菌株第65頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三紙片分配器優(yōu)點(diǎn)實(shí)用，快速

提高了可重復(fù)性

缺點(diǎn)增加污染的機(jī)會(huì)降低了人員判斷技能等保存使用之后，放回冷藏箱，朝上放置。

第66頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三操作者的熟練度常規(guī)的能力驗(yàn)證

室內(nèi)實(shí)驗(yàn)程序完全按照SOP進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作第67頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三質(zhì)量控制：免疫學(xué)-血清學(xué)針對(duì)抗原-抗體檢測(cè)試驗(yàn)每天至少有一次試驗(yàn)帶上陽性和陰性對(duì)照。包括弱陽性對(duì)照

所有孵箱，搖床和離心機(jī)的功能監(jiān)控

第68頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三質(zhì)量控制：分子診斷樣品采集，運(yùn)輸和處理保證所有上述過程中核酸的完整性

控制污染在無DNA區(qū)域，配制試劑后進(jìn)入樣本處理區(qū)，再進(jìn)入擴(kuò)增和檢測(cè)區(qū)；并保持這一單向流程

陽性和陰性對(duì)照參考：感染性疾病的分子診斷方法第69頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三

目的：

存活，不丟失，不污染

防止優(yōu)良性狀喪失

隨時(shí)為生產(chǎn)、科研提供優(yōu)良菌種

原理：

選用優(yōu)良的純種（最好是休眠體，如分生孢子、芽胞等）

創(chuàng)造降低微生物代謝活動(dòng)強(qiáng)度

生長繁殖受抑制

難以發(fā)生突變的環(huán)境條件

其環(huán)境要素是干燥、低溫、缺氧、缺營養(yǎng)以及添加保護(hù)劑等

菌種保藏：第70頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三

菌

連續(xù)在培養(yǎng)基上（內(nèi)）移種

種

生活態(tài)

傳代培養(yǎng)保藏法

連續(xù)在活宿主上（內(nèi)）移種

保

固體斜面

藏

濕法半固體瓊脂柱

方

休眠態(tài)

液體介質(zhì)（蒸餾水、糖液、其它溶液）

法

干法藏在玻璃管內(nèi)

吸附在合適的載體上菌種保藏的方法第71頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三干法保藏菌種的方法

滴入小試管（在放入大試管干燥器中）藏在玻璃管內(nèi)封入安培瓶菌液直接真空干燥法（L-干燥法）冷凍真空干燥法細(xì)粒狀載體（土壤、沙粒、土壤+沙粒）球塊狀載體（硅膠、瓷球）合適的載體有機(jī)基質(zhì)（曲料、麥粒）

薄片狀載體濾紙片明膠小片（滴在蠟紙板上干燥而成）血清蛋白小片（乙烯薄膜）

第72頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三幾種常用菌種保藏方法的比較方法名稱主要措施適宜菌種保藏期評(píng)價(jià)

冰箱保藏法（斜面）冰箱保藏法（半固體）石蠟油封藏法*沙土保藏法冷凍干燥法低溫低溫低溫、缺氧干燥、無營養(yǎng)干燥、無氧、低溫、有保護(hù)劑各大類細(xì)菌、酵母菌各大類**產(chǎn)孢子微生物各大類3-6月6-12月1-2年1-10年5-15年以上簡便簡便簡便簡便有效簡便有效第73頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三菌種保藏機(jī)構(gòu)的任務(wù)：廣泛收集科研和生產(chǎn)菌種、菌株，并加以妥善保管，使之達(dá)到不死、不衰、不亂以及便于研究、交換和使用的目的。菌種保藏機(jī)構(gòu)：

中國微生物菌種保藏委員會(huì)(CCCCM)

美國的典型菌種保藏中心(ATCC)

英國國家典型菌種保藏所（NCTC）法國里昂巴斯德研究所（IPL）國內(nèi)外菌種保藏機(jī)構(gòu)：第74頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三微生物檢驗(yàn)與生物安全實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)感染性廢棄物的處理第75頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三實(shí)驗(yàn)室分級(jí)依據(jù)實(shí)驗(yàn)室分級(jí)處理對(duì)象危險(xiǎn)等級(jí)BSL-1ABSL-1對(duì)人體和環(huán)境危害較低，不會(huì)引發(fā)健康成人疾病Ⅰ級(jí)BSL-2ABSL-2對(duì)人體和環(huán)境有中等危害或具有潛在危險(xiǎn)的致病因子Ⅱ級(jí)BSL-3ABSL-3主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致命疾病的致病因子。通常有預(yù)防治療措施Ⅲ級(jí)BSL-4ABSL-4對(duì)人體有高度危險(xiǎn)性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明的微生物。尚無預(yù)防治療措施Ⅳ級(jí)第76頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三微生物危害程度分級(jí)

（國際分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)）危險(xiǎn)等級(jí)I

（低個(gè)體危害，低群體危害）不會(huì)導(dǎo)致健康工作者和動(dòng)物致病的細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。危險(xiǎn)等級(jí)Ⅱ

(中等個(gè)體危害，有限群體危害)能引起人或動(dòng)物發(fā)病，但一般情況下對(duì)健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會(huì)引起嚴(yán)重危害的病原體。實(shí)驗(yàn)室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險(xiǎn)有限。第77頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三微生物危害程度分級(jí)

（國際分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)）危險(xiǎn)等級(jí)III

（高個(gè)體危害，低群體害）能引起人類或動(dòng)物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶然接觸而在個(gè)體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原體。危險(xiǎn)等級(jí)Ⅳ

(高個(gè)體危害，高群體危害)能引起人類或動(dòng)物非常嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，或動(dòng)物與人，或人與動(dòng)物，或動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的病原體。第78頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三病原生物的危險(xiǎn)等級(jí)分布種類危害等級(jí)Ⅳ危害等級(jí)III危害等級(jí)Ⅱ危害等級(jí)I病毒185114219細(xì)菌311901真菌635寄生蟲1232第79頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三臨床檢驗(yàn)相關(guān)生物危險(xiǎn)等級(jí)分布第80頁，講稿共94頁，2023年5月2日，星期三常規(guī)操作和意外事故空氣中顆粒數(shù)

實(shí)驗(yàn)操作或事故顆粒數(shù)吸入30ml培養(yǎng)液至50ml試管中